楊玉峰

（秦皇島市撫寧區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北 撫寧 066300）

隨著狐貍、 水貂和貉等毛皮動(dòng)物的養(yǎng)殖數(shù)量和飼養(yǎng)的密度日益增加， 在毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖過(guò)程中的相關(guān)病毒性、 細(xì)菌性疾病及寄生蟲病的的報(bào)道也逐漸增加， 經(jīng)統(tǒng)計(jì)毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖過(guò)程中細(xì)菌病發(fā)展與流行占據(jù)較大比重。 奇異變形桿菌廣泛分布于自然界中的一種條件致病菌，該菌可以通過(guò)多種途徑污染肉、 蛋、 禽類等食物，人們食用了被奇異變形桿菌污染食品，可以引起食物中毒，導(dǎo)致其人腹瀉、化膿性炎癥及敗血癥等。 相關(guān)研究表明，奇異變形桿菌可以引起多種動(dòng)物（豬、牛、羊、雞、水貂、狐貍等）和人發(fā)病，該菌可以引起消化道、呼吸道、泌尿道及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等各種類型的感染、 也可以引起動(dòng)物的陰道炎、子宮內(nèi)膜炎和流產(chǎn)等。 近年來(lái)，關(guān)于毛皮動(dòng)物（水貂、貉、狐貍）奇異變形桿菌感染報(bào)道越來(lái)越多。 本試驗(yàn)從患腹瀉死亡的狐貍體內(nèi)分離得到1 株奇異變形桿菌 （FNS-1 株），并對(duì)其進(jìn)行致病性及耐藥性分析， 以期為該地區(qū)狐貍源奇異變形桿菌的防控提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 病料來(lái)源

2023 年采集撫寧地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)及散養(yǎng)戶中患腹瀉病死亡的狐貍的肝臟、腎臟、糞便等病料組織。

1.2 細(xì)菌分離與培養(yǎng)

對(duì)采集的患腹瀉死亡的狐貍的病料組織，無(wú)菌條件下進(jìn)行處理后， 先接種于麥康凱培養(yǎng)基中在37℃恒溫中培養(yǎng)18～24 小時(shí)后， 挑取麥康凱培養(yǎng)基單個(gè)菌落接種于XLD 培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別培養(yǎng)，37℃恒溫中培養(yǎng)18～24 小時(shí)后挑取典型的單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和形態(tài)學(xué)觀察。

1.3 生化試驗(yàn)鑒定

參照腸桿菌科細(xì)菌生化常規(guī)鑒定盒說(shuō)明書，調(diào)整FNS-1 株菌液濃度為0.5 個(gè)麥?zhǔn)蠞岫龋瑹o(wú)菌的條件接種于生化微量管中，37℃培養(yǎng)12～18 小時(shí)后進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定。

1.4 致病性試驗(yàn)

將FNS-1 株接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中對(duì)數(shù)期， 調(diào)整菌液濃度108cfu/毫升，攻毒組腹腔注射5 只昆明系小鼠，劑量為0.5 毫升， 對(duì)照組5 只小白鼠注射等量的無(wú)菌PBS。 試驗(yàn)期為7 天并觀察小鼠發(fā)病情況。

1.5 藥敏試驗(yàn)

分離菌株的藥敏試驗(yàn)參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）2013 年推薦的藥敏試驗(yàn)法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

疑似奇異變動(dòng)形菌株在麥康凱培養(yǎng)基長(zhǎng)出大小不一圓形的半透明的菌落，具有腐臭味（圖1A）；在XLD 培養(yǎng)基上長(zhǎng)出有凸起、邊緣光滑的中間帶黑心的淡黃色菌落（圖1B），革蘭氏染色可見(jiàn)分離菌株成紅色、不形成莢膜芽孢、為多樣性的兩端鈍圓桿菌（圖1C）。

圖1 FNS-1 株菌落形態(tài)與革蘭氏染色

2.2 細(xì)菌生化試驗(yàn)

FNS-1 株生化鑒定結(jié)果顯示:V-P 試驗(yàn)、硫化氫、甲基紅、尿素酶為陽(yáng)性，分解葡萄糖、木糖、半乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，吲哚、氧化酶為陰性。 鑒定結(jié)果為奇異變形桿菌， 與奇異變形桿菌生化特性標(biāo)準(zhǔn)相似度為98%，F(xiàn)NS-1 株初步判定分離菌株為奇異變形桿菌。 與周祥瑩等報(bào)到的貉源奇異變形桿菌的生化特性基本上一致。

2.3 致病性試驗(yàn)

損傷（見(jiàn)圖2）；采集病理組織（肝臟、心血）分離得到沙門菌，其死亡率為80%（4/5）對(duì)照組小鼠健康存活，證明FNS-1 株具有致病性。

圖2 小白鼠剖檢變化

2.4 藥敏試驗(yàn)

FNS-1 株對(duì)頭孢噻呋、頭孢噻肟、恩諾沙星環(huán)丙沙星4 種藥物高度敏感，對(duì)氨芐西林、多西環(huán)素、林可霉素3 種藥物中度敏感，對(duì)青霉素、阿莫西林、磺胺間甲氧嘧啶、氟苯尼考、慶大霉素5 種藥物耐藥（見(jiàn)下表）。

3 討論

相關(guān)研究表明， 奇異變形桿菌廣泛存在自然界中，尤其存在于多種動(dòng)物和人的體表、黏膜及消化道， 該菌可以通過(guò)多種途徑感染動(dòng)物和人，尤其是免疫力低下，可以引起動(dòng)物多種系統(tǒng)感染。 奇異變形桿菌對(duì)毛皮動(dòng)物（水貂、貉、狐貍）的危害較嚴(yán)重，主要引起毛皮動(dòng)物的腹瀉、肺炎及母獸流產(chǎn)等， 給毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 因此，在毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖過(guò)程中，應(yīng)該注意奇異變形桿菌的綜合性防控， 以減少其的發(fā)生與流行。 本試驗(yàn)從采集的病料樣品中分離到1 株奇異變形桿菌，命名為FNS-1 株，分離的FNS-1 株均可以引起小鼠死亡， 死亡率為80%。說(shuō)明奇異變形桿菌是引起腹瀉死亡狐貍的主要的病原。 因此，在狐貍養(yǎng)殖過(guò)程中，當(dāng)發(fā)生腹瀉病時(shí)應(yīng)該進(jìn)行有效診斷， 注意奇異變形桿菌的綜合防控。 臨床中主要用抗生素進(jìn)行對(duì)奇異變形桿菌進(jìn)行治療， 隨著臨床中抗菌藥物的濫用，造成嚴(yán)重的耐藥性，給該病的治療帶來(lái)一定困難。 本試驗(yàn)采用K-B 藥敏紙片法對(duì)FNS-1株進(jìn)行耐藥性檢測(cè)。 結(jié)果顯示，F(xiàn)NS-1 株對(duì)頭孢噻呋、頭孢噻肟、恩諾沙星等7 種藥物敏感，對(duì)其他藥物耐藥。 在臨床治療狐貍奇異變形桿菌病時(shí)， 應(yīng)該根據(jù)臨床中藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行選擇敏感的藥物交替使用，配合環(huán)境消毒，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，才能提高治療效果。

表 藥敏試驗(yàn)結(jié)果