潘勇權(quán)，區(qū)可誼，林小龍

廣東省惠州市第三人民醫(yī)院病理科，廣東惠州 516002

腫瘤作為臨床常見病癥，發(fā)病率呈逐年升高趨勢，大部分腫瘤患者因疾病發(fā)作早期階段缺乏特異性表現(xiàn)，臨床確診時疾病已經(jīng)進展至中晚期階段，導(dǎo)致患者錯過最佳治療時機。患者需要長期接受放療、化療等臨床治療，這不僅影響患者腫瘤的控制效果，還會增大其心理、生理雙重痛苦，因此應(yīng)重視腫瘤早期準(zhǔn)確診治[1-2]。以往臨床檢查腫瘤以病理診斷為主要方式，這一方式雖具有較高的診斷準(zhǔn)確性，但其作為一種創(chuàng)傷性診斷技術(shù)，不僅會對患者機體產(chǎn)生較大損傷，還會導(dǎo)致患者檢查依從性下降，而MRI、CT 等多種影像學(xué)技術(shù)雖然不會對患者機體產(chǎn)生創(chuàng)傷，但漏診率、誤診率均比較高，致使臨床應(yīng)用受限[3-4]。近年來，特殊染色技術(shù)、免疫組化技術(shù)因其具有創(chuàng)傷輕微、診斷準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢在腫瘤病理鑒別診斷中受到了廣泛關(guān)注并應(yīng)用[5]。相關(guān)研究顯示，特殊染色技術(shù)和免疫組化技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用在腫瘤病理鑒別中具有良好效果[6]，可為腫瘤患者的臨床診治提供參考依據(jù)，但這一結(jié)論還有待進一步驗證。本研究選取2020 年1 月—2023 年1 月廣東省惠州市第三人民醫(yī)院接受檢查的50 例疑似腫瘤患者為觀察對象，分析腫瘤病理鑒別中特殊染色技術(shù)聯(lián)合免疫組化技術(shù)的價值?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院接受檢查的50 例疑似腫瘤患者為研究對象。其中男26 例，女14 例；年齡36～76 歲，平均（56.09±8.63）歲。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢驗確診腫瘤；②惡性腫瘤；③資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①因自身原因無法耐受診斷者；②伴對效應(yīng)指標(biāo)觀測、判斷產(chǎn)生影響的其他病理或者生理者；③伴臟器功能不全者；④伴急性病癥者；⑤伴精神病癥者。

1.3 方法

兩組患者入院之后均接受穿刺活檢診斷，設(shè)置為金標(biāo)準(zhǔn)。

單用免疫組化技術(shù)診斷。選取二甲苯對組織切片予以脫蠟至水處理，然后選取檸檬酸鹽緩沖液pH6.0 高壓修復(fù)，修復(fù)時間控制在150 s 左右。待組織切片自然冷卻之后將其取出，選取蒸餾水對組織切片予以沖洗，沖洗時間控制在60 s 左右，選取3%過氧化氫予以阻斷處理，阻斷時間控制在10 min 左右，置入一抗孵育37℃，孵育時間控制在30 min 左右，選取磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffered saline,PBS）連續(xù)對組織切片予以沖洗，沖洗次數(shù)為兩次，3 min/次，二抗孵育37℃，孵育時間控制在20 min 左右，孵育完成之后選取PBS 連續(xù)對組織切片予以沖洗，沖洗次數(shù)為2 次，3 min/次，最后予以DAB 顯色處理，并選取蘇木素予以復(fù)染處理，選取流水對組織切片予以沖洗，沖洗時間控制在15 min 左右，沖洗后選取梯度酒精予以脫水處理，脫水完成之后選取二甲苯予以透明處理，最后選取中性樹膠封固處理組織切片。

聯(lián)用特殊染色技術(shù)（Masson 染色、Mallory 磷鎢酸蘇木素染色、VG 染色）、免疫組化技術(shù)診斷。特殊染色技術(shù)。對組織切片予以二甲苯脫蠟至水處理。①VG 染色。選取Van Gieson 液3 min 后清除，選取95%乙醇對組織予以分化脫水處理，選取無水乙醇予以脫水處理，脫水完成之后選取二甲苯予以透明處理，最后選取中性樹膠封固處理組織切片。②Masson 染色。選取Weigert 鐵蘇木素對組織切片予以浸染處理，浸染時間控制在7 min，浸染完成之后選取流水予以清洗，清洗時間控制在5 s，選取1 %鹽酸酒精予以分化處理，分化10 s 之后選取流水予以沖洗處理，沖洗時間控制在3 min 左右，選取立春紅酸性品紅染液予以浸染，浸染時間控制在7 min 左右，浸染完成之后選取流水予以沖洗，沖洗時間控制在10 s 左右，選取磷鉬酸溶液處理4～5 min，清除玻片表面磷鉬酸溶液，選取苯胺藍染液予以復(fù)染處理，時間控制在4 min 左右，清除玻片表面苯胺藍染液之后選取1%冰醋酸水溶液沖洗組織切片，無藍之后選取95%乙醇產(chǎn)分化脫水，選取無水乙醇對組織切片予以脫水處理，脫水完成之后選取二甲苯予以透明處理，最后選取中性樹膠封固處理組織切片。③Mallory 磷鎢酸蘇木素染色。于酸性高錳酸鉀液內(nèi)浸入組織切片予以氧化處理，氧化時間控制在7 min 左右，氧化完成之后選取流水予以沖洗處理，沖洗時間控制在10 s 左右，然后選取草酸液對組織切片予以漂白處理，漂白之后選取流水予以沖洗處理，沖洗時間控制在10 s 左右，再選取95%酒精予以沖洗之后將組織切片置入Mallory PTAH 液內(nèi)，加蓋儲存12 h～2 d，選取95%酒精對組織切片予以分化處理，浸洗至無多余染液脫下，選取流水予以沖洗，沖洗4 min 之后選取VG 染液將組織切片浸染1 min，清除玻片表面VG 染液之后選取95 %乙醇分化脫水，再選取無水乙醇對組織切片予以脫水處理，脫水完成之后選取二甲苯予以透明處理，最后選取中性樹膠封固處理組織切片。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察兩組腫瘤陽性檢出率。腫瘤陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)：①特殊染色。Masson 染色呈藍色，Mallory 磷鎢酸蘇木素染色呈藍色，VG 染色呈紅色，即可診斷為陽性，反之即診斷為陰性。②免疫組化。染色呈棕黃色，即可診斷為陽性，反之即診斷為陰性。以穿刺活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。

靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%；準(zhǔn)確率=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料符合正態(tài)分布，以（±s）表示，進行t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)（n）和率（%）表示，進行χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 單一及聯(lián)合檢查的陽性檢出率比較

穿刺活檢結(jié)果顯示50 例患者中呈現(xiàn)出陽性48 例，特殊染色技術(shù)檢出42 例，免疫組化技術(shù)檢出41 例，特殊染色技術(shù)聯(lián)合免疫組化技術(shù)檢出46例。3 種檢查方式陽性檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 單一及聯(lián)合檢查的陽性檢出率比較[n(%)]

2.2 單一及聯(lián)合檢查的診斷效能比較

特殊染色技術(shù)的靈敏度為85.42%、特異度為50.00%、準(zhǔn)確度為84.00%。免疫組化技術(shù)的靈敏度為83.33%、特異度為50.00%、準(zhǔn)確度為82.00%。特殊染色技術(shù)聯(lián)合免疫組化技術(shù)的靈敏度為93.75%、特異度為50.00%、準(zhǔn)確度為92.00%，聯(lián)合診斷的靈敏度、準(zhǔn)確度均優(yōu)于單一診斷，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 單一及聯(lián)合檢查的診斷結(jié)果（n）

3 討論

臨床上腫瘤根據(jù)性質(zhì)主要分為兩種類型，一種為良性腫瘤，另一種為惡性腫瘤。其中良性腫瘤患者的預(yù)后相對良好，大多數(shù)患者經(jīng)手術(shù)切除治療即可達到治愈目的，而惡性腫瘤患者的預(yù)后相對較差，臨床治療多選用放療、化療及手術(shù)聯(lián)合方案，不僅嚴(yán)重影響患者身心健康，還可能危及生命[7]。

現(xiàn)階段，腫瘤發(fā)病率呈逐年升高趨勢，主要與生活環(huán)境、飲食結(jié)構(gòu)、生活方式改變有關(guān)。腫瘤患者在疾病初期階段無明顯癥狀，臨床檢查極易出現(xiàn)漏診或者誤診的狀況。大部分腫瘤患者出現(xiàn)明顯癥狀時已經(jīng)進展至中晚期階段，不僅會導(dǎo)致患者錯過最佳治療，還會致使其預(yù)后質(zhì)量顯著下降，因此應(yīng)重視腫瘤病癥的早期準(zhǔn)確診斷[8]。目前，臨床診斷腫瘤病癥的方式呈多元化，且以活檢穿刺為診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”。此方法可對腫瘤患者的病灶類型、分期予以精準(zhǔn)判斷，但這一方式對患者機體產(chǎn)生的創(chuàng)傷較大，患者檢查過程中的配合度相對較低。雖然MRI、CT 等多種影像學(xué)檢查技術(shù)雖具有無創(chuàng)性，但用于腫瘤診斷中易出現(xiàn)漏診和誤診，致使臨床應(yīng)用受到限制。因此尋找更為先進、精準(zhǔn)的病理診斷技術(shù)已經(jīng)成為目前腫瘤醫(yī)學(xué)研究的熱點之一[9-11]。

近年來，特殊染色技術(shù)、免疫組化技術(shù)在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用受到了越來越多的關(guān)注；其中，免疫組化技術(shù)與電鏡觀察、特殊染色技術(shù)相類似，腫瘤病癥診斷中免疫組化技術(shù)以HE 切片為基礎(chǔ)。檢查過程中要求病理醫(yī)師對HE 切片予以詳細觀察，同時結(jié)合腫瘤患者的臨床表現(xiàn)、實驗室檢查結(jié)果及抗體條件等一系列信息對抗體予以篩查，在此基礎(chǔ)上對腫瘤患者作出全面評估，進一步提升腫瘤病癥診斷準(zhǔn)確性。雖然蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining, HE）切片有利于醫(yī)師全面觀察腫瘤組織，但這一技術(shù)在腫瘤診斷中依然存在誤診狀況，所以應(yīng)當(dāng)結(jié)合其他診斷技術(shù)與醫(yī)師經(jīng)驗對腫瘤作出診斷，在此基礎(chǔ)上確保診斷精準(zhǔn)性[12]。特殊染色技術(shù)作為腫瘤病理鑒別的常用方式，主要包括Masson 染色及VG 三色法染色等，多用于膠原纖維染色，可準(zhǔn)確鑒別腫瘤中的膠原纖維與平滑肌纖維，如在纖維肉瘤與平滑肌瘤、纖維瘤與神經(jīng)鞘瘤、纖維瘤與平滑肌瘤等腫瘤鑒別中具有顯著優(yōu)勢；彈力纖維組織染色中多選取Werigert 染色法，可準(zhǔn)確鑒別腫瘤組織，還可診斷心血管病癥。這一染色方法可清晰顯示腫瘤內(nèi)豐富的彈力球及彈力纖維，因此可為腫瘤診斷提供參考依據(jù)。黏液性物質(zhì)及糖原染色中多選取AB/PAS 染色、PAS 染色及胃黏膜組化染色，可準(zhǔn)確鑒別一部分腫瘤病癥，如肝細胞性肝癌、膽管癌等，前者糖原染色呈陽性，后者染色呈陰性，且于橫紋肌肉瘤、脊索瘤、汗腺瘤等染色中均呈陽性。同時，臨床上也經(jīng)常使用Fantana 與多氧化酶染色技術(shù)、Mallory 磷鎢酸蘇木素染色技術(shù)、Bennhola 剛果紅與甲基紫染色技術(shù)等一系列染色技術(shù)，且于腫瘤診斷中均具有良好效果[13-14]。本研究中，特殊染色技術(shù)聯(lián)合免疫組化技術(shù)的陽性檢出率為92.00%，明顯高于單一技術(shù)檢測（P＜0.05），相關(guān)學(xué)者在研究中得出，3 組診斷陽性率比較中，免疫組化組陽性率是63.23%，特殊染色組陽性率是58.82%，兩種聯(lián)合組陽性率是91.17%，明顯優(yōu)于單一檢測（P＜0.05）[14]，與本文結(jié)果相一致，提示腫瘤病理鑒別中特殊染色技術(shù)聯(lián)合免疫組化技術(shù)的診斷準(zhǔn)確性明顯高于單一免疫組化技術(shù)。

綜上所述，腫瘤病理鑒別中特殊染色技術(shù)聯(lián)合免疫組化技術(shù)的診斷準(zhǔn)確性明顯高于單一免疫組化技術(shù)，可進一步提升腫瘤陽性檢出率，并可為臨床腫瘤早期診治提供可靠依據(jù)。