邱小翠 吳燕 韓燕媚 云笑

妊娠期高血壓疾病（hypertensive disorders of pregnancy，HDP）是一種妊娠期間出現(xiàn)的并發(fā)癥，可造成早產(chǎn)、胎兒發(fā)育遲緩等不良妊娠結(jié)局[1-3]。目前關(guān)于HDP的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，有研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤、血管內(nèi)皮損傷以及表觀遺傳等均與HDP 有關(guān)[4-6]。炎性細(xì)胞因子如IL-6、IL-8 及TNF-α參與調(diào)節(jié)母胎免疫反應(yīng)，在HDP 發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[7-9]。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）BCYRN1 是一種＞200 個(gè)核苷酸的核酸序列，通過多條信號通路調(diào)節(jié)胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力，進(jìn)而影響胎盤功能，導(dǎo)致子癇前期發(fā)生[10]。lncRNA BCYRN1 在HDP 中的應(yīng)用價(jià)值尚未清楚，本研究通過檢測血清lncRNA BCYRN1 在HDP 患者中的表達(dá)情況，分析其在預(yù)測疾病嚴(yán)重程度及不良妊娠結(jié)局中的臨床價(jià)值，以期為HDP的防治提供參考。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2020 年1 月至2022 年12 月?？谑袐D幼保健院收治的170 例HDP 患者，年齡23～45（28.96±3.52）歲，孕周34～41（37.65±1.53）周。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）HDP診斷參考《妊娠期高血壓疾病診治指南（2020）》[11]；（2）年齡＞18 歲，均為單胎妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）孕前存在高血壓或糖尿病，非自然受孕，多胎妊娠或胎兒發(fā)育畸形；（2）合并心肺疾病、惡性腫瘤、血液病或免疫性疾病。另選取同期產(chǎn)檢正常孕婦50 名作為對照組，年齡22～40（28.50±2.83）歲，孕周36～39（37.40±1.28）周。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查通過，所有受檢者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 臨床分組 根據(jù)HDP 患者病情嚴(yán)重程度分為妊娠期高血壓（gestational hypertension，GH）組45 例，輕度子癇前期（mild preeclampsia，MPE）組70 例，重度子癇前期（severe preeclampsia，SPE）組55 例。記錄HDP患者出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局情況，其中不良妊娠結(jié)局62 例（早產(chǎn)17 例、胎兒生長受限8 例、胎兒宮內(nèi)窘迫23 例、胎盤早剝6 例、新生兒窒息6 例、死胎/死產(chǎn)2 例），妊娠結(jié)局良好108 例。

1.2.2 檢測指標(biāo) 所有受檢者均在妊娠22 周時(shí)采集空腹靜脈血5 mL，以3 500 r/min 離心10 min，分離血清置于-80 ℃冰箱保存待檢。采用TRIzol 法提取總RNA，采用熒光定量PCR 法檢測lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平，lncRNA BCYRN1 引物序列：F-5'-GACGAACGACGTCAGGTCGA-3'，R-5'-TCAGAACTGTCTAGGCGATC-3'；反應(yīng)條件為：94 ℃變性15 s，55 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，40 個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA BCYRN1 相對表達(dá)量。另使用ELISA 法檢測血清IL-6、IL-8、TNF-α水平，試劑盒購自深圳晶美生物工程公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。繪制ROC曲線分析血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平在預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局中的價(jià)值，AUC 比較采用Z檢驗(yàn)。采用多因素logistic 回歸分析影響HDP患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HDP 組和對照組一般臨床資料比較 HDP 組收縮壓、舒張壓、血肌酐及24 h 蛋白尿均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見表1。

表1 HDP 組和對照組一般臨床資料比較

2.2 HDP 組和對照組血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL- 8、TNF- α 水平比較 HDP 組血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平顯著低于對照組，血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見表2。

表2 HDP 組和對照組血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比較

2.3 不同嚴(yán)重程度HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比較 SPE 組和MPE 組血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平明顯低于GH 組，且SPE 組低于MPE 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。SPE組和MPE 組血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明顯高于GH 組，且SPE 組高于MPE 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見表3。

表3 不同嚴(yán)重程度HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比較

2.4 不同妊娠結(jié)局HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比較 不良妊娠結(jié)局組血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平明顯低于妊娠結(jié)局良好組，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明顯高于妊娠結(jié)局良好組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見表4。

表4 不同妊娠結(jié)局HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比較

2.5 影響HDP患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素分析 以HDP 患者是否發(fā)生不良妊娠結(jié)局為因變量，以所有影響因素為自變量進(jìn)行多因素logistic 回歸分析，結(jié)果顯示血肌酐（OR=1.725，95%CI：1.207～3.316）、24 h蛋白尿（OR=1.951，95%CI：1.360～4.205）、lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平（OR=3.117，95%CI：2.524～9.328）、IL-6 水平（OR=2.483，95%CI：1.695～5.940）、IL-8水平（OR=2.713，95%CI：1.902～6.827）及TNF-α水平（OR=1.992，95%CI：1.458～4.792）是影響HDP 患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素（均P＜0.01），見表5。

表5 影響HDP 患者不良妊娠結(jié)局的多因素logistic 分析

2.6 lncRNA BCYRN1 預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局的價(jià)值 以HDP 患者最終發(fā)生不良妊娠結(jié)局為金標(biāo)準(zhǔn)，未發(fā)生不良結(jié)局的孕婦為參照組，結(jié)果顯示，血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局的最佳截?cái)嘀禐?.35，其AUC 大于IL-6（Z=6.217，P＜0.01）、IL-8（Z=7.105，P＜0.01）及TNF-α（Z=8.316，P＜0.01），靈敏度為0.857，特異度為0.842，見表6。

表6 lncRNA BCYRN1 預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局的價(jià)值

3 討論

HDP 是妊娠期婦女特有疾病，也是造成孕婦和圍生兒發(fā)病和死亡的主要原因之一，嚴(yán)重威脅母嬰健康[12-14]。因此，如何早期預(yù)防HDP 發(fā)生不良妊娠結(jié)局顯得尤為重要。近年來研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞炎性因子作為重要的炎癥介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子，在HDP 的發(fā)生、發(fā)展中扮演了重要的角色[15-16]。IL-6、IL-8 及TNF-α 是常見的炎性因子，參與炎性反應(yīng)和誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生其他炎癥介質(zhì)，具有損傷內(nèi)皮細(xì)胞及激活氧化應(yīng)激的能力[17]。曹明等[18]發(fā)現(xiàn)相比對照組，IL-6、IL-8 及TNF-α 在HDP 患者中明顯升高，這些炎性因子通過損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞和誘導(dǎo)滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致胎盤功能受損，從而誘發(fā)HDP。lncRNA BCYRN1 是由人類染色體2p16 編碼的非編碼RNA 分子，調(diào)節(jié)多種生物學(xué)功能，可在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平及蛋白水平調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，與呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)疾病有著密切的關(guān)聯(lián)[19]。Wu 等[20]研究發(fā)現(xiàn)，與正常組織相比，lncRNA BCYRN1 在卵巢癌組織中下調(diào)并且抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖，具有抗癌藥物敏感性，可能是卵巢癌新的治療靶點(diǎn)。近期有研究報(bào)道，lncRNA BCYRN1 在SPE 患者胎盤組織中顯著下調(diào)，通過激活相關(guān)信號通路來延遲子癇前期的發(fā)作，從而增加滋養(yǎng)層細(xì)胞的活力并阻止細(xì)胞凋亡，并最終參與HDP的發(fā)生、發(fā)展[10]。

本研究顯示，HDP 組血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平明顯低于對照組，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明顯高于對照組，提示lncRNA BCYRN1 低表達(dá)可通過促進(jìn)炎性因子釋放，參與HDP 發(fā)病機(jī)制。隨著HDP 患者病情程度加重，血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平逐漸降低，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平逐漸升高；不良妊娠結(jié)局組血清lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平明顯低于妊娠結(jié)局良好組，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明顯高于妊娠結(jié)局良好組。lncRNA BCYRN1 水平越低，HDP 患者病情越重，說明lncRNA BCYRN1 低表達(dá)和炎性因子高表達(dá)共同促進(jìn)胎盤組織血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，并最終加劇了HDP 進(jìn)展。孫莎等[21]研究發(fā)現(xiàn)，炎癥介質(zhì)IL-6、TNF-α 參與HDP 發(fā)生、發(fā)展，血清IL-6、TNFα 水平升高對判斷HDP 患者病情嚴(yán)重程度具有重要意義，可作為HDP 臨床診斷及病情預(yù)測的指標(biāo)。另有研究表明，lncRNA 在先兆子癇患者胎盤組織中下調(diào)，其低表達(dá)抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞的遷移和侵襲，并促進(jìn)其凋亡，在調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞功能中起著重要作用，為先兆子癇治療提供了新的思路[22]。

本研究顯示，lncRNA BCYRN1 低表達(dá)以及IL-6、IL-8、TNF-α 水平升高是影響HDP 患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素，提示lncRNA BCYRN1 水平下降可能是發(fā)生不良妊娠結(jié)局的預(yù)測因子。lncRNA BCYRN1≤0.35預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局的AUC 大于IL-6、IL-8 和TNF-α，其靈敏度和特異度均最高。說明孕中期檢測lncRNA BCYRN1 表達(dá)水平能很好地預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局，對不良預(yù)后的篩查具有很大的幫助。Dai等[23]研究也證實(shí)，lncRNA 在HDP 中存在異常表達(dá)，與HDP 病情進(jìn)展有關(guān)，對診斷HDP 及不良妊娠結(jié)局具有較高的價(jià)值，有望作為該病的分子標(biāo)志物。

綜上所述，HDP 患者lncRNA BCYRN1 呈低表達(dá)，是影響HDP 患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素，可作為預(yù)測HDP 患者不良妊娠結(jié)局的參考指標(biāo)，具有較好的臨床前景。但由于lncRNA BCYRN1 的表達(dá)及功能研究尚處于初步階段，lncRNA BCYRN1 參與HDP 發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制還待進(jìn)一步深入研究。