陳山珊 李羿武 張鴻燕 顏偉泓 賴晨楠 韓 丹 李玲燕 張偉云，*

1.廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系/廈門市中藥生物工程重點實驗室，福建 廈門 361023；2.福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210023

南鶴虱，其別名為野蘿卜子或竊衣子，是傘形科植物野胡蘿卜(DaucuscarotaL.)的干燥成熟果實[1]。性平，味辛、微苦；歸脾、胃經(jīng)；具有驅(qū)蟲消積之效，常用來治療蛔蟲病、絳蟲病、蟲積腹痛等；用法：煎湯內(nèi)服(6～9 g或入丸、散)；外用(適量，煎水熏洗)[1]。南鶴虱最早記載于《救荒本草》，而在《本草求真》中曾提到南鶴虱常作為鶴虱(北鶴虱)的替代品，在南鶴虱正式收載于《中國藥典》(2005版)之前，南鶴虱的藥用都比較混亂[2]。

縱觀古今，在《中華本草》《中國藥典》2020年版等少數(shù)書籍中有關(guān)于南鶴虱有小毒，用于煎湯內(nèi)服的籠統(tǒng)描述[1，3]。雖然已有文獻(xiàn)[4]表明南鶴虱的揮發(fā)油基本無毒性，但是，目前國內(nèi)外有關(guān)南鶴虱的研究主要聚焦于南鶴虱揮發(fā)油的化學(xué)成分及其殺蟲、抗菌、抗癌等活性[5]，以及改善認(rèn)知功能障礙的作用[6]，而鮮有發(fā)現(xiàn)關(guān)于南鶴虱的毒性研究報道。隨著南鶴虱的藥理活性不斷被挖掘，應(yīng)用可能將越來越廣泛，故研究其水提液的安全性對于南鶴虱在臨床上用于煎湯內(nèi)服治療疾病具有重要意義。因此，本研究將初步探討南鶴虱水提物的急性毒性，明確南鶴虱的毒性強(qiáng)弱或最大給藥量，有利于臨床上合理、安全使用南鶴虱提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑與儀器

1.1.1 藥品 實驗所用南鶴虱(使用前過10目篩)采自中國河南省，并經(jīng)廈門醫(yī)學(xué)院向云亞老師鑒定。

1.1.2 試劑 5%苦味酸、純水。

1.1.3 儀器 篩網(wǎng)(10目)；高速粉碎機(jī)(QEY-300 g，浙江屹立工貿(mào)有限公司)；智能恒溫電熱套(ZNHW，邦西儀器科技上海有限公司)；電子分析天平(CP124C，奧豪斯儀器上海有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(N-1200B，上海愛朗儀器有限公司)；水浴鍋(SB-1200，上海愛朗儀器有限公司)；電子天平(CP512，上海愛朗儀器有限公司)；12號灌胃針；解剖器械。

1.2 研究對象 SPF級ICR小鼠，雌雄各半，體重20～25 g，購于杭州醫(yī)學(xué)院，由浙江省實驗動物質(zhì)量監(jiān)督檢測站進(jìn)行質(zhì)量檢測。雄性小鼠合格證編號(20180006026555)、雌性小鼠合格證編號(20180006026556)。動物飼養(yǎng)房室內(nèi)溫度為(25±5)℃，相對濕度為50%～70%。實驗期間，小鼠喂食普通飼料(北京華阜康生物科技股份有限公司)。

1.3 研究方法 本實驗的技術(shù)路線如圖1所示，研究方法主要包括南鶴虱水提液的制備、小鼠急性毒性實驗預(yù)實驗、小鼠最大給藥量實驗、統(tǒng)計學(xué)方法四個方面內(nèi)容。

圖1 實驗流程圖

1.3.1 南鶴虱水提液的制備 取南鶴虱干燥原藥材1000 g，粉碎，過10目篩，分為10份，每份約100 g，分別放入10個2000 mL的圓底燒瓶中，加10倍量純水，浸泡1 h后，加熱至沸騰，保持微微沸騰1 h，用8層紗布過濾，藥渣再用純水煎煮2次，每次煎煮至微沸后計時1 h，合并3次濾液，減壓濃縮至以灌胃針能自由通過的最大濃度(3.0 g 生藥/mL)的南鶴虱水提濃縮液。

1.3.2 小鼠急性毒性實驗預(yù)實驗 取8只小鼠，體重(20±2)g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組(空白對照組、給藥組)，每組4只，給藥前禁食不禁水 12 h，給藥組以最大給藥體積(40 mL·kg-1)和最大藥物濃度(3.0 g生藥/mL)灌胃給藥，空白對照組灌胃等量純水，觀察小鼠的毒性反應(yīng)癥狀及死亡情況，并連續(xù)觀察7d。

1.3.3 小鼠最大給藥量實驗 取小鼠20只，體重為(20±2)g，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對照組和給藥組2組，每組各10只，禁食不禁水12 h后，以最大濃度(3.0 g生藥/mL)，最大體積(40 mL·kg-1)灌胃小鼠南鶴虱水提物濃縮液，連續(xù)灌胃2次(每隔8 h灌胃1次)，觀察并記錄灌胃給藥后小鼠的毒性反應(yīng)癥狀及死亡情況，連續(xù)觀察14 d，每日14∶00開始記錄存活小鼠體重和攝食量，觀察有無死亡及是否有毒性反應(yīng)癥狀。死亡動物即刻尸檢，肉眼觀察其主要臟器變化。

2 結(jié)果

2.1 小鼠急性毒性實驗預(yù)實驗 如表1所示，在預(yù)實驗中，第一次灌胃后個別小鼠出現(xiàn)蜷縮、活動緩慢，但灌胃后約5 h恢復(fù)正常。觀察7日，兩組小鼠均無死亡，小鼠的外觀、攝食攝水、行為活動、呼吸表現(xiàn)等未見異常，無法測出其LD50。

表1 預(yù)實驗中南鶴虱水提物對小鼠7 d內(nèi)中毒及死亡情況

2.2 最大給藥量實驗下南鶴虱水提物對小鼠體重變化的影響 如表2所示，與空白對照組(雌鼠)相比，給藥組雌性小鼠的體重?zé)o顯著性差異；與空白對照組(雄鼠)相比，給藥組的雄性小鼠第2～9天的體重有顯著性差異。給藥組和空白對照組的雌性小鼠、雄性小鼠體重均有所增長，且變化趨勢基本一致，表明以南鶴虱水提物的最大給藥量灌胃小鼠，對其體重?zé)o不良影響。

表2 小鼠灌胃最大劑量南鶴虱水提物后14 d內(nèi)的體重變化

2.3 最大給藥量實驗下南鶴虱水提物對小鼠攝食量的影響 如表3可知，空白對照組和給藥組小鼠第1天的攝食量較低，可能是由于灌胃對小鼠的刺激，小鼠還未適應(yīng)，導(dǎo)致第1天攝食量較低。空白對照組和給藥組小鼠攝食量呈增長趨勢，但無顯著差異，無時間-效應(yīng)關(guān)系，說明南鶴虱水提物對小鼠攝食量無顯著影響。

表3 南鶴虱水提物對小鼠攝食量的影響 (n=5)

2.4 南鶴虱水提物對小鼠臟器的影響 如表4所示，可知與空白對照組小鼠相比，給藥組雄性、雌性小鼠的心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肺臟指數(shù)及腎臟指數(shù)均無顯著性差異(P>0.05)；空白對照組及給藥組小鼠的臟器均無明顯肉眼可見的病變，表明以最大給藥量的南鶴虱水提物灌胃小鼠并未對小鼠臟器造成明顯損傷。

表4 南鶴虱水提物對小鼠臟器的影響

3 討論

在急性毒性實驗中，受試藥以最大允許濃度和最大允許體積給藥后，不能得到LD50，可以采取最大耐受量實驗或最大給藥量實驗[7]。最大給藥量是指在合理的最大給藥濃度及給藥容量的前提下，以允許最大劑量給予實驗動物，觀察動物的反應(yīng)，估計其能達(dá)到人用量的多少倍，從而對其安全性進(jìn)行評估[8]。

通過實驗得出MTD可以大致推測新藥的安全范圍，有利于臨床確定用藥劑量[9]。除此之外，MTD也是研究藥物急性毒性的重要參考信息。實驗中未能測得南鶴虱水提物的LD50，故采取最大給藥量法進(jìn)行實驗，觀察小鼠反應(yīng)癥狀并得出南鶴虱水提物給小鼠灌胃給藥的最大給藥量。

在實驗中，小鼠能承受的最大給藥體積為 40 mL/kg；將南鶴虱水提液濃縮至最大濃度(3.0 g 生藥/mL)，此濃度的水提濃縮液能通過12號灌胃針頭，如果濃縮液高于此濃度，提取物易堵塞灌胃針頭而無法灌胃給藥[10]。在最大給藥量實驗中，以南鶴虱水提濃縮液的最大給藥量灌胃小鼠，給藥后 14 d內(nèi)小鼠未出現(xiàn)死亡或毒性反應(yīng)癥狀。觀察結(jié)束后，將所有小鼠處死并進(jìn)行解剖，通過肉眼觀察，空白對照組和給藥組的雌雄小鼠的主要臟器器官均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見的病理病變。臟器指數(shù)是實驗動物某臟器的重量與其體重的比值，在正常情況下，比值比較恒定，而當(dāng)動物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，臟器指數(shù)也隨之出現(xiàn)變化[11]。實驗中將小鼠各主要臟器器官稱重，計算臟器系數(shù)[12]。給藥組的臟器指數(shù)與空白對照組相比，沒有太大的波動，提示南鶴虱水提物的毒性較低或基本無毒。

實驗記錄了灌胃給藥后小鼠每日的攝食量，通過比較發(fā)現(xiàn)，灌胃后小鼠的攝食量較空白對照組小鼠無明顯差異，且由于小鼠的個體差異，攝食量偶有異常增加或減少，但無毒理學(xué)意義，故可初步判斷南鶴虱水提物對小鼠的攝食量無明顯影響。

實驗中，在最大給藥劑量下(240 g/kg)，南鶴虱水提物對小鼠無明顯急性毒性反應(yīng)，其耐受量是人用量的1600倍。結(jié)果表明南鶴虱水提物用藥安全范圍較寬，在規(guī)定劑量下無毒性，但仍需要進(jìn)一步研究其水煎液中是否含有毒性成分并進(jìn)行長期毒性實驗，以期提供更充分、詳實的實驗數(shù)據(jù)，進(jìn)一步為南鶴虱的臨床用藥提供更加可靠的參考。