李娜,李惠,陳倩倩,王娜,鄔麗琴,潘竟海,趙亞男

(巴彥淖爾市產(chǎn)品質(zhì)量計(jì)量檢測(cè)中心, 內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000)

任何測(cè)量都存在不確定度,測(cè)量不確定度是被測(cè)量客觀值在某一量值范圍內(nèi)的一個(gè)評(píng)定[1]。任何檢驗(yàn)結(jié)果都會(huì)在真值附近偏離,不確定度直接反映出檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。不確定度量值越小檢測(cè)結(jié)果越接近于真值。不確定度表征合理的賦予被測(cè)量值的分散性由多個(gè)分量組成,測(cè)量結(jié)果為被測(cè)量值的最佳估計(jì)[2]。是目前社會(huì)上普遍認(rèn)可和建議使用的藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)手段[3]。在藥品檢驗(yàn)過程中存在很多測(cè)量過程,而測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性直接決定著藥品質(zhì)量的品質(zhì)。當(dāng)需要根據(jù)藥品分析檢驗(yàn)結(jié)果做出決策判斷時(shí),檢測(cè)結(jié)果的可靠性是非常關(guān)鍵的。藥品檢驗(yàn)是藥品監(jiān)管工作的重要技術(shù)支持,檢測(cè)結(jié)果對(duì)藥品監(jiān)管的公正性有直接的影響。藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)使用經(jīng)典誤差理論方法計(jì)算檢測(cè)結(jié)果誤差的方法,有一定的局限性,因此藥品檢測(cè)結(jié)果不確定度開始逐步運(yùn)用于藥學(xué)領(lǐng)域[4]。不確定度評(píng)定對(duì)客觀評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量可靠性非常重要。不確定度評(píng)定在我國藥品檢測(cè)中的認(rèn)識(shí)和應(yīng)用是從實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證認(rèn)可起步的。2003年中國實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可委員會(huì)對(duì)認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室提出不確定度測(cè)量方面的相關(guān)要求[5],推動(dòng)了不確定度評(píng)定在藥品檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用。隨后一些科研院所將不確定度評(píng)定引入到藥品研究和藥品標(biāo)準(zhǔn)制定的過程中。經(jīng)過多年的應(yīng)用積累,不確定度評(píng)定現(xiàn)如今已經(jīng)進(jìn)入到藥品分析的日常工作。目前不確定度在藥品質(zhì)量分析評(píng)價(jià)方面應(yīng)用非常廣泛,藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)人員將不確定度評(píng)定作為藥品質(zhì)量分析的重要工作內(nèi)容?？傊?不確定度評(píng)定既可以對(duì)藥品檢驗(yàn)過程進(jìn)行分析,確定藥品檢驗(yàn)的關(guān)鍵影響因素,可以有效地提高藥品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性及權(quán)威性[6-9],又可以為不同實(shí)驗(yàn)室、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)儀器之間的數(shù)據(jù)認(rèn)可提供統(tǒng)一的標(biāo)尺[10]。 美羅培南是一種可以抑制細(xì)胞壁形成的具有抗菌作用的廣譜碳青霉素烯類抗生素[11-12]。1994年,美羅培南以商品名“Mepem?”在意大利上市,1999年在中國境內(nèi)上市,商品名為“美 平”(規(guī)格0.5 g)。2020年,深圳市海濱制藥有限公司生產(chǎn)的注射用美羅培南在國內(nèi)首家通過仿制藥質(zhì)量與療效的一致性評(píng)價(jià)[13]。注射用美羅培南為美羅培南和無水碳酸鈉按處方比例無菌分裝制成,臨床多用于治療混合感染和嚴(yán)重感染[14]。

據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局?jǐn)?shù)據(jù)查詢可知,目前國內(nèi)注射用美羅培南批準(zhǔn)文號(hào)27個(gè)。本文依據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH 12332020 、CNAS-GL006—2019《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[15]、JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[16]分析評(píng)定注射用美羅培南含量測(cè)定不確定度,以提高注射劑含量測(cè)定的準(zhǔn)確性,強(qiáng)化藥品生產(chǎn)質(zhì)量,為藥品監(jiān)管工作提供強(qiáng)有力的技術(shù)性支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

e26958高效液相色譜儀、梅特勒CPA224S電子天平。美羅培南對(duì)照品(批號(hào)130506-202004,純度86.8%)。注射用美羅培南;色譜純乙腈;優(yōu)級(jí)純磷酸;分析純?nèi)野?娃哈哈純凈水。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent C18(5 μm,4.6 mm×250 mm) ;以0.1%三乙胺溶液-乙腈(體積比為93.5∶6.5)為流動(dòng)相;檢測(cè)器:二極管陣列檢測(cè)器;檢測(cè)波長為220 nm; 進(jìn)樣量10 μL;柱溫: 30 ℃;流速:1.0 mL·min-1。

1.2.2 測(cè)定方法

供試品溶液 取本品10瓶,分別加適量水溶解,用流動(dòng)相溶解并定量稀釋至100 mL量瓶中,搖勻。精密量取5 mL置50 mL量瓶中,制成每1 mL中含美羅培南(按C17H25N3O5S計(jì))0.5 mg的溶液,作為供試品溶液。對(duì)照品溶液 另取美羅培南對(duì)照品適量置25 mL量瓶中,加流動(dòng)相溶解并定量稀釋至刻度,制成每1 mL中含美羅培南0.5 mg的溶液。

1.3 測(cè)量模型

依據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH12332020的規(guī)定,按照高效液相色譜法測(cè)定注射用美羅培南含量的數(shù)學(xué)模型如下:

(1)

X:供試品標(biāo)示百分含量,%;AX:供試品的峰面積;AR:對(duì)照品的峰面積;MR:對(duì)照品取樣量g;VX1:供試品第一次稀釋體積mL;VX2:供試品第二次稀釋體積mL;VR:對(duì)照品稀釋體積mL;B:規(guī)格(0.5g/瓶);PR:對(duì)照品純度;V量:供試品溶液量取體積。

都市生態(tài)的內(nèi)涵十分豐富，除了自然生態(tài)之外，還涉及到了都市的人文生態(tài)，因此都市生態(tài)不僅關(guān)系著城市居民的生活環(huán)境質(zhì)量，同時(shí)也影響著其精神層面的發(fā)展[1]。通常情況下，我們會(huì)將都市生態(tài)分為兩個(gè)部分，其中自然生態(tài)即是指城市環(huán)境，人文生態(tài)則是指一些歷史遺留的古建筑和非物質(zhì)文化遺產(chǎn)。當(dāng)前階段的市政工程管理存在明顯的片面性，普遍存在重視自然生態(tài)保護(hù)，忽視人文生態(tài)保護(hù)的情況，對(duì)文化遺產(chǎn)的繼承發(fā)展造成了嚴(yán)重的阻礙。

由高效液相色譜法測(cè)定注射用美羅培南含量測(cè)定的數(shù)學(xué)模型可知,方法的重復(fù)性,供試品的峰面積AX,對(duì)照品的峰面積AR,對(duì)照品取樣量MR,供試品稀釋體積VX,對(duì)照品稀釋體積VR等是不確定度的主要來源。

2 不確定度評(píng)定

2.1 對(duì)照品的不確定度

2.1.1 對(duì)照品稱量的相對(duì)不確定度urel(MR)

天平允差和天平示值變動(dòng)是美羅培南對(duì)照品稱量過程中的不確定度來源。由MR代表美羅培南對(duì)照品的取樣量,采用B類方法對(duì)其進(jìn)行評(píng)定。

天平允差不確定度u1(MR)和天平示值變動(dòng)引起的不確定度u2(MR):通過查看電子天平檢定證書可知,MS205DU天平檢定證書示值最大允差為±0.000 05 g,假設(shè)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度時(shí)采用的是矩形分布。天平重復(fù)性誤差為±0.000 1 g,計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度時(shí)假設(shè)采用的是矩形分布則:

(2)

(3)

(4)

美羅培南對(duì)照品平行稱量2份,因此,對(duì)照品稱量分別引入的相對(duì)不確定度為:

(5)

(6)

(7)

2.1.2 對(duì)照品定容體積相對(duì)不確定度urel(VR)

容量瓶校準(zhǔn)和溫度變化對(duì)對(duì)照品溶液體積VR的不確定度產(chǎn)生影響,假設(shè)采用B類方法對(duì)其進(jìn)行評(píng)定。容量瓶體積:25 mL容量瓶(A級(jí))最大容量誤差為±0.03 mL,計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度時(shí)假設(shè)是三角形分布:

(8)

(9)

容量瓶體積和溫度效應(yīng)兩個(gè)分量引起的對(duì)照品體積相對(duì)不確定度

(10)

色譜峰測(cè)定重復(fù)性體現(xiàn)了高效液相色譜儀對(duì)測(cè)定結(jié)果不確定度的影響。實(shí)驗(yàn)中對(duì)兩份美羅培南對(duì)照品分別進(jìn)樣3針,2針共計(jì)進(jìn)樣5針,按峰面積計(jì)。由于對(duì)照品重復(fù)性測(cè)量次數(shù)較少,因此采用A類極差法方法對(duì)其進(jìn)行評(píng)定[14]。美羅培南對(duì)照品1重復(fù)進(jìn)樣2針峰面積4 505 590和4 521 719,平均峰面積4 513 654,極差16 129。對(duì)照品2重復(fù)進(jìn)樣3針峰面積為4 563 481,4 577 231,4 586 035,平均峰面積4 575 582,極差22 554。

對(duì)照品1重復(fù)進(jìn)樣引起的相對(duì)不確定度urel(AR1):

(11)

(12)

(14)

(15)

2.2 供試品不確定度

2.2.1 供試品稀釋體積VX相對(duì)不確定度urel1(VX)和urel2(VX)

容量瓶校準(zhǔn)和溫度變化對(duì)對(duì)照品溶液體積VR的不確定度產(chǎn)生影響,采用B類方法對(duì)其進(jìn)行評(píng)定。供試品定容到100 mL量瓶中產(chǎn)生的相對(duì)不確定度用ur1(VX)表示,精密量取5 mL到50 mL量瓶中產(chǎn)生的相對(duì)不確定度用ur2(VX)表示。

容量瓶體積:100 ml容量瓶(A級(jí))和50 mL容量瓶(A級(jí))最大容量誤差分別為±0.1 mL和±0.05 mL,計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度時(shí)假設(shè)是三角形分布,則:

(16)

(17)

溫度效應(yīng):容量瓶的體積膨脹遠(yuǎn)小于液體的體積膨脹,因此忽略液體的體積膨脹對(duì)不確定的影響。實(shí)驗(yàn)室的溫度波動(dòng)范圍在±2 ℃之間,水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃,100 mL和50 mL容量瓶計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度時(shí)假設(shè)是矩形分布,則:

(18)

(19)

(20)

(21)

2.2.2 供試品量取體積V量相對(duì)不確定度urel1(V量)

同理,由上述供試品稀釋體分析可知,5 mL移液管體積和溫度分別引入的不確定度為:

(22)

(23)

(24)

2.3 測(cè)量方法重復(fù)性相對(duì)不確定度urel(rep)

取注射用美羅培南10瓶,制成試品溶液測(cè)定含量,測(cè)得結(jié)果為97.89%,100.20%,97.36%,98.95%,100.10%,96.43%,99.26%,101.88%,98.03%,96.43%。由上述測(cè)量結(jié)果可知平均含量為98.65%,標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.76。

(25)

2.4 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

(26)

2.5 擴(kuò)展不確定度

假設(shè)為正態(tài)分布時(shí),概率p為0.95時(shí)k=2,則注射用美羅培南含量測(cè)定擴(kuò)展不確定度

(27)

3 結(jié)果

根據(jù)上述不確定度分析結(jié)果可知,注射用美羅培南含量測(cè)定結(jié)果為98.65%±1.61% ,第二項(xiàng)為U95之值。由上述不確定度分析結(jié)果可知,對(duì)照品稱量、供試品溶液精密量取體積和對(duì)照品峰面積對(duì)此次含量測(cè)定結(jié)果存在較大的影響。提示測(cè)量儀器的精密度、靈敏度、檢驗(yàn)人員稱量規(guī)范性等儀器和檢驗(yàn)操作細(xì)節(jié)是影響檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素。建議開展藥品檢驗(yàn)前需確保檢驗(yàn)儀器檢定校準(zhǔn)的合格性,加強(qiáng)對(duì)檢驗(yàn)過程中涉及的精密儀器的日常維護(hù)保養(yǎng)工作,確保藥品檢驗(yàn)過程中檢驗(yàn)儀器的最佳工作狀態(tài)。藥品檢驗(yàn)工作中優(yōu)先選擇高精密度的電子稱量天平或者通過增加對(duì)照品取用量、減少對(duì)照品和供試品溶液的稀釋步驟的方式來提高對(duì)照品稱量和供試品溶液制備的準(zhǔn)確度。建議在開展藥品分析檢驗(yàn)的過程中盡量選用高純度的標(biāo)準(zhǔn)品、使用精密的定容量具(A級(jí)或允差較小的器具)開展實(shí)驗(yàn)并注重控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件。同時(shí)通過藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)需不斷地通過開展內(nèi)外部培訓(xùn)不斷提高藥品檢驗(yàn)人員專業(yè)素質(zhì),強(qiáng)化藥品檢驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)操作技能。盡可能減少檢驗(yàn)過程中對(duì)不確定度影響貢獻(xiàn)大的實(shí)驗(yàn)因素,提高藥品檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。藥品質(zhì)量分析不確定度的評(píng)定有助于藥品檢驗(yàn)人員清晰地了解藥品檢驗(yàn)過程中的不同影響因子。并利用不確定度評(píng)定結(jié)果和來源分析有針對(duì)性地制定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制計(jì)劃,保障和提升實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)?zāi)芰退?。尤其是?dāng)藥品檢驗(yàn)結(jié)果接近藥品限度邊緣時(shí),有助于檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析研判保障。同時(shí)還可以為藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制修訂提供合理的科學(xué)依據(jù)。