張國華 呂思文 李亞南 邢思毅 張 備 王麗坤 薛沾枚 張 艷 李 燁 沈思思 張建勝 朱啟濤 鐘 鵬 史同瑞* 金振華*

(1. 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)分院,齊齊哈爾 161005;2.齊齊哈爾市龍沙區(qū)農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊,齊齊哈爾 161005;3.山東信得科技股份有限公司,青島 266101;4.內(nèi)蒙古圣牧高科牧業(yè)有限公司,呼和浩特 010000)

豬繁殖與呼吸障礙綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),又稱藍耳病,是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(PRRSV)引起的,是一種可導致母豬出現(xiàn)流產(chǎn)等癥狀并且會導致仔豬出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病的傳染病,嚴重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展,降低養(yǎng)殖戶(場)的經(jīng)濟效益[1]。1987年,PRRS首先由美國學者進行報道,隨后在世界多地均有豬類似疾病癥狀的報道,我國于1995年首次爆發(fā)這種疾病[2]。由于PRRS的傳染性高、病豬長期帶毒、持續(xù)感染等特點導致該病難以根除,目前對于PRRS的防控主要以豬群臨床穩(wěn)定和控制繼發(fā)感染為主[3]。

在我國畜禽飼料全面禁抗的大環(huán)境下,毒副作用小、療效顯著、兼具藥效和營養(yǎng)功能的中藥添加劑越來越受到人們的重視,多糖作為中藥的主要成分起到至關重要的作用[4]。香菇多糖其主要作用成分是從香菇子中提取的β-葡聚糖,生產(chǎn)應用中具有營養(yǎng)和藥物的雙重作用,其有效成分可增加動物的免疫力,降低應激反應,提高動物的抗疾病能力[5]。研究顯示,香菇多糖在機體抗氧化、降低應激反應、抗菌、抗腫瘤等多個方面都表現(xiàn)出良好的效果,并且其作為一種免疫調(diào)節(jié)劑,可以有效地增加感染細胞的免疫能力,對于抑制病毒起到了一定的作用,尤其是對于流感病毒、腺病毒等具有很好的防控作用[6-8]。七清敗毒顆粒由黃芩、虎杖、苦參、白頭翁、板藍根、大青葉、綿馬貫眾7味中藥組成,其主要成分為黃芩苷,有研究顯示黃芪苷具有調(diào)整動物機體代謝的功效,同時還可以起到控制病毒復制、殺滅病毒的作用,對PRRS具有很好的防控作用[9-10]。

集約化養(yǎng)殖環(huán)境下,為了追求生產(chǎn)效益,豬群高密度飼養(yǎng)且大量使用抗生素等藥物,豬群肝腎損傷嚴重,亞健康問題普遍,仔豬帶毒情況突出。按照中獸醫(yī)辯證思維,正氣受損導致免疫力下降,邪氣轉盛導致病原侵入,豬群帶毒是豬群疾病高發(fā)的主要因素。扶正祛邪,增免排毒,是中獸醫(yī)防控疾病的思路。因此,本研究將香菇多糖和七清敗毒顆粒在某集團化豬場進行應用,監(jiān)測應用后對母豬繁殖性能、血清生化指標、PRRSV抗體水平、仔豬臍帶血中PRRSV載量的影響,以期可以更好地了解香菇多糖等中藥添加劑對豬場母豬繁殖性能、血清生化指標及PRRS的防控效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

香菇多糖:含有2.50%香菇多糖,0.15%低聚葡聚糖、0.10%低聚木糖、0.03%低聚半乳糖等。

七清敗毒顆粒:主要由黃芩、虎杖、苦參、白頭翁、板藍根、大青葉、綿馬貫眾組成,主要成分和含量為1.0%黃芩苷、0.1%大黃素、0.1%虎杖苷等。

主要試劑:HerdCheck PRRS X3抗體檢測試劑盒、RealPCR NA PRRS Type 1 and Type 2 Multiplex RNA TestPRRS試劑盒購自愛德士生物科技有限公司。QIAamp?Viral RNA Mini Kit試劑盒購自德國凱杰試劑有限公司。谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、尿素(UN)等測定試劑盒購自深圳雷杜生命科學股份有限公司。

試驗設備:全自動生化分析儀(BS220,深圳邁瑞醫(yī)療器械有限公司)、酶標儀(ST-360,科華儀器設備有限公司)、移液器(艾本德儀器設備有限公司)、熒光定量PCR儀(ABI7500,美國應用生物系統(tǒng)公司)、微量紫外分光光度計(Nanodrop 2000,賽默飛儀器有限公司)。

1.2 試驗設計

試驗動物選自某集團豬場的美系二元雜交母豬(豬場存在PRRS感染)。選取3～4胎次、體重為(268.00±33.59) kg的母豬100頭,隨機分為2組(每組5個重復,每個重復10頭母豬),分別為對照組和試驗組。對照組飼喂基礎飼糧,試驗組在基礎飼糧中添加2.5 g/(頭·d)香菇多糖+5.0 g/(頭·d)七清敗毒顆粒,試驗期間每使用15 d,間隔15 d,試驗期為90 d?；A飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 母豬繁殖性能測定

試驗期間記錄母豬繁殖數(shù)據(jù),包括窩均產(chǎn)仔數(shù)、窩均活仔數(shù)、窩均死胎數(shù)、仔豬出生窩均重、仔豬斷奶窩均重,計算斷奶窩均增重、平均日增重,計算公式如下:

斷奶窩增重=仔豬斷奶窩重-仔豬初始窩重;平均日增重=(仔豬斷奶窩重-仔豬初始窩重)/30。

1.4 母豬血清生化指標測定

在試驗第0(試驗開始當天)、30和90天06:30,每組空腹采集每頭母豬靜脈血5 mL,4 000 r/min離心10 min得到血清。應用全自動生化分析儀(BS220)進行血清生化指標檢測,所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行操作,檢測項目包括血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量。

1.5 母豬PRRSV抗體檢測

在試驗第0、30、90天06:30,每組空腹采集每頭母豬靜脈血5 mL,4 000 r/min離心10 min得到血清。應用ST360酶標儀檢測PRRS抗體,所有操作嚴格按照HerdCheck PRRS X3抗體檢測試劑盒說明書進行。結果判讀標準如下:當S/P值<0.4判定為陰性結果,S/P值>0.4判定為陽性結果。離散度根據(jù)檢測到的S/P值,用Excel 2019計算。

1.6 仔豬臍帶血PRRSV抗原檢測

試驗母豬產(chǎn)仔后,隨機抽取試驗組仔豬臍帶血10份,對照組仔豬臍帶血10份,試劑盒提取RNA后Nanodrop 2000紫外分光光度計測定濃度,將RNA樣本稀釋至2 ng/mL,進行反轉錄后應用熒光定量PCR儀(ABI7500)檢測仔豬臍帶血PRRSV抗原載體情況,所有操作程序嚴格按照PRRS抗原檢測試劑盒說明書進行。結果判讀標準如下:當FAM通道Ct值<38且陰性對照無信號,VIC通路有信號時判定為感染歐洲型PRRS;當Cy5通道Ct值<38且陰性對照無信號,VIC通路有信號時判定為感染美洲型PRRS;當FAM通道、Cy5通道、VIC通路均無信號時判定為無效結果,需要重新進行檢測。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)應用Excel 2019進行記錄,采用SPSS 26.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,組間差異差異性采用t檢驗進行分析,數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示。P<0.05視為差異顯著,P<0.01視為差異極顯著,P>0.05則視為不具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬繁殖性能的影響

如表2所示,與對照組相比,試驗組窩均產(chǎn)仔數(shù)極顯著提高了4.77%(P<0.01),窩均活仔數(shù)無顯著差異(P>0.05),窩均死胎數(shù)極顯著降低了34.51%(P<0.01);試驗組仔豬出生窩均重無顯著差異(P>0.05),仔豬斷奶窩均重極顯著提高了6.56%(P<0.01),斷奶窩均增重極顯著提高了6.35%(P<0.01),平均日增重極顯著提高了6.41%(P<0.01)。

表2 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬繁殖性能的影響

2.2 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬血清生化指標的影響

如表3所示,第0天,與對照組相比,試驗組血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量無顯著差異(P>0.05)。第30天,與對照組相比,試驗組血清AST活性顯著降低了13.22%(P<0.05),血清ALT活性及TBIL、UN含量無顯著差異(P>0.05)。第90天,與對照組相比,試驗組血清ALT活性顯著降低了17.51%(P<0.05),血清AST活性顯著降低了17.08%(P<0.05),血清TBIL含量顯著降低了22.22%(P<0.05),血清UN含量極顯著降低了42.09%(P<0.01)。

表3 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬血清生化指標的影響

2.3 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬PRRS抗體檢測結果的影響

如表4所示,第0天,與對照組相比,試驗組的S/P均值無顯著差異(P>0.05);對照組離散度為35.90%,試驗組離散度為37.60%。第30天,與對照組相比,試驗組的S/P均值極顯著降低了23.11%(P<0.01);對照組離散度為40.94%,試驗組離散度為28.64%。第90天,與對照組相比,試驗組的S/P均值極顯著降低了23.57%(P<0.01);對照組離散度為55.90%,試驗組離散度為32.90%。

表4 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬PRRS抗體檢測結果的影響

續(xù)表4時間 Time項目Items對照組Control group 試驗組Test groupP值P-value離散度 Dispersion/%40.9428.64S/P≥2.5204第90天0.4≤S/P<2.58096Day 90S/P<0.400S/P均值 Mean value of S/P1.57±0.72a1.20±0.46b0.017 7離散度 Dispersion/%55.9032.90

2.4 香菇多糖和七清敗毒顆粒對仔豬臍帶血PRRS抗原檢測的影響

如圖1、表5所示,對照組仔豬臍帶血PRRS抗原檢測結果1號樣本Cy5通道的Ct值為27.45,3號樣本Cy5通道的Ct值為32.19,其余樣本未檢測到Ct值,仔豬臍帶血PRRS抗原陽性率為10%。試驗組仔豬臍帶血PRRS抗原檢測未檢測到Ct值,抗原陽性率為0。

ΔRn為PCR產(chǎn)物量;Cycle為反應循環(huán)數(shù)。

3 討 論

3.1 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬繁殖性能的影響

母豬繁殖性能受到飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)、疾病、環(huán)境等因素的影響。其中營養(yǎng)水平和疾病對母豬的繁殖性能起到了十分重要的影響。仔豬在斷奶前的生長狀態(tài)與母豬分泌乳汁的情況、環(huán)境以及自身免疫力有著很大的影響。毛湘冰等[11]報道,在飼糧中添加香菇多糖可以有效提高斷奶大鼠的生產(chǎn)性能、抗氧化能力以及改善腸道形態(tài)結構以及菌群結構。胡海燕[12]報道,飼糧中添加香菇多糖對攻毒輪狀病毒的仔豬具有提高生長性能、增加免疫力等作用。Mao等[13]報道,在飼糧中添加香菇多糖可以改善仔豬的腸道菌群結構,增加短鏈脂肪酸的合成,減少感染輪狀病毒仔豬腹瀉。香菇多糖應用于仔豬可以有效地提升血清葡萄糖含量,降低血清尿素的含量,說明營養(yǎng)狀況和蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)物情況良好,可提高仔豬的生長性能[14]。本研究結果顯示,將香菇多糖和七清敗毒顆粒添加至飼糧中可以提高窩均產(chǎn)子數(shù)、窩均活子數(shù),降低窩均死胎數(shù),并且可以提高仔豬的平均日增重,與之前的報道結果相符,說明在飼糧中添加香菇多糖和七清敗毒顆?？梢杂行У靥岣吣肛i的繁殖性能。

3.2 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬血清生化指標的影響

血清生化指標可以對動物的營養(yǎng)代謝情況以及身體健康狀況起到指示的作用,其中ALT、AST活性及TBIL、UN含量可以在一定程度上反映動物的肝腎功能。當動物肝腎功能受到損傷的時候,這幾項指標可能會出現(xiàn)快速上升。李建房等[15]研究顯示,應用甘草多糖16 d后仔豬的血清堿性磷酸酶(ALP)活性、肌酐(CRE)含量顯著降低。單舒萱等[16]將蒲公英多糖飼喂肉雞,觀察到血清ALP活性及UN、CRE含量極顯著降低。盤道興等[17]將三七渣飼喂文山牛,觀察到試驗組的血清生化指標如AST、ALP、乳酸脫氫酶(LDH)活性顯著低于對照組。這說明中藥類物質(zhì)可以影響動物的部分血清生化指標,與本研究的結果相一致。本研究中,第30天,試驗組血清AST活性顯著低于對照組,第90天,試驗組血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量均顯著低于對照組,說明試驗組在應用香菇多糖和七清敗毒顆粒一段時間后可以對母豬的部分血清生化指標起到調(diào)節(jié)的作用。

表5 仔豬臍帶血PRRSV抗原檢測結果(Ct值)

3.3 香菇多糖和七清敗毒顆粒對母豬PRRSV抗體檢測結果的影響

母豬PRRSV抗體檢測結果可以通過抗體陽性率S/P均值、離散度進行評估。當S/P大于2.5時為抗體強陽性,提示可能已經(jīng)感染PRRSV,S/P均值小于2.0,抗體水平相對整齊,離散度較低時說明豬群的整體健康狀況較好。中藥制劑在營養(yǎng)和藥物作用下對PRRS的預防和治療起到了重要的作用[18]。繆世東[19]研究表明,七清敗毒顆粒的應用可以有效提高存在PRRS感染的養(yǎng)殖場PRRS抗體均勻度,并且可以有效地降低PRRS的發(fā)生,體外試驗表明,七清敗毒顆粒主要以直接滅活病毒和阻斷病毒吸附、穿入細胞的方式起到抗PRRSV的作用。陳曉蘭等[20]研究表明,中藥多糖飼喂蛋雞聯(lián)合PRRS疫苗進行免疫,使體內(nèi)B細胞通過對抗原的識別、活化、增殖,最后分化成漿細胞并分泌抗體,抗體進入血液循環(huán)從輸卵管上皮層分泌濾泡至卵黃內(nèi),從而獲得的卵黃抗體效價更好。陳天澤[21]研究表明,將板藍根應用于抗體強陽性的后備母豬可通過免疫調(diào)節(jié)提高免疫細胞數(shù)量與活性等功能,有效地降低S/P均值,減少陽性比值。本研究將香菇多糖和七清敗毒顆粒和母豬PRRSV抗體檢測結果相關聯(lián),在第90天后,試驗組S/P均值大于2.5的占比由20%降至4%,S/P均值由1.77降至1.20,離散度由37.6%降至32.9%,抗體的波峰呈正態(tài)分布,說明應用香菇多糖和七清敗毒顆粒后豬群PRRSV抗體的整體穩(wěn)定性有所提高。PRRSV抗體檢測強陽性的豬下降明顯,說明應用香菇多糖和七清敗毒顆?？梢杂行У馗纳曝i的健康狀況,提高母豬利用率,減少母豬的淘汰。

3.4 香菇多糖和七清敗毒顆粒對仔豬臍帶血PRRS抗原檢測的影響

采集臍帶血具有操作方便、不易產(chǎn)生應激、經(jīng)濟損失小的優(yōu)點?；疾游锏哪殠а泻心阁w的病原體,可以對相關的疾病進行預測和監(jiān)控,PRRSV作為一種重要的垂直傳播病毒,檢測仔豬臍帶血可以在一定程度上反映出母豬PRRSV感染情況,也為仔豬PRRS的防控和凈化提供了更多的科學依據(jù)[22]。實時熒光定量PCR可檢測多種豬傳染病病原,如豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒、PRRSV等,通過應用實時熒光定量PCR法檢測仔豬臍帶血中的PRRSV可以更準確地對仔豬是否載有PRRSV進行檢測,其準確度和靈敏度都高于普通PCR[23-24]。李晨[10]研究表明,七清敗毒顆粒可以降低肺組織PRRSV載量,通過抑制PRRSV在體內(nèi)的復制減輕肺臟損傷。袁小陵等[25]研究表明,七清敗毒顆粒免疫增效劑和功能性保肝劑,所含的黃芩、虎杖、白頭翁等具有燥濕止痢、抗菌殺毒、健脾開胃的功能,雞飼喂0.23 g/(只·d)七清敗毒顆?？梢詫π鲁且逨48E9株具有很好的防控作用。本次檢測使用的PRRSV實時熒光定量PCR試劑盒可對美洲型以及歐洲型進行區(qū)分,我們可以針對檢測結果對該集團化豬場PRRS進行更好的免疫,提高豬群的PRRS免疫力。本研究中,試驗仔豬臍帶血試驗組PRRSV實時熒光定量PCR抗原檢出率為0,對照組檢出率為10%,且對照組檢出的陽性樣本均為美洲型,說明該集團化豬場存在PRRSV美洲型的感染,需要進行有效的防控,通過應用香菇多糖和七清敗毒顆?？梢杂行У亟档妥胸i臍帶血PRRSV陽性率,降低經(jīng)濟損失。

4 結 論

妊娠母豬飼糧中添加香菇多糖和七清敗毒顆?？梢杂行岣吣肛i的繁殖性能,顯著降低血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量,降低豬群PRRSV抗體S/P均值,降低仔豬PRRSV攜帶率,在提高豬群生產(chǎn)成績、防控PRRS方面有著重要意義。