黃飛 孔瓊瓊

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，隨著人們飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，近年來胃癌發(fā)病率呈不斷上升趨勢，嚴重影響患者身心健康[1]。早期胃癌癥狀不明顯，臨床表現(xiàn)缺乏特異性，因此早期診斷率較低[2-3]。探究胃癌可能發(fā)病機制、治療手段及預后評價是當前研究重點。微衛(wèi)星DNA 主要指人類基因組中隨機分布的重復的、短的、廣泛的DNA 序列。錯配修復（mismatch repair，MMR）通路系統(tǒng)由一系列因特異性修復DNA 堿基錯配的錯配形成修復蛋白組成，可提高DNA復制準確性、糾正堿基錯配、減少自發(fā)突變；MMR 基因是一類高度保守的管家基因，其表達缺失導致的微衛(wèi)星不穩(wěn)定在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要意義[4-5]。MMR基因表達錯配修復蛋白，現(xiàn)階段發(fā)現(xiàn)的錯配修復蛋白主要包括MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 等。本研究探討胃癌組織MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 等4 種錯配修復蛋白表達意義及與患者病理特征的關(guān)系，以期為臨床診斷和治療胃癌提供參考。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2021 年6 月至2022 年6 月浙江省舟山醫(yī)院收治的101 例胃癌患者臨床病理資料，收集經(jīng)手術(shù)切除的胃癌組織及配對癌旁組織并制作病理標本。101 例患者中男56 例，女45 例；年齡32～75（60.42±8.27）歲；高、中分化64 例，低分化37 例。納入標準：（1）符合《胃癌診療規(guī)范（2018 年版）》[6]關(guān)于胃癌標準；（2）經(jīng)病理檢查證實為胃癌；（3）臨床資料完整。排除標準：（1）伴其他部位惡性腫瘤者；（2）手術(shù)治療禁忌者；（3）精神疾病者；（4）合并自身免疫性疾病、內(nèi)分泌疾病及嚴重心腦血管疾病者；（5）術(shù)前已行放療或化療治療者；（6）肝腎功能不全者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審查通過[批準文號：（2023）倫審第（055）號]，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法 采用免疫組化法。取患者胃癌組織及癌旁組織，4%甲醛固定，石蠟包埋后切片，4 μm/片，嚴格依據(jù)免疫組化SP 染色試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，批號：20121）說明書檢測標本蛋白陽性率。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 蛋白均定位于細胞核。每張切片選取5 個不重疊視野，200 倍顯微鏡下觀察，計算細胞總數(shù)和陽性（染色）細胞數(shù)，計算陽性細胞比例，根據(jù)染色強度評分和陽性細胞比例評分作綜合評價。細胞無著色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；無陽性細胞為0 分，陽性細胞比例≤10%為1 分，11%～30%為2 分，31%～50%為3 分，＞50%為4 分。兩項評分相乘所得總分值即為最終評分：≥10 分表示強陽性（+++），7～9 分表示中陽性（++），4～6分表示弱陽性（+），≤3 分表示陰性（-）。陽性率=（弱陽性+中陽性+強陽性）切片數(shù)/總切片數(shù)×100%。

1.3 觀察指標 （1）比較癌組織與癌旁組織MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白陽性率；（2）比較性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、浸潤深度等不同病理特征胃癌患者組織MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白陽性率。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織與癌旁組織4 種錯配修復蛋白陽性率比較 胃癌組織MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白陽性率均高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 胃癌組織與癌旁組織4種錯配修復蛋白陽性率比較[例（%）]

2.2 不同病理特征胃癌患者MLH1 和MSH2 蛋白陽性率比較 不同性別、年齡、腫瘤直徑和分化程度胃癌患者組織MLH1 和MSH2 蛋白陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）；Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者組織MLH1 和MSH2 蛋白陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者組織MLH1 和MSH2 蛋白陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，浸潤至肌層/漿膜層胃癌患者組織MLH1 和MSH2 蛋白陽性率高于浸潤至黏膜/黏膜下層患者，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），見表2。

2.3 不同病理特征胃癌患者MSH6 和PMS2 蛋白陽性率比較 不同性別、年齡、腫瘤直徑和分化程度胃癌患者組織MSH6 和PMS2 蛋白陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）；Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者組織MSH6和PMS2 蛋白陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者組織MSH6 和PMS2 蛋白陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，浸潤至肌層/漿膜層胃癌患者組織MSH6 和PMS2 蛋白陽性率高于浸潤至黏膜/黏膜下層患者，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），見表3。

3 討論

胃癌的主要臨床表現(xiàn)有食欲下降、飽脹、疼痛及體質(zhì)量減輕等，病死率和發(fā)病率均較高，嚴重威脅人類生命健康[7-9]。胃癌具有高度異質(zhì)性，其發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的、多途徑、多因素的變化過程[10-11]。隨著診斷及時、靶向治療及手術(shù)治療等發(fā)展，早期胃癌患者生存率明顯提升，但中晚期胃癌患者預后仍不理想[12]。胃癌發(fā)病機制涉及腸上皮化生、慢性萎縮性或活動性胃炎、幽門螺桿菌感染等。作為慢性增殖性疾病，胃癌以多種遺傳及表觀遺傳的異常改變?yōu)樘卣?，即是一種基因表達異常的疾病[13-15]。近年來研究顯示，微衛(wèi)星不穩(wěn)定與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系緊密，并且被認為是繼抑癌基因失活和原癌基因激活后造成腫瘤形成的新機制[16]。

微衛(wèi)星不穩(wěn)定主要是因MMR 基因功能障礙導致的少數(shù)核苷酸的缺失或插入、并以此出現(xiàn)DNA 復制錯誤。微衛(wèi)星不穩(wěn)定表現(xiàn)的腫瘤細胞無法檢測錯配和正確修復的DNA，導致大量DNA 復制錯誤并獲得額外突變，引起腫瘤的發(fā)生[17]。人類MMR 系統(tǒng)基因主要包括MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 等家族成員，MLH1 基因的表達缺失是造成微衛(wèi)星不穩(wěn)定型胃癌的重要機制；由MSH2 和MSH6 蛋白形成的異二聚體可結(jié)合單堿基錯配/缺失環(huán)；由MLH1 和PMS2 形成的異二聚體與錯配識別蛋白MutSα/β 結(jié)合以啟動修復[18-19]。李陽明等[20]對2 622 例胃癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，MMR 蛋白表達缺失146 例，其中MLH1 表達缺失120 例、MSH2 表達缺失14例、MSH6 表達缺失8 例、PMS2 表達缺失116 例，且與患者神經(jīng)侵犯、N 分期和臨床分期密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示胃癌組織MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白陽性率高于癌旁組織，表明胃癌患者MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白表達異常升高；不同性別、年齡、腫瘤直徑和分化程度胃癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2蛋白陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義，即胃癌患者MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白表達與性別、年齡、腫瘤直徑和分化程度無關(guān)；Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，浸潤至肌層/漿膜層胃癌患者組織MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2蛋白陽性率高于浸潤至黏膜/黏膜下層患者，即胃癌患者MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白表達與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)。

綜上所述，胃癌組織MLH1、MSH2、MSH6 和PMS2蛋白高表達，且與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)。