王夢(mèng)麗，韓利紅，麻佑鋒，鄭其帆，3 ，王若熹

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院, 河南 新鄉(xiāng) 453003;2.洛陽市中心醫(yī)院呼吸與危重癥科, 河南 洛陽 471009;3.鄭州大學(xué),河南 鄭州 450001)

肺癌在中國(guó)的發(fā)病率和病死率均較高[1]。根據(jù)病理類型,肺癌可以分為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小細(xì)胞肺癌。肺腺癌的發(fā)生率占NSCLC的40%～50%,在許多國(guó)家肺腺癌已超過肺鱗狀細(xì)胞癌成為最常見的類型[1]。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是肺腺癌患者死亡的重要原因,晚期肺腺癌患者的5 a生存率不足5%[2]。目前,肺腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未完全明確。外泌體是細(xì)胞分泌的具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的納米級(jí)囊泡狀物質(zhì),直徑30～200 nm,廣泛存在于體液中,在細(xì)胞間通訊起到關(guān)鍵作用[3]。有研究發(fā)現(xiàn),外泌體與慢性呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后等密切相關(guān)[4]。在惡性腫瘤微環(huán)境中,外泌體還可靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA、蛋白等水平,從而改變細(xì)胞的生物學(xué)特性[5]。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)可以通過外泌體參與腫瘤微環(huán)境的調(diào)控,為腫瘤維持穩(wěn)定的微環(huán)境,有利于消化系統(tǒng)惡性腫瘤如食管癌[6]、胰腺癌[7]、胃癌[8]細(xì)胞的增殖以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。然而,關(guān)于CAFs外泌體對(duì)肺腺癌影響的相關(guān)研究較少。基于此,本研究旨在探討CAFs外泌體對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響及機(jī)制,以期為深入了解外泌體在肺腺癌發(fā)展和預(yù)后中的作用及機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、組織及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

肺癌細(xì)胞株A549(肺腺癌細(xì)胞系)購自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫,由洛陽市中心醫(yī)院轉(zhuǎn)化中心實(shí)驗(yàn)室保存。5～6周齡雌性無胸腺裸鼠(BALB/c)購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。肺癌組織和癌旁組織標(biāo)本取自洛陽市中心醫(yī)院胸外科收治的10例肺腺癌患者;患者術(shù)前未經(jīng)過任何治療,術(shù)后經(jīng)病理切片證實(shí)為肺腺癌;患者和家屬均知情同意并簽署知情同意書,本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均經(jīng)醫(yī)院動(dòng)物養(yǎng)護(hù)使用委員會(huì)批準(zhǔn),按《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)護(hù)使用指南》進(jìn)行,處理后的裸鼠按照鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體及廢棄物處理管理辦法》進(jìn)行安全處理。

1.2 主要試劑與儀器

高糖達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium,DMEM)、胎牛血清購自美國(guó)Gibco公司,外泌體專用培養(yǎng)基購自上海Umibio生物科技公司,胰蛋白酶消化液、青-鏈霉素混合液購自北京索萊寶科技有限公司,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、電化學(xué)發(fā)光(electrochemiluminescence,ECL)試劑、蛋白定量試劑盒、十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)凝膠試劑盒、細(xì)胞裂解液、結(jié)晶紫、膠原酶Ⅰ、蛋白酶抑制劑及上皮鈣黏素(E-cadherin,E-cad)、神經(jīng)鈣黏素(N-cadherin,N-cad)、波形蛋白(Vimentin,VIM)、磷酸酯酶與張力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、成纖維細(xì)胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一抗和辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗均購自北京碧云天生物技術(shù)有限公司,CD63、腫瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylated phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B, p-Akt)一抗購自美國(guó)Proteintech公司。細(xì)胞級(jí)二氧化碳培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀購自美國(guó)Thermo Fisher公司,高速低溫離心機(jī)購自德國(guó)Eppendorf公司,電子顯微鏡購自荷蘭Philips公司,凝膠成像分析系統(tǒng)購自美國(guó)Bio-Rad公司,蛋白轉(zhuǎn)印儀、電泳儀購自美國(guó)Hoefer公司,超凈工作臺(tái)購自蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司,倒置熒光顯微鏡購自德國(guó)Leica公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 原代CAFs和正常成纖維細(xì)胞(normal fibroblasts,NFs)的分離和培養(yǎng)

將肺腺癌患者切除的肺癌組織和癌旁組織放入預(yù)先處理好的凍存管。迅速在超凈臺(tái)中分別取出肺癌組織和癌旁組織,用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)沖洗,并剪成1 mm×1 mm×1 mm的組織塊,移至離心管中,加入膠原酶Ⅰ和胰酶充分水浴消化,加入含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM終止消化,收集細(xì)胞懸液并離心,將細(xì)胞沉淀用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM重懸,加入紅細(xì)胞裂解液,轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),分別得到原代CAFs和NFs。

1.3.2 差速離心法提取CAFs外泌體和NFs外泌體

待CAFs和NFs生長(zhǎng)到約70%匯合度,PBS清洗,分別加入外泌體專用培養(yǎng)基培養(yǎng),孵育2～3 d,收集35 mL細(xì)胞培養(yǎng)上清液用于外泌體提取;分別將收集的CAFs、NFs細(xì)胞培養(yǎng)上清液加入50 mL離心管中,2 000×g離心15 min,收集上清,于高速冷凍離心機(jī)中 4 ℃、10 000×g離心30 min,收集上清,用 0.22 μm針式濾器過濾;將過濾后的上清轉(zhuǎn)移到超速離心機(jī)專用離心管中,4 ℃、120 000×g離心90 min,棄上清,沉淀分別為CAFs外泌體及NFs外泌體,用PBS重懸外泌體沉淀,并于-80 ℃保存。

1.3.3 細(xì)胞分組及處理

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞,隨機(jī)分為對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組,NFs外泌體組、CAFs外泌體組細(xì)胞分別加入NFs外泌體、CAFs外泌體孵育,外泌體終質(zhì)量濃度為10 mg·L-1;對(duì)照組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。外泌體孵育48 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.4 CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力

取對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度至5×107L-1,分別接種至3個(gè)96 孔板中,每孔100 μL,每組3個(gè)復(fù)孔。將各組細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),分別于培養(yǎng)24、48、72 h時(shí)取出96孔板,每孔加入20 μL CCK-8溶液,37 ℃條件下孵育2 h,使用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔在波長(zhǎng)450 nm 處的吸光度值,以吸光度值表示細(xì)胞的增殖能力。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取均值。

1.3.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力

取對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度至4×107L-1,分別接種至6孔板中,每孔 100 μL,每組2個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)24 h后,用1 000 μL 無菌槍頭在每孔做“1”字劃痕,棄去舊培養(yǎng)基,用PBS順著劃痕方向沖洗散落在劃痕中的脫落細(xì)胞,棄去PBS,各組細(xì)胞加入相應(yīng)培養(yǎng)基,用倒置顯微鏡對(duì)各孔中劃線位置進(jìn)行拍照,并記為0 h。置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48 h后,選擇同一劃線位置間隔拍照,應(yīng)用Image J軟件分析各圖中劃痕愈合面積,并計(jì)算劃痕愈合率,劃痕愈合率=[0 h劃痕寬度-24 h(48 h)劃痕寬度]/0 h劃痕寬度。劃痕愈合率越高表示細(xì)胞遷移能力越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取均值。

1.3.6 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力

取Transwell小室,將20 μL 4 ℃過夜融化后的Matrigel基質(zhì)膠平鋪于Transwell小室中,置于37 ℃培養(yǎng)箱中凝固2 h。取對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組細(xì)胞,用不含血清的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至1×108L-1,吸取100 μL接種至小室(上室)中,下室(24 孔板)加入600 μL含體積分?jǐn)?shù)10% 胎牛血清的DMEM,然后將 24 孔板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育48 h,棄去小室中的培養(yǎng)液,加入結(jié)晶紫染色10 min,顯微鏡下觀察,視野中被結(jié)晶紫染色的細(xì)胞即為侵襲細(xì)胞,隨機(jī)選取3個(gè)視野計(jì)數(shù)侵襲細(xì)胞數(shù),取均值。以侵襲細(xì)胞數(shù)表示細(xì)胞侵襲能力。

1.3.7 Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中PTEN/PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相關(guān)蛋白表達(dá)

取對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組細(xì)胞,胰蛋白酶消化,PBS洗滌,加入細(xì)胞裂解液,冰上裂解30 min,離心后收集沉淀,使用蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量。取 20 μg蛋白加入等體積上樣緩沖液,沸水水浴10 min使蛋白變性,然后進(jìn)行SDS-PAGE電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉,用含吐溫20 的Tris緩沖生理鹽水(Tris-buffered saline and tween-20,TBST)洗膜,加入GAPDH (滴度為12 500)、PI3K (滴度為11 000)、p-PI3K (滴度為11 000)、Akt (滴度為110 000)、p-Akt(滴度為110 000)、E-cad(滴度為11 000)、N-cad (滴度為11 000)、VIM(滴度為11 000)一抗, 4 ℃ 孵育過夜,TBST 洗膜,加入山羊抗兔二抗(滴度為11 000)室溫孵育1 h,TBST 洗膜后,按照ECL試劑盒說明書配置發(fā)光液,加入發(fā)光液,使用凝膠成像系統(tǒng)暗室中曝光并拍照,用Image J軟件分析各蛋白條帶灰度值,以目的蛋白灰度值與內(nèi)參GAPDH灰度值比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取均值。

1.3.8 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)外泌體對(duì)小鼠肺腺癌腫瘤生長(zhǎng)的影響

采用隨機(jī)數(shù)字表法將15只裸鼠分為A549裸鼠組、NFs外泌體裸鼠組、CAFs外泌體裸鼠組,每組5只。將對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組細(xì)胞分別移植到A549裸鼠組、NFs外泌體裸鼠組、CAFs外泌體裸鼠組小鼠左側(cè)腋下,每只小鼠接種細(xì)胞數(shù)為1×107個(gè),每周觀察各組小鼠的成瘤情況,外泌體接種后第1～5周用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量裸鼠皮下腫瘤的長(zhǎng)徑、寬徑、高,并計(jì)算腫瘤體積,腫瘤體積=π/6×長(zhǎng)徑×寬徑×高;外泌體接種6周后解剖所有小鼠,分離腫瘤組織,測(cè)量腫瘤體積。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 3組細(xì)胞增殖能力比較

培養(yǎng)24 h時(shí),3組細(xì)胞的增殖能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。培養(yǎng)48、72 h時(shí),CAFs外泌體組細(xì)胞的增殖能力顯著高于NFs外泌體組和對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 培養(yǎng)48、72 h 時(shí),對(duì)照組與NFs外泌體組細(xì)胞的增殖能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表1。

表1 3組細(xì)胞增殖能力比較Tab.1 Comparison of cell proliferation ability among the three groups

2.2 3組細(xì)胞遷移能力比較

培養(yǎng)24、48 h時(shí),CAFs外泌體組細(xì)胞的遷移能力顯著高于NFs外泌體組和對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。培養(yǎng)24、48 h時(shí),NFs外泌體組與對(duì)照組細(xì)胞的遷移能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見圖1和表2。

圖1 3組細(xì)胞遷移情況(×40)Fig.1 Migration of cells in the three groups(×40)

表2 3組細(xì)胞遷移能力比較Tab.2 Comparison of migration ability of cells among the three groups

2.3 3組細(xì)胞侵襲能力比較

對(duì)照組、NFs外泌體組、CAFs外泌體組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為173.3±6.522、174.75±6.584、179.45±4.454。 CAFs外泌體組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著多于NFs外泌體組和對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。NFs外泌體組與對(duì)照組侵襲細(xì)胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見圖2。

圖2 3組細(xì)胞侵襲情況(結(jié)晶紫染色,×100)Fig.2 Invasion of cells in the three groups (crystal violet staining,×100)

2.4 3組細(xì)胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

CAFs外泌體組細(xì)胞中N-cad、VIM蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組和NFs外泌體組,E-cad蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組和NFs外泌體組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NFs外泌體組與對(duì)照組細(xì)胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見圖3和表3。

A:對(duì)照組;B:NFs外泌體組;C:CAFs外泌體組。

表3 3組細(xì)胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相對(duì)表達(dá)量比較Tab.3 Comparison of relative expression levels of N-cad,VIM and E-cad protein in the cells among the three groups

2.5 3組細(xì)胞中PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

CAFs外泌體組細(xì)胞中PTEN蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組和NFs外泌體組,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值顯著高于對(duì)照組和NFs外泌體組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NFs外泌體組與對(duì)照組細(xì)胞中PTEN蛋白相對(duì)表達(dá)量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見圖4和表4。

A:對(duì)照組;B:NFs外泌體組;C:CAFs外泌體組。

表4 3組細(xì)胞中PTEN蛋白相對(duì)表達(dá)量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值比較Tab.4 Comparison of relative expression level of PTEN protein and the ratio of p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt in cells among the three groups

2.6 3組小鼠腫瘤體積比較

移植第1周,3組小鼠的腫瘤體積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。移植第2～6周,CAFs外泌體裸鼠組小鼠的腫瘤體積顯著大于A549裸鼠組和NFs外泌體裸鼠組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。移植第2～6周,NFs外泌體裸鼠組與A549裸鼠組小鼠的腫瘤體積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表5。

表5 3組小鼠腫瘤體積比較Tab.5 Comparison of tumor volume of mice among the three groups

3 討論

體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明,CAFs可通過分泌多種物質(zhì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[9-10]。肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展是多階段、多因素、多基因共同作用的復(fù)雜過程,其發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未完全明確。目前,CAFs外泌體對(duì)肺腺癌的影響尚未明確[11]。

GUO等[12]研究發(fā)現(xiàn),成纖維細(xì)胞來源的外泌體中微RNA369通過神經(jīng)纖維蛋白-1介導(dǎo)的絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路增強(qiáng)肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的遷移和侵襲。本研究通過將CAFs和NFs來源的外泌體與A549細(xì)胞共培養(yǎng),探討CAFs外泌體對(duì)肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響,結(jié)果顯示,培養(yǎng)48、72 h時(shí),CAFs外泌體組細(xì)胞的增殖能力顯著高于NFs外泌體組和對(duì)照組,對(duì)照組與NFs外泌體組細(xì)胞的增殖能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;培養(yǎng)24、48 h時(shí),CAFs外泌體組細(xì)胞的遷移能力顯著高于NFs外泌體組和對(duì)照組,NFs外泌體組與對(duì)照組細(xì)胞的遷移能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CAFs外泌體組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著多于NFs外泌體組和對(duì)照組,NFs外泌體組與對(duì)照組的侵襲細(xì)胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;這說明,CAFs細(xì)胞分泌的外泌體能夠顯著促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,即促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。

EMT是上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過程,在癌癥的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[13]。JOSSON等[14]研究顯示,前列腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞可通過釋放外泌體誘導(dǎo)EMT的發(fā)生,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示,CAFs外泌體組細(xì)胞中間質(zhì)化相關(guān)蛋白N-cad、VIM相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組和NFs外泌體組,上皮樣相關(guān)蛋白E-cad蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組和NFs外泌體組;NFs外泌體組與對(duì)照組細(xì)胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;表明,CAFs外泌體促進(jìn)了肺腺癌細(xì)胞的EMT。

PTEN/PI3K/Akt通路與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān),PI3K被激活時(shí),可進(jìn)一步激活蛋白激酶Akt,從而引起腫瘤的異常轉(zhuǎn)化、加速腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),促進(jìn)腫瘤血管新生,導(dǎo)致腫瘤的惡性程度增加[15]。抑癌蛋白PTEN為磷酸酶,可使Akt去磷酸化,從而阻止Akt調(diào)控的下游信號(hào)傳導(dǎo)事件,是PI3K的負(fù)向調(diào)節(jié)因子,在腫瘤抑制中發(fā)揮重要作用,如胃癌[16]和骨髓瘤[17]。 PTEN 的功能可能受基因突變、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和翻譯后修飾的調(diào)控[18]。 PTEN 的缺失或 PTEN 表達(dá)水平和活性的降低與 NSCLC 患者的總體生存期較短有關(guān)[19]。本研究結(jié)果顯示,CAFs外泌體組細(xì)胞中PTEN蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組和NFs外泌體組,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt值顯著高于對(duì)照組和NFs外泌體組;提示,CAFs外泌體在體外通過下調(diào)PTEN表達(dá),激活PI3K/Akt信號(hào)通路,從而促進(jìn)肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。此外,本研究還進(jìn)行了裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,移植第2～6周,CAFs外泌體裸鼠組小鼠的腫瘤體積顯著高于A549裸鼠組和NFs外泌體裸鼠組,NFs外泌體裸鼠組與A549裸鼠組小鼠的腫瘤體積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;表明,CAFs外泌體在裸鼠體內(nèi)促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)。

4 結(jié)論

CAFs外泌體可促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,在小鼠體內(nèi)促進(jìn)肺腺癌的生長(zhǎng),其機(jī)制可能與EMT和PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)。本研究為進(jìn)一步研究CAFs外泌體在肺腺癌中的作用機(jī)制提供了一定的理論依據(jù),然而,外泌體中何種物質(zhì)對(duì)PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路進(jìn)行靶向調(diào)控尚不清楚,還需進(jìn)一步研究。