李 鑫，王海燕，夏江濤，韓 榮，古麗孜亞·卡肯，呂雙燕，阿依健·海拉提，舍衛(wèi)俊，鄭汝蕓，舒 展*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆阿勒泰地區(qū)動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆 阿勒泰 836500）

布魯氏菌?。ê喎Q布?。?，是由布魯氏菌病屬細(xì)菌引起的一類人畜共患傳染病。病原為布魯氏菌，大小為0.5 ～0.7 μm 桿狀或球形的革蘭氏陰性胞內(nèi)寄生菌，能夠引發(fā)人畜睪丸炎、流產(chǎn)、早產(chǎn)、關(guān)節(jié)炎等癥狀[1]，目前研究報(bào)道的布魯氏菌有15 個(gè)菌種[2]，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WHO）將其列為必須通報(bào)的動(dòng)物疫病[3]。我國將布病列為乙類法定報(bào)告?zhèn)魅静?、職業(yè)病，《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》規(guī)定布病為二類動(dòng)物疫病[4]，新疆是我國布病高發(fā)的地區(qū)之一[5，6]。

目前動(dòng)物布病血清學(xué)檢測方法主要有虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）做初步篩查、試管凝集試驗(yàn)（SAT）做確診，但是這兩種方法都是以光滑型脂多糖（S-LPS）抗原為基礎(chǔ)，而動(dòng)物接種疫苗后也能產(chǎn)生S-LPS 抗體，所以RBT 和SAT 均不能區(qū)分感染和免疫抗體[7]。而光滑型布魯氏菌表面還有一種天然半抗原（Natiwa Hapten，NH），接種疫苗的動(dòng)物檢測不到此抗體，因此利用NH 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（Gel Diffusion，GD）可以很好地鑒別疫苗免疫和野毒感染抗體[8]。

阿勒泰地區(qū)某牛場有成年牛259頭（48月齡母牛）、犢牛72頭（8月齡母牛），2022年初32頭牛發(fā)生流產(chǎn)，按“動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)”標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測SAT 呈陽性，該牛場免疫背景不詳，根據(jù)“農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《畜間布魯氏菌病防控五年行動(dòng)方案（2022-2026年）》”要求，向相關(guān)部門申請備案后，對該牛場進(jìn)行了血清學(xué)檢測，撲殺并無害化處理陽性牛，疫苗免疫陰性牛，嚴(yán)格消殺，以期有效控制此牛場布病傳播，為本地區(qū)布病防控提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

阿勒泰地區(qū)某牛場，成年牛259 頭（48 月齡母牛）、犢牛72 頭（8 月齡母牛），2022 年初流產(chǎn)數(shù)為32頭，流產(chǎn)牛RBT和SAT檢測呈陽性。

1.2 主要試劑與儀器

布病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原（批號：202019）、布病陽性血清（批號：201501）、布病試管凝集試驗(yàn)抗原（批號：202004）、布病陰性血清（批號：201901），均購自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司；布魯氏菌NH-GD 抗體瓊脂擴(kuò)散檢測試劑盒（青島瑞爾唯特生物技術(shù)有限公司，批號：21030041）；布氏桿菌活疫苗A19（天康生物股份有限公司，批號：2020009）；10～100 μm 移液器（艾本德）；恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，LRH-70）。

1.3 試驗(yàn)方案

免疫前采集所有牛血清，進(jìn)行RBT、SAT 檢測，將SAT 陽性樣品進(jìn)行NH-GD 檢測，經(jīng)NH-GD 檢測陽性的牛撲殺并無害化處理，對陰性牛進(jìn)行整群布病疫苗（A19）免疫。整個(gè)試驗(yàn)期嚴(yán)格消毒。免疫后第180 d再次采集血清進(jìn)行RBT、SAT檢測，同時(shí)將SAT陽性樣品進(jìn)行NH-GD 檢測，統(tǒng)計(jì)免疫前后陽性率和轉(zhuǎn)陰率，以及免疫前后胎次的流產(chǎn)率。

1.4 樣品采集

0 d、180 d頸靜脈采集試驗(yàn)牛血液5 mL，將血液中血清分離到EP管中，標(biāo)記后-20 ℃冷凍保存?zhèn)錂z。

1.5 試驗(yàn)方法

血清學(xué)檢測：RBT、SAT 按照國家標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T 18646—2018）操作并判定結(jié)果；NH-GD 按試劑盒說明書操作并判定結(jié)果；布病免疫按照說明書進(jìn)行，根據(jù)《OIE 陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊》牛種布魯氏菌A19 株疫苗使用要求，成年牛干奶期以3×109CFU/頭份劑量、犢牛以6×1010CFU/頭份劑量進(jìn)行皮下注射；試驗(yàn)開始后按《家畜養(yǎng)殖場所布魯氏菌病消毒技術(shù)規(guī)范》（DB65/T 4123—2018）對場區(qū)嚴(yán)格消毒；最后對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

陽性率=陽性數(shù)/檢測數(shù)×100%

轉(zhuǎn)陰率=（檢測數(shù)-陽性數(shù)）/檢測數(shù)×100%

流產(chǎn)率=流產(chǎn)數(shù)/妊娠牛數(shù)×100%

2 結(jié) 果

2.1 流產(chǎn)牛群布病血清學(xué)檢測結(jié)果

RBT、SAT、NH-GD 檢測成年牛陽性數(shù)分別為95 頭、73 頭、39 頭，陽性率分別為36.56%、28.18%和15.06%；犢牛陽性數(shù)均為0，見表1。

表1 流產(chǎn)牛群布病血清學(xué)檢測結(jié)果

2.2 布病疫苗免疫后180 d抗體檢測結(jié)果

布病疫苗免疫后180 d，RBT、SAT 檢測成年牛陽性數(shù)分別為78 頭和71 頭，轉(zhuǎn)陰率分別為64.55%和67.73%；犢牛陽性數(shù)分別為22 頭和19 頭，轉(zhuǎn)陰率分別為67.73%和73.61%。NH-GD 檢測陽性數(shù)均為0，見表2。

表2 布病苗免疫后180 d抗體檢測結(jié)果

2.3 流產(chǎn)情況統(tǒng)計(jì)

免疫前后胎次流產(chǎn)情況結(jié)果顯示，免疫前210 頭懷孕牛流產(chǎn)數(shù)為32 頭、流產(chǎn)率為15.23%，免疫后176頭懷孕牛流產(chǎn)數(shù)為2頭、流產(chǎn)率為1.13%，見表3。

表3 免疫前后妊娠牛流產(chǎn)情況統(tǒng)計(jì)

3 討 論

目前阿勒泰地區(qū)布病防控遵循“檢疫-撲殺陽性畜-免疫”的原則[9]。檢疫用RBT 檢測做初篩，SAT 檢測做確診[10]。而RBT 和SAT 檢測方法無法區(qū)別感染抗體和免疫抗體，根據(jù)當(dāng)前布病防控政策，動(dòng)物免疫后產(chǎn)生抗體被SAT檢測確診為陽性動(dòng)物，會(huì)導(dǎo)致“誤診-誤殺”，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)“誤診”也會(huì)影響布病陽性動(dòng)物數(shù)量的統(tǒng)計(jì)，從而干擾布病防控工作的效果評估。本試驗(yàn)利用NH-GD檢測出34頭SAT陽性牛為免疫抗體動(dòng)物，從而避免了34頭牛撲殺造成的經(jīng)濟(jì)損失。

試驗(yàn)中免疫前成年牛RBT檢測陽性率為36.56%，SAT檢測陽性率為28.18%，相同樣品RBT檢測陽性率高于SAT檢測，此情況可能與劉坤洋等[11]研究報(bào)道的RBT檢測很容易受到特異性抗體的影響呈假陽性的情況有關(guān)，因此在檢測中應(yīng)當(dāng)保證樣品新鮮，避免樣品反復(fù)凍融和溶血等因素的干擾。免疫前NH-GD 檢測陽性成年牛為39頭，而免疫前流產(chǎn)頭數(shù)為32頭，7頭牛未出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，或與王冰清[12]報(bào)導(dǎo)的動(dòng)物感染布病后可能不發(fā)病，在無癥狀的情況下不斷排菌的現(xiàn)象相關(guān)。免疫前成年牛NH-GD 檢測陽性率為15.06%的，而犢牛檢出率為0.00%，此結(jié)果可能與唐義國[13]研究報(bào)導(dǎo)的幼畜對布魯氏菌具有抵抗力有關(guān)，雖然犢牛血清檢測均為陰性，但仍可通過糞便傳播布病。180 d 后，SAT檢測，成年牛轉(zhuǎn)陰率為67.73%，犢牛轉(zhuǎn)陰率為73.61%，此結(jié)果與董浩等[14]研究報(bào)導(dǎo)的以600 億CFU/頭劑量布病A19 疫苗免疫3 月齡奶牛，90 d 抗體轉(zhuǎn)陰率大于90%，以及高洪霞[15]研究報(bào)導(dǎo)的以200 億CFU/頭劑量布病A19疫苗免疫12月齡奶牛，180 d轉(zhuǎn)陰率為84%的結(jié)果均不同，這可能與免疫劑量、動(dòng)物品種以及免疫操作等因素有關(guān)。排除飼養(yǎng)管理、天氣、應(yīng)急等因素造成的流產(chǎn)外，試驗(yàn)將該牛場流產(chǎn)率從15.23%降低到1.13%，可以判定該牛場布病得到了有效防控。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)對阿勒泰地區(qū)某牛場母牛流產(chǎn)進(jìn)行RBT初篩、SAT診斷、NH-GD辨別免疫和野毒感染后，撲殺并無害化處理陽性牛，免疫陰性牛，飼養(yǎng)環(huán)境嚴(yán)格消毒，有效降低了流產(chǎn)率，該流程不僅減少了布病“誤殺”，而且有效控制了布病的流行和發(fā)生，為阿勒泰地區(qū)布病防控提供了可以借鑒的方法。