曹力文，阿不都沙拉木·亞森江，姜君，孫美杰，申軍士，毛勝勇，朱偉云

(國家動物消化道營養(yǎng)國際聯(lián)合研究中心/江蘇省消化道營養(yǎng)與動物健康重點實驗室/南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院消化道微生物研究室，江蘇 南京 210095)

近年來，隨著我國畜牧業(yè)規(guī)模逐漸擴大，飼用豆粕需求連年增長，導(dǎo)致我國大豆進口量連年升高，在2020年我國大豆進口量更是突破了億噸大關(guān)。當(dāng)前我國迫切尋求解決蛋白質(zhì)飼料資源短缺的新方法和新途徑。反芻動物具有復(fù)雜的瘤胃微生物區(qū)系，可以將非蛋白氮(如尿素)轉(zhuǎn)化為優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)(微生物蛋白)。因此在反芻動物日糧中添加適量尿素不僅可以實現(xiàn)豆粕的減量替代和節(jié)本增效，同時能夠緩解我國蛋白質(zhì)飼料短缺的困局。但尿素在瘤胃內(nèi)的分解速度極快，往往超過可發(fā)酵碳水化合物發(fā)酵的速度，造成能氮的不平衡，降低了微生物蛋白的合成效率和尿素氮利用效率[1]。能氮的不同步釋放會造成瘤胃氨的積累，不僅會增加氨中毒的風(fēng)險，多余的氨隨尿液排出體外，還會造成尿素氮的浪費和對環(huán)境的污染[2-3]。為提高尿素飼喂的利用效率，一些研究致力于開發(fā)緩釋尿素技術(shù)，以促進能氮的同步釋放，提高微生物蛋白合成，同時降低氨排泄對環(huán)境造成的負面影響[4]。目前的緩釋尿素產(chǎn)品主要包括膨化尿素和包被尿素兩大類，其中包被尿素多采用天然聚合物或脂質(zhì)對尿素芯進行包覆，緩釋效果較膨化尿素更為出眾。一些使用包被尿素替代豆粕的前期研究發(fā)現(xiàn)，相比于普通尿素，緩釋尿素在高產(chǎn)奶牛瘤胃中顯著降低了氨釋放速率[5]。此外，日糧添加緩釋尿素還可以提高日糧干物質(zhì)、有機物和粗纖維的消化率[6]。在2項針對肉牛和奶牛的薈萃分析中發(fā)現(xiàn)，在以青貯玉米為粗飼料來源的日糧中添加緩釋尿素能夠提高肉牛的生長性能、提高經(jīng)濟效益[7]，而在奶牛日糧中使用緩釋尿素替代豆粕的同時增加能量飼料，可以提高產(chǎn)奶效率。上述研究發(fā)現(xiàn)，緩釋尿素能夠降低氨釋放速率，提高生產(chǎn)性能，但目前關(guān)于日糧添加緩釋尿素對反芻動物瘤胃菌群組成和結(jié)構(gòu)影響的研究較少。因此，本研究以育肥湖羊為研究對象，分別使用緩釋尿素和普通尿素替代豆粕，旨在探究緩釋尿素在瘤胃中的氨釋放模式和日糧添加緩釋尿素對育肥湖羊瘤胃代謝、血液生化和瘤胃菌群組成的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及材料

試驗動物：選取15只體重相近(25.7±1.3)kg，安裝有永久瘤胃瘺管的3～4月齡公湖羊，每只羊在單獨的欄中飼養(yǎng)。試驗原料為1種常規(guī)飼用級尿素和1種包被緩釋尿素(優(yōu)瑞丹，由上海美農(nóng)公司提供)，2種尿素的含氮量實測值分別為45.46%和41.50%。

1.2 試驗設(shè)計及日糧配方

按照隨機區(qū)組的設(shè)計原則將18只湖羊隨機平均分為3個處理組，即豆粕對照組(SBM)、普通尿素組(CU)和緩釋尿素組(SRU)。豆粕對照組飼喂含13%豆粕的日糧，根據(jù)等能等氮原則，普通尿素組和緩釋尿素組分別添加1%普通尿素和1.1%緩釋尿素替代日糧中7%和7.1%的豆粕，并使用玉米補充尿素缺乏的能量，保證各組日糧具有相近的粗蛋白和能量水平。日糧的營養(yǎng)成分滿足中國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的25 kg育肥羊的生長需求[8]。具體日糧組成和營養(yǎng)成分見表1。整個試驗過程分為2周的適應(yīng)期和4周的正式試驗期。每日8：00和18：00等量飼喂全混合日糧(TMR)，并保證5%～10%的剩料量，自由飲水。

1.3 體重、采食量、日增重測定

在正式試驗開始和試驗結(jié)束(第4周)時連續(xù)2 d于晨飼前準確稱量每只羊的體重，并記錄。試驗開始后，每天晨飼和晚飼前準確稱取飼喂量和剩料量以計算采食量。平均日增重=(末期平均體重-初始平均體重)/ 飼養(yǎng)時間間隔；日采食量=當(dāng)天飼喂飼料總重量-第二天早晨飼喂前剩料重量。

1.4 樣品采集

在試驗期每周分別采集3種日糧飼料樣品各500 g，試驗結(jié)束后充分混合通過四分法縮減為每份500 g的飼料樣品，并于-20 ℃密封保存，用于日糧營養(yǎng)成分的測定。于試驗期最后1周第7天晨飼后0、3 h，分別采集每只羊靜脈血10 mL，使用肝素鈉抗凝管收集血樣，3 000 r/min離心10 min后，取上清液凍存于-20 ℃，用于血漿生化指標的測定。于試驗期最后1周第6、7天晨飼后0、2、4、6、8、10 h分別采集瘤胃液20 mL，測定pH值后凍存于-20 ℃，用于氨濃度和揮發(fā)性脂肪酸的測定。于試驗期最后1周第6、7天晨飼后0、4 h采集瘤胃內(nèi)容物10 mL凍存于-20 ℃，用于瘤胃菌群的測定。

1.5 樣品測定

1.5.1 飼料成分的測定

尿素含氮量的測定：參照張麗英[9]的方法，取適量尿素加入10 mL濃硫酸420 ℃消煮3 h后，使用凱氏定氮儀測定樣品含氮量。飼料常規(guī)成分的測定：將飼料樣在65 ℃環(huán)境下烘干，粉碎并過40目篩，參照張麗英[9]的方法，在(105±2)℃烘箱中將飼料樣烘干至恒重以測定飼料中水分含量，取適量飼料樣進行消煮后使用凱氏定氮儀測定飼料中粗蛋白含量，采用索氏脂肪提出器用乙醚抽提飼料樣以測定飼料中粗脂肪含量，將飼料樣放入馬弗爐中經(jīng)550 ℃灼燒以測定飼料中粗灰分含量，分別將中性洗滌劑和酸性洗滌劑加入纖維分析儀中測定飼料中中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量。

1.5.2 瘤胃液發(fā)酵參數(shù)的測定

氨態(tài)氮濃度的測定：取發(fā)酵液樣品流水解凍，參照Marbach等[10]的方法，以氯化銨為標準品，用比色法進行氨態(tài)氮濃度的測定。揮發(fā)性脂肪酸的測定：取待測樣品，經(jīng)流水解凍后，參照秦為琳[11]的方法進行揮發(fā)性脂肪酸的測定。12 000 r/min離心10 min，取上清液經(jīng)0.22 μm針式過濾器過濾后，使用氣相色譜儀(日本，島津GC-2014C)進行測定，其中柱溫130 ℃，汽化溫度180 ℃，檢測溫度180 ℃，壓力為60 kPa，氫氣壓力為50 kPa，氧氣壓力50 kPa。

1.5.3 血漿生化指標的測定

通過全自動血液生化分析儀分別測定血尿素、血糖、總膽固醇、甘油三酯、總蛋白、白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的濃度。

1.5.4 瘤胃內(nèi)容物DNA的提取

取0.3 g瘤胃內(nèi)容物置于2 mL離心管，使用PBS清洗后，參照Zoetendal等[12]的方法，經(jīng)CTAB、Bead-beating(Biospec Products，Bartlesville，USA)、DNA提取液處理后，提取瘤胃微生物的總DNA。使用Nano-Drop 2000c分光光度計(Thermo Fisher Scientific，USA)檢測樣品DNA濃度(ng/μL)，保證樣品D260與D280的比值處于1.8～2.0之間，檢測后將樣品置于-20 ℃保存。

1.5.5 瘤胃內(nèi)容物細菌DNA擴增與高通量測序

選取細菌通用V3-V4可變區(qū)域為目的片段，對發(fā)酵液微生物DNA進行PCR擴增。在擴增過程中引入不同樣本的接頭Barcode(8 bp堿基序列)和測序引物(314F：5′-ACTCCTRCGGGAGGCAGCAG-3′和806R：5′-GGACTACCVGGGTATCTAAT-3′)。PCR擴增采用20 μL的反應(yīng)體系，反應(yīng)條件如下：95 ℃ 3 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，重復(fù)27個循環(huán)；72 ℃ 20 min。擴增完成后，采用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，檢驗合格的經(jīng)切膠后，采用試劑盒進行產(chǎn)物回收。回收后的PCR產(chǎn)物使用QuantiFluorTM-ST藍色熒光定量系統(tǒng)檢測定量后，按照測序要求進行Illumian MiSeq測序。

對所有測序后數(shù)據(jù)作如下處理：原始數(shù)據(jù)使用QIIME 1.9.10軟件進行片段拼接、質(zhì)量過濾和引物去除。使用Usearch軟件鑒定并去除嵌合序列后得到有效序列，按97%的序列相似性將有效序列聚類成不同分類操作單元(OTUs)，并將每個OTU的代表序列與Silva 16S rRNA數(shù)據(jù)庫進行比對、分類和注釋。參照Schloss等[13]的方法使用Mothur軟件對樣品進行α多樣性分析(包括：OTUs數(shù)、覆蓋率、豐富度指數(shù)和多樣性指數(shù))和主坐標分析(PCoA)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

瘤胃發(fā)酵參數(shù)和血液生化指標使用SPSS statistics ver.23軟件一般線性模型進行分析，日糧是主要影響因素。瘤胃微生物多樣性和門、屬水平相對豐度使用SPSS statistics ver.23軟件非參數(shù)檢驗進行分析，Tukey法進行多重比較，P≤0.05表現(xiàn)差異顯著，0.05

2 結(jié)果

2.1 育肥湖羊生長性能

如表2所示，試驗開始前，不同處理組育肥湖羊的初始體重?zé)o顯著差異(P=0.995)。經(jīng)過為期4周的飼喂，不同處理對育肥湖羊的平均日增重、干物質(zhì)采食和飼料利用率均無顯著影響(P>0.05)。

2.2 育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)

表3展示了晨飼后10 h內(nèi)瘤胃各項發(fā)酵參數(shù)的變化。育肥湖羊瘤胃各項發(fā)酵參數(shù)的濃度均不存在處理和時間的交互作用(P>0.05)。相比于豆粕對照組和普通尿素組，緩釋尿素組在數(shù)值上降低了瘤胃pH值，但差異不顯著(P>0.05)。如圖1所示，在晨飼后3個處理組的氨濃度均呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢。豆粕對照組和普通尿素組的氨濃度在晨飼后2 h時升至最高并迅速下降，而緩釋尿素組則維持了晨飼后2～4 h瘤胃內(nèi)氨濃度的穩(wěn)定。相比于豆粕對照組組，日糧添加普通尿素和緩釋尿素均顯著提高了瘤胃氨濃度(P<0.05)。如表3所示，相比于豆粕對照組和普通尿素組，日糧添加緩釋尿素對瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸、丙酸、異丁酸、異戊酸濃度均無顯著影響(P>0.05)。相比于普通尿素組，豆粕對照組和緩釋尿素組的瘤胃丁酸濃度顯著升高(P<0.05)，并且日糧添加普通尿素有降低瘤胃戊酸濃度的趨勢(P=0.06)。

表3 不同處理對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)動態(tài)變化的影響

2.3 育肥湖羊血液生化參數(shù)

表4展示了日糧添加緩釋尿素對育肥湖羊血液生化的影響。育肥湖羊的各項血液生化指標均不存在處理和時間的交互影響(P>0.05)。如表4所示，相比于豆粕對照組，緩釋尿素顯著提高了血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的濃度(P<0.05)，普通尿素組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶濃度與其余兩組無顯著差異。相比于豆粕對照組，普通尿素組顯著降低了γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶的濃度(P<0.05)，而緩釋尿素組的谷氨?；D(zhuǎn)移酶濃度位于兩組之間。此外，日糧添加緩釋尿素有降低育肥湖羊血尿素(P=0.06)和血糖濃度的趨勢(P=0.096)，日糧添加普通尿素有提高血液中膽固醇濃度的趨勢(P=0.053)。

表4 不同處理對育肥湖羊血液生化動態(tài)變化的影響

2.4 育肥湖羊瘤胃菌群豐富度和多樣性

表5展示了不同日糧處理對育肥湖羊瘤胃液菌群α多樣性的影響。α多樣性結(jié)果表明，晨飼后0 h和4 h時不同處理組間的育肥湖羊瘤胃液內(nèi)檢測出的OUTs數(shù)、Chao 1指數(shù)和Shannon指數(shù)均無顯著差異(P>0.05)。

表5 不同處理對育肥湖羊瘤胃細菌菌群α多樣性的影響

由圖2a可知，基于Bray-Curtis算法(ANOSIM：R=0.114 7，P=0.076)的PCoA分析結(jié)果顯示，晨飼后0 h各組間的瘤胃群落組成有分開的趨勢(P=0.076)。由圖2b可知，基于Bray-Curtis算法(ANOSIM：R=0.103 1，P=0.097)的PCoA分析結(jié)果顯示，晨飼后4 h各組間的瘤胃群落組成有分開的趨勢(P=0.097)。

圖2 晨飼后0 h(a)和4 h(b)瘤胃內(nèi)容物中細菌菌群的主坐標分析

2.5 育肥湖羊瘤胃細菌門、屬水平相對豐度

高通量測序結(jié)果顯示，在育肥湖羊瘤胃中一共檢測出7個相對豐度大于1%的門和15個相對豐度大于1%的屬。圖3展示了瘤胃微生物在門水平上的組成，瘤胃微生物主要由Bacteroidetes、Firmicutes、Spirochaetes、Fibrobacteres、Proteobacteria、Actinobacteria、Synergistota組成，不同日糧處理對門水平的瘤胃細菌均無顯著影響(P>0.05)。但在晨飼后4 h時，普通尿素組變形菌門的相對豐度有高于豆粕對照組和緩釋尿素組的趨勢(P=0.096)。3個處理組的優(yōu)勢菌門均為Bacteroidetes(44.40%～55.28%)和Firmicutes(33.24%～40.32%)，兩者相對豐度占84%以上。

圖3 不同處理組瘤胃細菌在門水平上的組成(>1%)

如圖4所示，在育肥湖羊晨飼后0、4 h的瘤胃內(nèi)容物中共檢測出了15個相對豐度大于1%的菌數(shù)。

圖4 不同處理組瘤胃細菌在屬水平上的組成(>1%)

各處理組的優(yōu)勢菌屬均為Prevotella1(21.49%～33.06%)，Rikenellaceae_RC9 gut(5.09%～8.05%)和ChristensenellaceaeR-7 group(5.57%～7.13%)。在晨飼后0 h，普通尿素組湖羊瘤胃內(nèi)Succiniclasticum的相對豐度顯著低于普通尿素組和緩釋尿素組(P<0.05，見圖5)，但在晨飼后4 h時不同處理組間Succiniclasticum相對豐度沒有顯著差異(P>0.05)。此外，不同處理沒有對其他相對豐度大于1%的菌屬產(chǎn)生顯著的影響(P>0.05)。

圖5 屬水平不同處理組間發(fā)生顯著改變的細菌

3 討論

3.1 日糧添加緩釋尿素對湖羊生長性能的影響

對于肉羊和肉牛來說，日增重和干物質(zhì)采食量是衡量生長性能的主要指標，而料重比是影響經(jīng)濟效益的關(guān)鍵因素。本研究與Mahmoudi-Abyane等[14]和Corte等[15]的研究結(jié)果相同，相比于普通尿素，緩釋尿素不能提高育肥羊的生長性能。先前的研究發(fā)現(xiàn)，在綿羊育肥期間，其干物質(zhì)采食量和養(yǎng)分消化率是決定日增重的關(guān)鍵因素[16]。在本研究中，不同處理組間湖羊的干物質(zhì)采食量沒有表現(xiàn)出差異，這可能導(dǎo)致了3個處理組在試驗期間具有相似的日增重和飼料利用效率。此外，本研究發(fā)現(xiàn)所有處理組的育肥湖羊采食量和日增重與前人研究相比均處于較低水平[17]，可能是由于本試驗為探究日糧添加尿素對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的動態(tài)變化，選用了瘺管羊進行試驗，瘤胃瘺管的安裝以及頻繁采樣導(dǎo)致了湖羊的應(yīng)激，從而對其生長性能造成了一定的負面影響。先前的研究表明，尿素的最適添加劑量為1%，此時具有最高的經(jīng)濟效益[18]。本試驗結(jié)果也表明，使用1%的尿素或1.1%緩釋尿素均可替代等氮含量的豆粕，但目前緩釋尿素價格高于普通尿素和豆粕，因此在反芻動物養(yǎng)殖中普通尿素可能是更好的選擇。

3.2 日糧添加緩釋尿素對湖羊瘤胃發(fā)酵的影響

要提高反芻動物對尿素氮的利用率，必須維持瘤胃內(nèi)適宜的氨濃度，促進日糧能氮的同步釋放。Hailemariam等[19]綜述前人研究發(fā)現(xiàn)，控制日糧中尿素水解產(chǎn)氨速率可以有效提高瘤胃微生物利用尿素氮合成菌體蛋白的效率。本研究發(fā)現(xiàn)，相比于普通尿素，在晨飼后前2 h緩釋尿素的水解產(chǎn)氨速率更低，說明緩釋尿素在瘤胃內(nèi)具有降低氨釋放速率的緩釋作用。同時飼喂緩釋尿素維持了晨飼后2～4 h瘤胃內(nèi)的高氨濃度，此時日糧中可發(fā)酵碳水化合物大量發(fā)酵，維持瘤胃內(nèi)氨濃度的穩(wěn)定更有助于微生物的合成[20]。此外，3個處理的日糧粗蛋白水平接近，但日糧添加普通尿素和緩釋尿素均提高了瘤胃氨濃度，這可能是由于部分蛋白質(zhì)飼料(DDGS等)沒有在瘤胃中分解，而尿素是百分百的瘤胃可降解蛋白，導(dǎo)致普通尿素組和緩釋尿素組氨濃度的升高。大部分研究認為瘤胃最適氨濃度應(yīng)處于8～32 mg/dL之間[21-23]，本研究的尿素添加劑量與前人研究得出的最適尿素添加劑量相同[24]，故3個處理組的氨濃度均在最適氨濃度之間。

健康的反芻動物瘤胃pH值通常接近中性，保持動態(tài)平衡，以保證瘤胃內(nèi)微生物、酶活性處在正常狀態(tài)[25]。本研究中3個處理組的瘤胃pH值均在6.2～6.4之間，且無顯著差異，表明各組瘤胃內(nèi)環(huán)境都處于穩(wěn)定狀態(tài)。在本研究中除日糧氮源不同外，嚴格控制采食時間、動物年齡和日糧營養(yǎng)成分、精粗比保持一致，且試驗過程中各組瘤胃pH值相近，瘤胃菌群結(jié)構(gòu)沒有顯著差異，這可能導(dǎo)致不同氮源對總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸和丙酸的合成均無顯著影響。本研究發(fā)現(xiàn)普通尿素組的丁酸濃度顯著降低，丁酸除供能外，還用于脂肪組織和乳腺組織的脂肪酸合成，利用效率可達80%以上[26]。這可能是由于普通尿素在瘤胃內(nèi)快速降解，造成晨飼后0～4 h瘤胃氨濃度劇烈變化，抑制了瘤胃內(nèi)產(chǎn)丁酸菌的繁殖，從而降低了丁酸水平，后續(xù)可通過細菌定量進行進一步探究。因此普通尿素組湖羊日增重在數(shù)值上降低的部分原因可能是瘤胃丁酸水平較低。

3.3 日糧添加緩釋尿素對湖羊血液生化的影響

血漿代謝物的濃度綜合反映了機體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用和機體的健康情況[27]。在本試驗中，不同處理組間湖羊的各項血液生化指標均在健康羊的標準范圍內(nèi)，這說明所有處理均沒有對試驗羊的代謝和健康產(chǎn)生負面影響[28]。肝臟是尿素循環(huán)的主要場所，血漿中的氨在肝臟轉(zhuǎn)化為尿素，后經(jīng)腎臟隨尿液排出或回到瘤胃用于合成微生物蛋白。瘤胃氨濃度過高會導(dǎo)致氨穿過瘤胃上皮進入血液中，升高血氨濃度，加重肝臟工作負擔(dān)。在本研究中，緩釋尿素組的血尿素水平有降低的趨勢，與Holder等[29]得出的結(jié)果一致，這表明與普通尿素比，飼喂緩釋尿素的中毒風(fēng)險更低。反芻動物的血糖濃度與機體的糖異生作用密切相關(guān)，而生糖前體物含量的多少決定了機體糖異生作用的強弱[30]。在反芻動物體內(nèi)，丙酸是唯一的生糖揮發(fā)酸，由于不同處理組育肥湖羊瘤胃內(nèi)丙酸濃度相近，所以兩者之間血糖水平也沒有顯著差異。血漿內(nèi)白蛋白和總蛋白的水平反映了動物機體體液免疫和蛋白質(zhì)合成的能力[31]。在本試驗中，不同處理組間育肥湖羊的血漿總蛋白和白蛋白濃度均無顯著，且3組育肥湖羊的血液總蛋白和白蛋白濃度均處于正常范圍內(nèi)，說明湖羊免疫功能正常，日糧添加普通尿素和緩釋尿素均不會對機體產(chǎn)生不利影響。

3.4 日糧添加緩釋尿素對湖羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響

本研究高通量結(jié)果顯示，不同處理沒有影響瘤胃細菌的豐富度指數(shù)和多樣性指數(shù)，與Ishaq等[32]在羔羊日糧中添加尿素得到的結(jié)果相同，這表明因日糧中尿素的種類對瘤胃菌群多樣性和豐富度均無顯著影響。此外，PCoA分析結(jié)果顯示，不同處理組間瘤胃細菌群落并未顯著分開。本試驗中湖羊瘤胃菌群的α、β多樣性均無顯著差異，這與之前Guo等[33]借助人工瘤胃裝置評價緩釋尿素得出的結(jié)果一致，說明日糧添加緩釋尿素并不會改變瘤胃細菌菌群的組成和結(jié)構(gòu)。本研究相對豐度結(jié)果顯示，不同處理的育肥湖羊瘤胃優(yōu)勢菌門均為Bacteroidetes和Firmicutes，這與前人[34-36]的研究結(jié)果相一致。瘤胃內(nèi)Bacteroidetes和Firmicutes協(xié)同參與碳水化合物和蛋白質(zhì)的消化代謝[37]，在瘤胃營養(yǎng)物質(zhì)消化代謝過程中共同發(fā)揮著重要作用。而在屬水平，本研究發(fā)現(xiàn)Prevotella、Christensenellaceae_R-7 group、Rikenellaceae_RC9 gut group和Ruminococcus為優(yōu)勢菌屬。這些細菌都屬于核心菌屬，在所有反芻動物中均有發(fā)現(xiàn)，并且他們在瘤胃菌群的代謝和功能中起著至關(guān)重要的作用[38]。Prevotella和Ruminococcuss是纖維素和半纖維素降解的優(yōu)勢菌種[39]，Christensenellaceae_R-7 group被認為是潛在的益生菌，同時是腸道疾病的潛在生物標志物[40]。在一項針對肉羊的研究中發(fā)現(xiàn)，Rikenellaceae_RC9 gut group的豐度與肉中脂肪含量、丁酸和異丁酸呈現(xiàn)顯著正相關(guān)，這表明Rikenellaceae_RC9 gut group可能具有通過調(diào)控丁酸合成促進脂肪沉積的作用[41]。在本研究中，雖然不同處理組間Rikenellaceae_RC9 gut group的相對豐度沒有顯著差異，但相比于普通尿素，飼喂緩釋尿素顯著提高了丁酸濃度，并且在數(shù)值上提高了日增重，說明日糧添加緩釋尿素可能促進了Rikenellaceae_RC9 gut group的生長，需要進一步通過細菌定量進行確定。此外，在本研究中發(fā)現(xiàn)在晨飼后0 h和4 h，普通尿素組湖羊瘤胃Succiniclasticum的相對豐度顯著低于其余兩組。Succiniclasticum可以利用其他瘤胃微生物發(fā)酵產(chǎn)生的二次產(chǎn)物琥珀酸，并將其轉(zhuǎn)化為乙酸和丙酸，這可能是日糧添加緩釋尿素在數(shù)值上提高了乙酸濃度的原因。

4 結(jié)論

日糧添緩釋尿素對育肥湖羊生長性能和機體健康沒有產(chǎn)生負面影響。相比于普通尿素，緩釋尿素表現(xiàn)出了良好的瘤胃緩釋效果，降低了瘤胃內(nèi)氨濃度。等氮當(dāng)量條件下，使用不同的非蛋白氮(普通尿素和緩釋尿素)替代豆粕對育肥湖羊的瘤胃菌群組成和結(jié)構(gòu)沒有顯著影響。