鹿廣玲,費梅芳,莫利花,張建永,段燦燦

(1.遵義醫(yī)科大學 藥學院,貴州 遵義 563099;2.遵義醫(yī)科大學 基礎藥理教育部重點實驗室暨特色民族藥教育部國際合作聯合實驗室,貴州 遵義 563099;3.貴州天地藥業(yè)有限責任公司,貴州 興義 562400)

葡萄糖注射液在醫(yī)藥領域應用廣泛,可用于調節(jié)電解質、水鹽及酸堿平衡,補充體液和能量,治療低血糖癥、高鉀血癥,還可用作藥物稀釋劑［1］等。目前葡萄糖注射液產品常見的包裝有玻璃瓶、塑料瓶、非聚氯乙烯軟袋、直立式聚丙烯輸液袋,其中直立式聚丙烯輸液袋可直立放置,更加符合使用習慣,且一般認為材料無毒無味、性質穩(wěn)定、生產成本低,比其他包裝材料更具有適用性和經濟性［2］。

然而直立式聚丙烯輸液袋作為藥液的包裝材料,生產過程中為改進其性能往往需要添加一些輔助材料,如抗氧劑,然而這種抗氧劑是否會遷移到藥液中,需要進一步分析?！痘瘜W藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則(試行)》中要求,應重點考察聚丙烯包裝材料中所含添加劑的遷移對藥物的影響［3-4］。有文獻報道注射劑在與聚丙烯材料長期接觸的過程中,抗氧劑可能發(fā)生遷移,從而對人體健康產生不良影響［5］。目前生產中常用的抗氧劑包括抗氧劑1010、330、1076、168等［6］(表1)。然而目前中國藥典中尚未規(guī)定注射用藥品中抗氧劑遷移量的測定方法。為確保臨床用藥安全,本研究擬建立并驗證固相萃取-高效液相色譜法(solid-phase extraction high performance liquid chromatography,SPE-HPLC)方法測定直立式聚丙烯輸液袋裝葡萄糖注射液中4種抗氧劑含量,以期為考察直立式聚丙烯輸液袋裝葡萄糖注射液中抗氧劑的遷移提供科學依據。

表1 抗氧劑信息

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 固相萃取柱(深圳逗點生物技術有限公司,C18-SPE,500 mg/6 mL);高效液相色譜儀(日本島津公司,LC-2010AHT);電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司,AE240);二級反滲透裝置(山東華周制藥設備有限責任公司,FST18000);超聲儀(江蘇超聲儀器有限公司,KQ-500DA)。

1.1.2 試劑 乙腈、四氫呋喃、甲醇均為色譜純;二氯甲烷為分析純;水為純化水;對照品信息見表2。

表2 對照品信息

1.1.3 樣品 直立式聚丙烯輸液袋裝葡萄糖注射液(貴州天地藥業(yè)有限責任公司生產提供,批號：DC21110901、DB21112501、DB21112601、DB21112701)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Welch XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);柱溫：30℃;檢測波長：280 nm;流動相：乙腈-四氫呋喃-水(63∶30∶7);流速：1.5 mL/min;進樣體積：20 μL。

1.2.2 對照品儲備溶液的制備 分別取抗氧劑1010、330各50 mg,抗氧劑168、1076各100 mg,使用電子天平精密稱定后,以混合液(乙腈∶四氫呋喃=1∶1)溶解后定容至100 mL,即得。

1.2.3 對照品溶液的制備 精密量取“1.2.2”中對照品儲備溶液10 mL,以混合液(乙腈∶四氫呋喃=1∶1)稀釋后定容至100 mL,即得。

1.2.4 供試品溶液的制備 精密量取100 mL葡萄糖注射液,取出固相萃取柱,以4 mL甲醇和4 mL水依次進行活化,將上述葡萄糖注射液以1.5～2 mL/min的流速過柱,待固相萃取柱揮干后,再依次用4 mL甲醇,5 mL二氯甲烷洗脫,收集洗脫液,置于10 mL容量瓶中,用甲醇定容,經0.45 μm濾膜過濾,即得。

1.2.5 葡萄糖注射液加標樣品溶液的制備 量取3份葡萄糖注射液適量置于100 mL容量瓶,分別加入對照品儲備溶液100、200、400 μL并用葡萄糖注射液定容后,按“1.2.4”中的方法進行溶液制備,即分別得到葡萄糖注射液加標樣品1、2、3。

2 結果

2.1 專屬性 分別取空白溶劑(甲醇∶二氯甲烷=1∶1)、對照品溶液、葡萄糖注射液加標樣品溶液按“1.2.1”規(guī)定的色譜條件進行HPLC分析,記錄色譜圖。結果顯示葡萄糖注射液加標樣品溶液的色譜峰保留時間與對照品溶液基本一致,抗氧劑1010(4.725 min)、抗氧劑330(6.383 min)、抗氧劑1076(12.453 min)、抗氧劑168(14.831 min),且分離度均大于1.5,理論塔板數均大于7 000;空白溶劑在相應的保留時間內未檢測到色譜峰,表明本研究建立的方法具有較好的專屬性(圖1)。

A：空白溶劑;B：對照品溶液;C：葡萄糖注射液加標樣品溶液;標識峰：1為抗氧劑1010,2為抗氧劑330, 3為抗氧劑1076;4為抗氧劑168。圖1 高效液相色譜

2.2 線性關系 取對照品儲備液加混合液(乙腈∶四氫呋喃=1∶1)稀釋,制成抗氧劑1010濃度分別為2.455、12.275、24.549、49.098、147.294、245.490 μg/mL;抗氧劑330濃度分別為2.480、12.400、24.800、49.599、148.797、247.995 μg/mL;抗氧劑1076濃度分別為4.900、24.500、49.000、98.000、294.000、490.000 μg/mL;抗氧劑168濃度分別為4.900、24.500、49.000、98.000、294.000、490.000 μg/mL的線性溶液。將6種不同濃度的抗氧劑混合液,按“1.2.1”規(guī)定的色譜條件進行HPLC分析,并分別記錄色譜圖,繪制標準曲線時以樣品的進樣濃度與色譜圖峰面積分別為橫、縱坐標。結果顯示：4種抗氧劑分別在2.455～245.490 μg/mL、2.480～247.995 μg/mL、4.900～490.000 μg/mL和4.900～490.000 μg/mL內,濃度與峰面積呈現良好的線性關系(表3)。

表3 4種抗氧劑的回歸方程、相關系數、檢出限及定量限

2.3 檢測限與定量限 取4種抗氧劑的標準品適量,精密稱定后加混合液(乙腈∶四氫呋喃=1∶1)逐級稀釋,稀釋后的樣品均按“1.2.1”規(guī)定的色譜條件進樣,記錄色譜圖,以信噪比約為10∶1、5∶1時,分別計算定量限、檢測限(表3)。

2.4 重復性試驗 精密稱取同一批供試品(批號：DC21110901),按“1.2.5”項下方法平行制備6份葡萄糖注射液加標樣品2,按“1.2.1”規(guī)定的色譜條件進行HPLC分析,記錄色譜圖?？寡鮿?010、330、1076和168含量測定結果的RSD分別為2.04%、2.35%、2.48%和2.79%,表明方法具有良好的重復性。

2.5 中間精密度試驗 在不同時間,由不同人員分別精密稱取同一批供試品(批號：DC21110901),按“1.2.5”項下方法,由2名操作人員各平行制備6份葡萄糖注射液加標樣品2,按“1.2.1”規(guī)定的色譜條件分別用LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津公司)與SPD-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)進行HPLC分析,記錄色譜圖。抗氧劑1010、330、1076和168計2次含量測定結果的RSD分別為2.40%、2.17%、1.96%和2.62%,表明方法具有良好的中間精密度。

2.6 回收率試驗 按“1.2.5”項下方法分別制備葡萄糖注射液加標樣品1、2、3,每個濃度的葡萄糖注射液加標樣品平行制備3份,按“1.2.1”規(guī)定的色譜條件進行HPLC分析,記錄色譜圖(表4)。

表4 回收率試驗結果(n=9)

2.7 樣品的加速試驗 本實驗測得3個批號的葡萄糖注射液產品及其穩(wěn)定性考察樣品中抗氧劑1010、330、1076和168的含量均低于檢測限(表5)。

表5 直立式聚丙烯輸液袋裝葡萄糖注射液加速試驗抗氧劑遷移試驗結果

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 參考相關文獻［7-11］并結合樣品的全波長掃描結果,本研究分別考察了3種檢測波長為275、280、224 nm,3種柱溫為25 ℃、30 ℃、40 ℃,以及4種流動相體系為甲醇、甲醇-水、乙腈-水、乙腈-四氫呋喃-水,結果表明在波長280 nm,柱溫30 ℃,流動相為乙腈-四氫呋喃-水條件下,樣品溶液出峰時間較短,雜質峰較少,峰形較好,且分離度符合要求。

3.2 洗脫液及用量的選擇 參考相關文獻［11-15］,本研究以 C18柱為固相萃取柱,考察了 6 組不同洗脫劑的洗脫效果,結果表明4 mL甲醇與5 mL二氯甲烷依次洗脫的效果最好,回收率接近100%(表6)。

表6 洗脫液信息

3.3 方法學評價 目前報道的抗氧劑檢測方法有微波萃取-高效液相色譜法［16］、超高效液相色譜-串聯質譜法［17］、氣相色譜法［18］等。使用微波萃取-高效液相色譜法時,微波加熱可能會造成熱敏性物質變性或失活,導致結果不準確;超高效液相色譜-串聯質譜法對環(huán)境的溫度、濕度等要求高且儀器結構復雜,維護成本高,不利于產業(yè)化;氣相色譜法對于難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定的物質難以分析,如抗氧劑168等,不利于整體分析［19-20］。本研究采用SPE-HPLC方法,對4種抗氧劑進行含量測定, 該方法操作簡便、準確度高且重復性好,為藥品與包材相容性實驗中抗氧劑的含量測定提供了技術參考。

3.4 抗氧劑遷移量測定 本實驗中3個批號的直立式聚丙烯輸液袋裝葡萄糖注射液中4種抗氧劑在加速試驗中的遷移量測定結果均低于方法的檢測限,且遠小于《歐洲藥典》10.0版［21］中對抗氧劑的限度要求,即單個抗氧劑含量和抗氧劑總量均不得過0.3%,表明本研究所采用的直立式聚丙烯輸液袋與葡萄糖注射液兩者相容性良好。

本文建立了一種測定葡萄糖注射液中4種外源性抗氧劑含量的固相萃取-高效液相色譜方法,為直立式聚丙烯輸液袋與注射液的相容性研究提供了技術手段,同時也為直立式聚丙烯輸液袋產業(yè)進一步發(fā)展提供可以借鑒的方法及科學依據。