吳旸, 張薇, 董麗平, 徐迪, 鄧飛, 唐金海

癌癥是威脅人類健康的一大重要因素,約20%的乳腺癌患者存在人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)過表達(dá),此類患者更易發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差。鑒于其在乳腺癌、胃癌和胃-食管交界處癌、結(jié)直腸癌、膽道癌、非小細(xì)胞肺癌和膀胱癌等多種癌癥中擴(kuò)增或過表達(dá)[1-2]。當(dāng)前已經(jīng)開發(fā)出多種靶向HER2的治療方法,并在乳腺癌和胃癌中顯示出療效[1,3]。其中,曲妥珠單抗(Trastuzumab)為全球批準(zhǔn)的第一個(gè)針對HER2過表達(dá)乳腺癌的人源化單克隆抗體,它可與HER2的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相結(jié)合,從而抑制腫瘤細(xì)胞生長。由于HER2在一些重要器官如肝、肺和心臟中也有弱至中度表達(dá),Trastuzumab可能會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng),因此限制了給藥劑量[4],從而使乳腺癌患者對HER2治療不敏感或逐漸發(fā)生耐藥。

HER2陽性乳腺癌患者Trastuzumab耐藥有多種形式,其中腫瘤細(xì)胞表面HER2蛋白結(jié)構(gòu)形態(tài)的改變能夠?qū)е翲ER2陽性腫瘤細(xì)胞對Trastuzumab抵抗。而人表皮生長因子受體-2突變蛋白(N-terminal truncated isoform of HER2,p95HER2)是HER2受體的縮短形態(tài),缺少Trastuzumab結(jié)合位點(diǎn)但仍具有酶活性,可以作為接受Trastuzumab治療的HER2陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者不良預(yù)后標(biāo)志(圖1A)[5-7]。p95HER2的表達(dá)與全長HER2表達(dá)正相關(guān),大約40%的HER2陽性腫瘤表達(dá)p95HER2[4,8]。既往研究表明,p95HER2表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素,高水平的p95HER2與預(yù)后較差相關(guān)[8-11]。p95HER2在促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移方面比全長HER2更具侵襲性,并且被認(rèn)為與Trastuzumab耐受密切相關(guān)[12-13]。與HER2不同,p95HER2在HER2陽性的正常組織中不表達(dá),這使得p95HER2成為一個(gè)值得研究的HER2陽性腫瘤亞群的腫瘤特異性抗原[4,14]。p95HER2的表達(dá)提示曲妥珠單抗治療HER2陽性乳腺癌存在一定的腫瘤抗性的現(xiàn)象,已被廣泛接受。而p95HER2除了在腫瘤耐藥方面的價(jià)值外,是否與腫瘤的其他生物學(xué)行為如增殖、轉(zhuǎn)移等有關(guān)系,尚未被充分研究。本文旨在探討p95HER2的表達(dá)情況與臨床病理之間的相關(guān)性,探索其在腫瘤增殖中可能發(fā)揮的作用。

圖1 p95HER2及HER2在正常組織和乳腺癌中的表達(dá) 1A:HER2及p95HER2與Trastuzumab作用機(jī)制示意圖;1B:乳腺癌組織HER2及p95HER2蛋白表達(dá)情況的免疫組化圖,×20

1 材料和方法

1.1 患者入組 調(diào)取江蘇省人民醫(yī)院生物樣本庫保藏的2020年12月至2021年12月由普外科切除的、經(jīng)3位病理醫(yī)師確診的47例乳腺癌HER2陽性患者標(biāo)本,患者均為女性;年齡31～80歲,中位年齡52歲,納入標(biāo)準(zhǔn)為HER2++且病理Fish確定或HER2++,排除標(biāo)準(zhǔn)為HER2+或HER2-?；颊呤褂肁C-THP方案治療8周后或直接手術(shù)治療,收集患者腫瘤組織樣本及首次入院前后的生化及血常規(guī)數(shù)據(jù)。研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過,患者及家屬簽署知情同意書。

1.2 實(shí)驗(yàn)資料 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞(BT474)購于中國科學(xué)院細(xì)胞庫,培養(yǎng)條件為含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基,5%二氧化碳,37 ℃下培養(yǎng)。p95HER2過表達(dá)慢病毒載體購于南京晶麥生物科技公司,RPMI 1640培養(yǎng)基購于南京凱基生物公司,胎牛血清(FBS)購于南京維森特生物公司。抗p95HER2抗體,購于abcam(上海)公司,貨號(hào)為ab32074,抗兔二抗購于武漢PROTEINTECH生物公司和CST中國公司,貨號(hào)為SA00001-2,93702S。DAB 顯色試劑盒等購于碧云天生物科技公司。

1.3 組織樣本獲取及免疫組化染色 取乳腺癌手術(shù)切除組織,石蠟包埋切片,二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化,90%乙醇和3%過氧化氫封閉,去除內(nèi)源性過氧化物酶后于室溫下3%H2O2孵育10 min,磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)沖洗3次,煮沸抗原修復(fù),加入枸櫞酸緩沖液中煮沸15～20 min,取出至室溫冷卻,PBS沖洗,封閉10 min,順序一抗和二抗孵育,PBS沖洗3次,二氨基聯(lián)苯胺法染色(Super Sensitive Polymer-HRP ISH Detection System, DAB),蘇木精復(fù)染,乙醇脫水至二甲苯透明,干燥后樹脂封片。PBS為對照,染色標(biāo)準(zhǔn)判斷以腫瘤細(xì)胞膜著色為基準(zhǔn),統(tǒng)計(jì)20個(gè)高倍視野(×400)下免疫組化染色細(xì)胞。染色面積,著色范圍≤10%為0分,10%<著色范圍≤25%為1分,25%<著色范圍≤50%為2分,50%<著色范圍≤75%為3分,著色范圍>75%為4分。染色強(qiáng)度,無色0分,弱染色1分,中染色2分,強(qiáng)染色3分。以兩種積分之和0分為陰性,1～2分為弱陽性(+),3～5分為陽性(++),>5分為強(qiáng)陽性(+++)。對p95HER2的判斷標(biāo)準(zhǔn),0～+判斷為p95HER2低表達(dá),++～+++為p95HER2高表達(dá)。染色玻片分別按照美國臨床腫瘤學(xué)會(huì)/美國病理學(xué)家學(xué)會(huì)(ASCO/CAP)2013年發(fā)布和更新的乳腺癌檢測指南進(jìn)行解讀。

1.4 p95HER2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建 取處于對數(shù)生長期的BT474細(xì)胞,消化計(jì)數(shù)并以1×105個(gè)細(xì)胞每孔種入24孔板中,培養(yǎng)過夜待轉(zhuǎn)染。取p95HER2慢病毒質(zhì)粒載體,以MOI值為10與聚凝胺(polybrene)混合孵育15 min后,加入到RPMI 1640培養(yǎng)基中,使polybrene終濃度達(dá)到5 μg/mL。將含p95HER2慢病毒質(zhì)粒載體的RPMI 1640培養(yǎng)基加入BT474細(xì)胞中,共孵育6 h后,更換新鮮RPMI 1640培養(yǎng)基。細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,向24孔板的每孔中加入終濃度為0.5 μg/mL的嘌呤霉素與細(xì)胞共同孵育,待顯微鏡下觀察到未轉(zhuǎn)染慢病毒質(zhì)粒載體的空白BT474細(xì)胞組全部死亡后,更換不含嘌呤霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞得p95HER2穩(wěn)定表達(dá)的BT474細(xì)胞株(BT474-p95)。

1.5 細(xì)胞株的p95HER2的mRNA與蛋白表達(dá)檢測 取對數(shù)生長期的BT474-p95細(xì)胞,消化細(xì)胞后離心傾倒干凈離心管中液體,將含有細(xì)胞的離心管置于冰上,加入500 μL 總RNA抽提試劑(trizol)溶液充分裂解細(xì)胞,細(xì)胞裂解完成后于4 ℃下12 000 g離心15 min,將上清轉(zhuǎn)移至新離心管中并加入100 μL氯仿,渦旋震蕩溶液后4 ℃下12 000 g離心15 min,將上層液體轉(zhuǎn)移至新離心管中并加入等體積的異丙醇,渦旋震蕩溶液后4 ℃下12 000 g離心15 min,棄上清向離心管中加入75%乙醇,4 ℃下12 000 g離心5 min,棄上清室溫下晾干沉淀后加入50 μL無酶水溶解沉淀并測定總mRNA含量。隨后根據(jù)mRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒在20 μL體系下將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,并取定量cDNA通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測p95HER2 mRNA在細(xì)胞中的表達(dá)情況。

取對數(shù)生長期的BT474-p95細(xì)胞,加入預(yù)冷的含有1 % PMSF的RIPA裂解液,冰上裂解0.5 h后12 000 g離心15 min取上清,通過BCA蛋白濃度檢測法(BCA)檢測上清中細(xì)胞總蛋白含量。將所需量的蛋白溶液與5 X的蛋白上樣緩沖液混合后,置于金屬浴上99 ℃加熱10 min,冷卻至室溫后將蛋白樣本加入制備好的SDS-PAGE膠孔中,分別以80 V和150 V的電壓使蛋白樣本通過壓縮膠和分離膠。裁剪與膠相對應(yīng)大小的PVDF膜,浸泡于甲醇中約15 s,將在轉(zhuǎn)模液中浸濕后的海綿、濾紙、膠、PVDF膜、濾紙、海綿按順序置于轉(zhuǎn)模夾中夾緊,放入轉(zhuǎn)膜槽中并加入轉(zhuǎn)膜液,轉(zhuǎn)膜槽放在碎冰中以260 mA轉(zhuǎn)膜1.5 h。轉(zhuǎn)模結(jié)束后,將PVDF膜置于5%的BSA溶液中封閉2 h,隨后分別將PVDF膜與p95一抗和HRP二抗室溫孵育2 h和1 h,最后將顯影液滴加在PVDF膜上并進(jìn)行曝光拍照檢測p95HER2蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)情況。

1.6 p95HER2陽性細(xì)胞增殖與克隆形成實(shí)驗(yàn) 取處于對數(shù)生長期的p95HER陽性BT474細(xì)胞(BT474-p95),并以未轉(zhuǎn)染p95HER慢病毒質(zhì)粒載體BT474細(xì)胞(BT474-NC)為對照,用含EDTA的胰酶消化后,以3 000個(gè)細(xì)胞每孔鋪入96孔板中,分成BT474-NC、BT474-p95、BT474-NC加曲妥珠單抗和BT474-p95加曲妥珠單抗組,曲妥珠單抗在培養(yǎng)基中的終濃度為3.5 μg/μL,每組6個(gè)重復(fù)孔。采用細(xì)胞活力檢測法(CCK8)于0、12、24、48 h檢測每組細(xì)胞的增殖情況,即96孔板中加入10 μL CCK-8試劑后避光孵育2 h,用酶標(biāo)儀檢測96孔板在450 nm處的吸光值。

取處于對數(shù)生長期的BT474-p95和BT474-NC細(xì)胞,胰酶消化計(jì)數(shù)后以300個(gè)細(xì)胞每孔鋪入6孔板中,細(xì)胞均勻分布,隨后加入終濃度為3.5 μg/μL的曲妥珠單抗。每2 d更換新鮮培養(yǎng)基,待細(xì)胞克隆形成后,傾倒培養(yǎng)基并用PBS緩沖液清洗細(xì)胞3次,吸干PBS緩沖液后用4%的多聚甲醛固定細(xì)胞0.5 h,隨后加入0.5 %的結(jié)晶紫溶液染色15 min,PBS緩沖液沖洗殘留染色液,室溫晾干拍照并計(jì)算細(xì)胞克隆形成數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)采用R包c(diǎn)ompareGroups進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,連續(xù)性變量符合正態(tài)分布采用組間t檢驗(yàn),不符合正態(tài)分布則描述為中位數(shù)+四分位數(shù),采用秩和檢驗(yàn);二分類變量組間比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 p95HER2及HER2在正常組織和乳腺癌中的表達(dá)情況 通過47例人乳腺癌的組織切片進(jìn)行免疫組化染色法檢測乳腺癌標(biāo)本中全長HER2和p95HER2的表達(dá),結(jié)果顯示47例的乳腺癌標(biāo)本全長HER2表達(dá)陽性,其中44.7 %(21/47)的乳腺癌標(biāo)本中p95HER2表達(dá)陽性(圖1B,表1)。此外,我們發(fā)現(xiàn)大部分p95HER2陽性分布在HER2 免疫組化(immunohistochemistry,IHC)3+的乳腺癌樣本中,而在HER2 IHC1+及以下的樣本中未檢測到p95HER2陽性,這與之前的報(bào)道一致[8]。綜上所述,p95HER2在大約48%的HER2陽性(≥IHC2+)乳腺癌中表達(dá),但在正常組織中檢測不到,這使得它成為一個(gè)有吸引力的腫瘤特異性靶點(diǎn)。

表1 p95HER2在HER2陽性乳腺癌患者腫瘤組織中表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

2.2 臨床病理特征與p95HER2蛋白表達(dá)的關(guān)系 p95HER2在不同年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤性癌是否合并導(dǎo)管內(nèi)癌等指標(biāo)上的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而在原發(fā)病灶的p95HER2分組中,患者Ki67的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。進(jìn)一步,我們專門分析其與血常規(guī)及生化治療方面是否有聯(lián)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在堿性磷酸酶、肌酸激酶、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇同樣差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 p95HER2 在 HER2 陽性乳腺癌患者腫瘤組織中表達(dá)與血生化及血常規(guī)指標(biāo)的關(guān)系

2.3 p95HER2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建 p95HER2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建,是通過慢病毒轉(zhuǎn)染含嘌呤霉素抗性的p95HER2表達(dá)質(zhì)粒篩選得到。隨后,通過實(shí)時(shí)熒光定量法和Western blot法,對構(gòu)建好的p95HER2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株(BT474-p95)的p95HER2基因和蛋白表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。其結(jié)果如圖2A,經(jīng)過轉(zhuǎn)染后BT474細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)出大量綠色熒光,同時(shí)在嘌呤霉素的篩選下未經(jīng)過慢病毒轉(zhuǎn)染的BT474細(xì)胞全部死亡。BT474-p95細(xì)胞在嘌呤霉素的篩選下與BT474-NC細(xì)胞比其p95HER2 mRNA表達(dá)有顯著差異,同時(shí)Western blot結(jié)果也證明了p95HER2蛋白可以在BT474細(xì)胞上穩(wěn)定表達(dá)(圖2B)。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)以嘌呤霉素篩選后的p95HER2慢病毒轉(zhuǎn)染的BT474細(xì)胞(BT474-p95)作為p95HER2基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。

圖2 p95HER2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建 2A:熒光顯微鏡下BT474細(xì)胞轉(zhuǎn)染p95HER2慢病毒質(zhì)粒載體,×5;2B:RT-qPCR與Western blot檢測轉(zhuǎn)染p95過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒載體后BT474細(xì)胞中p95HER2基因在的表達(dá)情況

2.4 p95HER2陽性細(xì)胞的增殖與克隆形成實(shí)驗(yàn) p95HER2基因是HER2基因在其氨基酸序列第611處截短所表達(dá)出的蛋白,其細(xì)胞外段截短,是導(dǎo)致曲妥珠單抗無法識(shí)別、結(jié)合而發(fā)揮抗體藥物功能的原因之一,進(jìn)而導(dǎo)致表達(dá)p95HER2基因的HER2陽性乳腺癌細(xì)胞對曲妥珠單抗抵抗。而p95HER2及HER2是一種具有激酶活性的跨膜蛋白,屬于表皮生長因子跨膜受體,其表達(dá)與細(xì)胞增殖、存活密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)通過細(xì)胞CCK8法和結(jié)晶紫染色法,檢測在有曲妥珠單抗藥物的作用下,表達(dá)p95HER2的乳腺癌細(xì)胞(BT474-p95)及表達(dá)HER2的乳腺癌細(xì)胞(BT474-NC)的增殖情況。結(jié)果如圖3C所示,BT474-NC在未加曲妥珠單抗藥物組,48 h增殖迅速與0 h比有極顯著差異(P<0.01),而加入3.5 μg/μL曲妥珠單抗藥物后,BT474-NC細(xì)胞迅開始死亡(48 h,P<0.01),在48 h時(shí)BT474-NC細(xì)胞數(shù)量僅有實(shí)驗(yàn)開始0 h時(shí)細(xì)胞總量的14.0%左右。在BT474-p95未加曲妥珠單抗藥物組,乳腺癌細(xì)胞增殖對比BT474-NC在未加曲妥珠單抗藥物組12～48 h內(nèi)無顯著性差異(P>0.05),加入曲妥珠單抗藥物后BT474-p95明顯產(chǎn)生藥物抵抗,與BT474-NC加藥組比其在24-48 h內(nèi)細(xì)胞繼續(xù)增殖(P<0.01),但增殖比例低于BT474-p95未加曲妥珠單抗藥物組,其原因?yàn)锽T474-p95細(xì)胞有一定的HER2基因表達(dá),可與曲妥珠單抗藥物作用。

圖3 p95HER2陽性細(xì)胞的增殖與克隆形成實(shí)驗(yàn) 3A:結(jié)晶紫染色后的細(xì)胞克隆情況照片;3B:不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞克隆情況統(tǒng)計(jì)圖;3C:不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖情況,**P<0.01

細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)是測定細(xì)胞增殖能力的方法之一,細(xì)胞貼壁后必須是有增殖活力的細(xì)胞才能形成克隆,而細(xì)胞存活及形成克隆的數(shù)量多少,可以有效反應(yīng)實(shí)驗(yàn)外加條件對細(xì)胞增殖的影響。細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示,在BT474-NC組3.5 μg/μL的曲妥珠單抗藥物有效抑制了細(xì)胞克隆的形成,而在轉(zhuǎn)染了p95HER2慢病毒質(zhì)粒載體后,BT474-p95組細(xì)胞克隆數(shù)量雖有抑制,但與使用了曲妥珠單抗藥物BT474-NC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步說明BT474-p95細(xì)胞對曲妥珠單抗藥物具有抵抗作用。同時(shí),p95HER2保留了HER2的生物功能因而導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞的增殖。

3 討論

HER2是表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)受體酪氨酸激酶家族的一員[1]。HER2在胚胎發(fā)育,特別是在心臟發(fā)育過程中起著至關(guān)重要的作用[15]。HER2在一些上皮來源的正常組織中具有中低表達(dá)水平,其在乳腺癌、胃癌和胃-食管交界處癌、結(jié)直腸癌、膽道癌、非小細(xì)胞肺癌和膀胱癌等多種癌癥中擴(kuò)增或過表達(dá)。在HER2在乳腺癌研究中,p95HER2 僅在腫瘤組織中高表達(dá),并且表達(dá)率超過30%[6]。

這些研究主要集中在p95HER2蛋白表達(dá)曲妥珠單抗的抵抗方面,以及與患者預(yù)后的關(guān)系上,而其與腫瘤增殖等生物學(xué)行為有無關(guān)系,目前并沒有詳細(xì)評估,由于入組患者為兩年內(nèi)的HER2陽性乳腺癌患者,未得到乳腺癌耐藥隨訪結(jié)果,同時(shí)在患者入院后新輔助患者病例不足且有研究表述p95-HER2蛋白表達(dá)參與了曲妥珠單抗治療抵抗,后續(xù)我們將納入更多病例并增加隨訪時(shí)間以分析p95HER2蛋白表達(dá)與曲妥珠單抗治療效果情況。有研究證實(shí),HER2陽性乳腺癌接受曲妥珠單抗+拉帕替尼雙靶治療,Ki67的抑制程度更高[16]。此前有文章研究拉帕替尼對p95HER2過表達(dá)的HER2陽性乳腺癌帶來獲益[17]。結(jié)合兩者研究,我們有理由相信,p95HER2因?yàn)楸荛_靶向藥的結(jié)合且維持HER2的活性,從而發(fā)揮維持腫瘤細(xì)胞的高增殖特性。在我們的研究中,p95HER2與Ki67存在顯著相關(guān)性。在p95HER2陰性組,Ki67低表達(dá)數(shù)目占比26.9%(7/26);而p95HER2陽性組中,Ki67低表達(dá)占比為0(0/21),提示p95HER2可能在惡性腫瘤細(xì)胞增殖過程中同樣發(fā)揮作用。為了探討p95HER2較全長HER2是否有更高的細(xì)胞增殖特性,我們進(jìn)行了相關(guān)細(xì)胞株的細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn),結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)p95HER2過表達(dá)的BT474細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力,并且胞外段截短的p95HER2蛋白有著與HER2蛋白類似的促進(jìn)細(xì)胞增殖的生物學(xué)功能,同時(shí)p95HER2蛋白可以抵抗HER2抗體藥物(曲妥珠單抗)對HER2陽性細(xì)胞的抑制作用。此外,有研究針對不同乳腺癌分子亞型分析對比臨床病理資料的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)Ki67與血脂之間存在聯(lián)系,且在TNBC及HER2陽性乳腺癌中,血清TC和LDL-C明顯升高[18]。肥胖與癌癥之間存在關(guān)聯(lián)的流行病學(xué)證據(jù)是確鑿的,而與肥胖相關(guān)的脂蛋白水平與癌癥之間的關(guān)聯(lián)則不那么明顯。有文獻(xiàn)研究提示循環(huán)血液載脂蛋白平與多種癌癥風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[19]。另有研究提示血清中TC,HDL-C和APOA1的水平與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[20]。因此,我們針對患者的生化指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)p95HER2陽性組TG較p95HER2陰性組高,該現(xiàn)象有待進(jìn)一步探索。同時(shí),研究提示了在HER2陽性乳腺癌患者中,當(dāng)p95HER2蛋白的表達(dá)水平升高時(shí),腫瘤組織中的Ki67增殖指數(shù)也會(huì)上升,腫瘤細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)。而p95HER2因?yàn)槠浔磉_(dá)在細(xì)胞外蛋白的截短而失去與曲妥珠單抗結(jié)合位點(diǎn),導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對曲妥珠單抗治療產(chǎn)生內(nèi)在的抵抗性,這些研究對于理解HER2陽性乳腺癌的內(nèi)在抗性和治療方法具有重要意義。