韓曉　高明夫　徐慧

摘要：古龍酸母液（RAE）和巨大芽孢桿菌廢液（CBS）是維生素C工業(yè)生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的液體廢棄物。采用鹽堿性土壤棉花盆栽試驗(yàn)，通過CBS包被棉花種子并施澆RAE稀釋液，以評(píng)估維生素C發(fā)酵工業(yè)廢棄物對(duì)棉花種子萌發(fā)的影響以及在農(nóng)業(yè)上的資源化利用潛力。結(jié)果表明，CBS包被種子、施加稀釋50倍RAE或兩者聯(lián)合使用均可以明顯提高種子萌發(fā)率，促進(jìn)根的伸長(zhǎng)和鮮質(zhì)量的增加，且兩者聯(lián)合使用效果更好。一方面，兩者聯(lián)合使用可增加土壤有機(jī)碳含量并在發(fā)芽期使土壤pH值從8.2降低至6.5，為種子萌發(fā)提供更有利的外部環(huán)境條件，使種子發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)分別提高了37.49%、54.55%和44.09%。另一方面，通過提高L-古洛糖酸-1，4-內(nèi)酯氧化酶基因表達(dá)水平，根部維生素C含量提高87.73%，增強(qiáng)了種子在發(fā)芽期的非生物脅迫抗性，促進(jìn)根的生長(zhǎng)（10 d時(shí)的根長(zhǎng)和鮮質(zhì)量分別增加19.33%和49.64%）；與棉花根細(xì)胞壁形成相關(guān)的內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因（ECA）和木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖苷酶/水解酶基因（XTH）的表達(dá)在多數(shù)試驗(yàn)時(shí)期明顯上調(diào)，也表明了根部發(fā)育更活躍。通過CBS包被棉花種子和施加RAE影響鹽堿土中棉花種子萌發(fā)的試驗(yàn)研究，為資源化利用維生素C工業(yè)廢棄液并開發(fā)出一種鹽堿土棉花種植新技術(shù)提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：維生素C工業(yè)廢棄液；鹽堿土；有機(jī)質(zhì)；棉花；萌發(fā)；鹽脅迫

中圖分類號(hào)：Q564；S562.01文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2023）17-0105-06

棉花是我國(guó)主要經(jīng)濟(jì)作物之一。據(jù)國(guó)家統(tǒng)計(jì)局統(tǒng)計(jì)，2021年新疆棉花產(chǎn)量達(dá)512.9萬(wàn)t，占全國(guó)棉花總產(chǎn)量的89.5%。得益于新疆獨(dú)特的光熱條件，新疆棉花擁有較高的品質(zhì)優(yōu)勢(shì)，是新疆農(nóng)業(yè)支柱性經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)［1］。作為一種耐鹽作物，棉花可以較好地適應(yīng)鹽堿土環(huán)境，也是鹽漬土地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的主要先鋒作物。但棉花種子在萌發(fā)出苗階段對(duì)土壤鹽堿度敏感，在此期間遭受鹽堿脅迫會(huì)抑制種子活力［2］。堿性鹽脅迫的危害遠(yuǎn)大于中性鹽脅迫，鹽堿脅迫導(dǎo)致植物細(xì)胞質(zhì)膜被破壞，代謝紊亂，阻礙植物的生長(zhǎng)發(fā)育［3］。隨著鹽堿濃度的增加，種子發(fā)芽率、胚芽長(zhǎng)度等均有降低的趨勢(shì)［4］，影響植物種子萌發(fā)過程中內(nèi)部物質(zhì)轉(zhuǎn)化，降低酶活性，抑制種子萌發(fā)［5］，最終導(dǎo)致棉花發(fā)芽率低、幼苗瘦弱、減產(chǎn)等后果［6-7］。作物出苗是保證作物產(chǎn)量的首要前提，由于棉花播種萌發(fā)過程中會(huì)受到土壤酸堿度、鹽分含量、種子質(zhì)量等因素的影響，導(dǎo)致棉花萌發(fā)狀況和出苗率參差不齊，進(jìn)而影響棉花種植密度和產(chǎn)量，所以提高棉花萌發(fā)率與出苗率對(duì)提高棉花產(chǎn)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義［8］。有研究表明，適宜濃度的蘋果酸可緩解銅脅迫對(duì)珊瑚櫻種子萌發(fā)的抑制作用，提高種子發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)，增強(qiáng)幼苗脅迫抵抗能力［9］。檸檬酸或低濃度阿魏酸和香豆酸可促進(jìn)甜瓜種子發(fā)芽［10］。楊洪兵的研究表明，適宜濃度的外源蘋果酸和檸檬酸對(duì)鹽脅迫具有較好的緩解作用，對(duì)鹽脅迫下蕎麥種子發(fā)芽率、活力指數(shù)及幼苗生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)效應(yīng)［11］。此外，具有解磷功能的芽孢桿菌也可促進(jìn)種子萌發(fā)和胚軸伸長(zhǎng)［12］。

古龍酸母液（RAE）是工業(yè)上通過二步微生物發(fā)酵法生產(chǎn)維生素C前體化合物（2-酮基-L-古龍酸，簡(jiǎn)稱2KGA）過程中產(chǎn)生的酸性廢液，其主要成分是2KGA、甲酸、草酸混合物。我國(guó)是世界上最大的維生素C（VC）生產(chǎn)和供應(yīng)國(guó)，每年排放約5萬(wàn)t廢棄RAE和12萬(wàn)t巨大芽孢桿菌廢液（CBS）［13］。筆者推測(cè)含有低分子量有機(jī)酸的RAE和含有巨大芽孢桿菌的CBS具有促進(jìn)鹽堿條件下作物種子萌發(fā)的潛力。本研究采用CBS對(duì)棉花種子進(jìn)行包被，同時(shí)聯(lián)合沖施RAE稀釋液，探究二者對(duì)新疆鹽堿土中棉花種子萌發(fā)過程以及關(guān)鍵基因表達(dá)和代謝物等因素的影響，以期為RAE和CBS的資源化利用提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)提供一種具有應(yīng)用潛力的促鹽堿土中棉花種子萌發(fā)的新技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2021年7月1—30日在中國(guó)科學(xué)院沈陽(yáng)應(yīng)用生態(tài)研究所環(huán)境微生物組實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)土壤取自新疆阿克蘇地區(qū)庫(kù)車市棉花種植區(qū)，土壤pH值為8.26，含水量為7.3%，土壤有機(jī)碳、全氮含量分別為12.44、0.67 g/kg，土壤銨態(tài)氮、硝態(tài)氮、有效磷的含量分別為15.78、8.74、22.07 mg/kg。試驗(yàn)所用棉花種子為陸地棉種子。

1.2 盆栽試驗(yàn)

共設(shè)計(jì)4個(gè)試驗(yàn)組，每組設(shè)3次重復(fù)。對(duì)照組（CK）：水包被+水施澆；處理組1（RAE）：水包被+稀釋50倍RAE施澆；處理組2（CBS）：CBS包被+水施澆；處理組3（RC）：CBS包被+稀釋50倍RAE施澆。包被處理：種子在CBS液中浸濕后取出，分散在培養(yǎng)皿中，置于通風(fēng)處24 h至干燥。重復(fù)上述步驟1次，即共包被2次。

RAE和RC處理施澆稀釋50倍RAE后鋪種覆土，CK和CBS處理施加等量清水后鋪種覆土，每盆150顆種子。每天對(duì)已發(fā)芽的種子（芽長(zhǎng)超過種子長(zhǎng)度1/2）進(jìn)行計(jì)數(shù)和測(cè)量根長(zhǎng)度，直到連續(xù)3 d沒有新的種子萌發(fā)為止，并測(cè)定土壤的pH值變化。

1.3 種子發(fā)芽參數(shù)

總發(fā)芽率（GP）指測(cè)試種子發(fā)芽數(shù)占測(cè)試種子總數(shù)的比例。

GP=（n/N）×100%。

式中：n為最終發(fā)芽的種子數(shù)；N為試驗(yàn)種子數(shù)。

發(fā)芽速率（GR）計(jì)算公式如下：

式中：GPt為第t天（t=1，2，3，…）的發(fā)芽率；Dt為相應(yīng)的發(fā)芽時(shí)間，d。

發(fā)芽指數(shù)（GI）指種子發(fā)芽數(shù)與發(fā)芽需要天數(shù)之比。

式中：Gt為當(dāng)天的發(fā)芽數(shù)（t=1，2，3，…）；Dt為相應(yīng)的發(fā)芽時(shí)間，d。

活力指數(shù)（VI）是種子發(fā)芽速率和生長(zhǎng)量的綜合反映，是種子活力的更好指標(biāo)。

式中：Lr為發(fā)芽種子的平均根長(zhǎng)度，mm。

1.4 土壤有機(jī)碳含量、pH值及植物維生素C含量的測(cè)定

土壤pH值采用電位法［14］測(cè)定。稱取過2 mm孔徑篩的風(fēng)干土樣5 g至燒杯中，加入12.5 mL去除CO2的蒸餾水，攪拌1～2 min，25 ℃下，搖床振蕩 30 min 后進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)電極插入待測(cè)液中，靜置片刻，待讀數(shù)穩(wěn)定后記下pH值。

有機(jī)碳含量的測(cè)定采用元素分析儀測(cè)定法［15］。土壤風(fēng)干后，用1 mol/L鹽酸去除HCO-3/CO2-3，再次風(fēng)干后用研缽研磨并過孔徑為0.05 mm的土壤篩，稱取50 mg土壤樣品，并用錫箔紙包裹好，利用元素分析儀（multi N/C 3100，德國(guó)耶拿分析儀器股份公司）測(cè)定有機(jī)碳含量。

植物維生素C含量的測(cè)定參考Gao等的方法［16］，采用高效液相色譜法。測(cè)定樣品取自栽培10 d時(shí)收集的棉花根系。在液氮速凍下研磨樣品，在冰浴條件下，將其溶于2 mL的10 mg/mL偏磷酸中。在 4 ℃ 條件下，勻漿離心（轉(zhuǎn)速7 200 g） 10 min，上清液用注射過濾器（0.22 μm）過濾后，將20 μL濾液注入AQ-C18色譜柱中進(jìn)行分析。檢測(cè)條件：流動(dòng)相，20 mmol/L磷酸二氫鈉溶液（pH值2.8） ∶乙腈=95 ∶5；流速為1.0 mL/min；溫度為 40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為 243 nm。根據(jù)維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品中維生素C的含量。

1.5 細(xì)胞壁和維生素C代謝酶基因表達(dá)量測(cè)定

選取5個(gè)與植物細(xì)胞壁合成以及維生素C代謝相關(guān)的基因，分別是內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因（ECA）、ω-羥基棕櫚酸O-阿魏酰轉(zhuǎn)移酶基因（HFT）、果膠甲酯酶6基因（PME6）、木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖苷酶/水解酶基因（XTH）和L-古洛糖酸-1，4-內(nèi)酯氧化酶基因（GLO）進(jìn)行相對(duì)基因表達(dá)量測(cè)定。

相對(duì)基因表達(dá)量測(cè)定方法：實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）法。稱取80～100 mg棉花根系樣品，液氮速凍后研磨至無(wú)明顯組織碎片，總RNA的提取按照SteadyPure Universal RNA Extraction Kit ［Accurate Biotechnology （Human） co.，Ltd］說(shuō)明執(zhí)行。cDNA的制備按照EvoM-MLV RT Premix ［Accurate Biotechnology （Human） co.，Ltd］說(shuō)明執(zhí)行，10 μL反應(yīng)體系中，總RNA量不超過500 ng。RT-qPCR反應(yīng)體系按照SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit ［Accurate Biotechnology （Human） co.，Ltd］說(shuō)明執(zhí)行，檢測(cè)平臺(tái)為Rotor-Gene 3000，在 20 μL 的反應(yīng)體系里，cDNA模板量不超過 100 ng，引物見表1。程序設(shè)定：熱啟動(dòng)95 ℃，5 min，1個(gè)循環(huán)；變性 95 ℃，15 s；退火60 ℃，35 s；延伸72 ℃，45 s，45個(gè)循環(huán)，基因相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCT算法計(jì)算。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2020軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用SPSS 21.0軟件在0.05水平上對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，檢驗(yàn)處理組與對(duì)照組差異的顯著性，采用Graphpad Prism 8.0軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 棉花種子發(fā)芽率的日變化

由圖1可知，各組棉花種子的累積發(fā)芽率在孵育9 d時(shí)趨于平穩(wěn)，其中CK在孵育9 d時(shí)累積發(fā)芽率為51.56%。各處理棉花種子萌發(fā)9 d內(nèi)的累計(jì)發(fā)芽率均明顯高于CK。RAE處理的發(fā)芽率較CK提高7.11百分點(diǎn)，CBS處理的發(fā)芽率較CK提高14.66百分點(diǎn)，RC處理的發(fā)芽率較CK提高19.33百分點(diǎn)。上述結(jié)果表明，RAE和CBS聯(lián)合使用（RC處理）對(duì)棉花種子發(fā)芽率的提升效果最好。

2.2 種子萌發(fā)各參數(shù)的變化

由表2可知，各處理組的種子萌發(fā)相關(guān)參數(shù)，即總發(fā)芽率（GP）、發(fā)芽速率（GR）、發(fā)芽指數(shù)（GI）與CK相比均有極顯著增加（P<0.01），尤其是RAE與CBS聯(lián)合使用的RC處理分別使上述參數(shù)提高了37.49%、54.55%、44.09%?；盍χ笖?shù)（VI）是體現(xiàn)種子萌發(fā)活力的主要參數(shù)，施加稀釋50倍RAE、CBS包被種子單獨(dú)使用或稀釋50倍RAE與CBS包被種子聯(lián)合使用對(duì)VI都有極顯著影響，稀釋50倍RAE與CBS包被種子聯(lián)合使用使VI提高了87.05%，表明兩者聯(lián)合使用可以極顯著促進(jìn)棉花種子萌發(fā)。

2.3 RAE與CBS對(duì)種子萌發(fā)后根生長(zhǎng)的影響

由圖2可知，3種不同處理均可促進(jìn)棉種發(fā)芽后根的生長(zhǎng)。4 d時(shí)，相較于CK，RAE、CBS、RC處理的根部長(zhǎng)度分別增加32.08%、34.54%、54.43%；6 d時(shí)，根長(zhǎng)分別顯著或極顯著增加32.08%、52.40%、48.03%；10 d時(shí)，RAE處理與CK無(wú)顯著差異，而CBS處理和RC處理分別極顯著增加13.76%和19.33%。

不同處理對(duì)根部鮮質(zhì)量的影響與對(duì)根長(zhǎng)度的影響趨勢(shì)大體相同，RAE、CBS、RC處理均能增加根鮮質(zhì)量，且RC處理效果最好。在整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)，各處理組種子發(fā)芽后，根鮮質(zhì)量均有增加。4 d時(shí)，3種處理的根鮮質(zhì)量分別增加4.39%、28.69%和31.61%；6 d時(shí)，根鮮質(zhì)量分別增加38.44%、36.45%和85.75%；10 d時(shí)，根鮮質(zhì)量分別顯著或極顯著增加18.55%、25.95%和49.64%，依然是RC處理效果最好。

2.4 細(xì)胞壁合成相關(guān)基因表達(dá)變化

由圖3可知，4個(gè)細(xì)胞壁合成相關(guān)基因的表達(dá)水平在不同時(shí)期變化有所不同。相比于CK，RAE處理能顯著或極顯著提高HFT和XTH基因的表達(dá)，并維持在較高的表達(dá)水平。在試驗(yàn)中期（6 d時(shí)），觀察到CBS處理的4個(gè)基因的表達(dá)水平均提高。RC處理的ECA和XTH表達(dá)量則處于較高水平（6 d 時(shí)的XTH表達(dá)量除外）。

2.5 GLO表達(dá)水平對(duì)維生素C代謝的影響

L-古洛糖酸-1，4-內(nèi)酯氧化酶（GLO）是植物維生素C合成途徑中的關(guān)鍵酶之一，維生素C的積累與GLO的表達(dá)水平密切相關(guān)。由圖4可知，在試驗(yàn)前期（4 d時(shí)），RAE處理的GLO表達(dá)水平較CK極顯著提升，但之后出現(xiàn)下調(diào)。在不同時(shí)間點(diǎn)，CBS處理的GLO表達(dá)水平一直高于CK。而RC處理同樣能夠促使GLO維持在較高的表達(dá)水平， 并且在中期（6 d時(shí)）高于CBS處理。同時(shí)，各處理組根部10 d時(shí)的維生素C含量均顯著或極顯著高于CK，其中，RC處理對(duì)維生素C積累的促進(jìn)效果最好，根部維生素C含量較CK提高87.73%。

2.6 土壤有機(jī)碳含量與pH值變化

新疆庫(kù)車市棉花種植區(qū)土壤pH值為8.26，接近重度堿性（pH值為8.5），堿性環(huán)境是種子萌發(fā)的關(guān)鍵限制因素之一。從圖5可以看出，施澆RAE（RAE和RC處理）促進(jìn)了土壤有機(jī)碳的積累，并且土壤pH值最低降至6.5。可見，RAE在一段時(shí)間內(nèi)可以為種子萌發(fā)提供較適宜的酸堿環(huán)境，并為提高土壤水溶性有機(jī)碳含量做出重要貢獻(xiàn)，提供了相對(duì)有利的種子萌發(fā)環(huán)境。

3 討論與結(jié)論

維生素C發(fā)酵工業(yè)所產(chǎn)生的廢棄RAE和CBS排放量大、化學(xué)需氧量（COD）高，一直以來(lái)被作為廢水進(jìn)行處理，造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)和環(huán)保壓力。因而，探索其可能被資源化再利用的新途徑是一項(xiàng)迫切需求。筆者所在團(tuán)隊(duì)的近期研究表明，二者的施用可以增加土壤有機(jī)質(zhì)含量，并提高作物維生素C含量，進(jìn)而提高作物在鹽堿土壤上的產(chǎn)量［17］，并且2KGA作為RAE的主要成分能解除鹽脅迫對(duì)作物生長(zhǎng)的抑制作用已被證實(shí)［16］，但二者對(duì)作物種子萌發(fā)，尤其是在鹽堿性土壤中對(duì)棉種萌發(fā)的影響尚不清楚。

本研究中，施澆RAE或CBS包被棉花種子均能提高種子的發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)等發(fā)芽參數(shù)，促進(jìn)了棉花種子的萌發(fā)，并且二者聯(lián)合使用的效果更好。已有研究表明，種子從萌發(fā)到幼苗期對(duì)鹽堿脅迫十分敏感［18-19］。有報(bào)道認(rèn)為，利用秸稈等生物炭或有機(jī)酸可以提高土壤有機(jī)碳含量，改良鹽堿化土壤，有機(jī)酸還可以降低土壤pH值，并緩解鹽脅迫對(duì)植物的危害［20-21］。本試驗(yàn)中，RAE和CBS聯(lián)合施用情況下，一方面，RAE中的2KGA作為一種低分子量有機(jī)酸可以提高土壤有機(jī)質(zhì)含量、豐富土壤微生物種群［22］，降低堿性土壤的pH值；另一方面，CBS中的主要微生物為巨大芽孢桿菌，該菌具有解磷功能，并在土壤中存在明顯的根際效應(yīng)［23］，促進(jìn)固態(tài)磷轉(zhuǎn)化為可供植物利用的有效磷，增加土壤養(yǎng)分和有益菌豐度，抑制病原菌屬［24］，同時(shí)可促進(jìn)種子萌發(fā)［25］。因此，二者的聯(lián)合使用為棉花種子在鹽堿土中的萌發(fā)提供了更有利的土壤環(huán)境，進(jìn)而提高了種子發(fā)芽率。

本研究發(fā)現(xiàn)，RAE和CBS處理后均能促進(jìn)棉種發(fā)芽后根部長(zhǎng)度和鮮質(zhì)量的增加，且兩者聯(lián)合使用的作用效果更好。Gao等研究發(fā)現(xiàn)，2KGA能促進(jìn)GLO表達(dá)量增加，并提高維生素 C 含量，有效緩解鹽脅迫的抑制作用，并促進(jìn)植物幼苗和側(cè)根的生長(zhǎng)［16］。在植物中，GLO（EC 1.1.3.8）催化L-古洛糖酸-1，4-內(nèi)酯向維生素C的轉(zhuǎn)化。本研究中，澆施富含2KGA的RAE時(shí)，棉花根系GLO基因表達(dá)在短時(shí)間內(nèi)快速上調(diào)，并且根部的維生素C含量升高，筆者推測(cè)這是強(qiáng)化非生物脅迫抗性的主要原因。Aghaei等也指出，增強(qiáng)內(nèi)源維生素C含量可以促進(jìn)根的發(fā)育，同時(shí)能夠改善植物的能量代謝［26］，進(jìn)而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)［27］。此外，有研究指出，芽孢桿菌通過對(duì)根分泌物的趨化作用調(diào)控根際細(xì)菌群落，提高植物維生素C含量［28］，為促進(jìn)根系發(fā)育創(chuàng)造了條件。因此，RAE和CBS處理提高根部維生素C積累是促進(jìn)胚根順利向根發(fā)育的重要機(jī)制之一。ECA、XTH是與植物根部細(xì)胞生長(zhǎng)分裂時(shí)與細(xì)胞壁發(fā)育有關(guān)的基因，這2個(gè)基因表達(dá)水平的升高也證實(shí)了根系發(fā)育更加活躍，表明了二者參與了種子萌發(fā)、植株發(fā)育過程，在根系建成與緩解脅迫中發(fā)揮重要的作用［29-30］。此外，最新研究表明，RAE與CBS聯(lián)合使用可以促進(jìn)作物的生長(zhǎng)，提高生物量，并且相對(duì)于單獨(dú)使用RAE或CBS的效果更好［31］，再次證實(shí)二者在聯(lián)合使用時(shí)將發(fā)揮更好的作用。

工業(yè)生產(chǎn)維生素C所產(chǎn)生的液體廢棄物RAE和CBS均能促進(jìn)鹽堿性土壤中棉花種子的萌發(fā)和根系發(fā)育，且兩者聯(lián)合使用效果更佳。一方面，通過改善土壤理化性質(zhì)，增加土壤有機(jī)碳含量，降低土壤pH值，促進(jìn)棉花種子萌發(fā)。另一方面，增強(qiáng)GLO基因的表達(dá)，提高根部維生素C的合成，提高種子萌發(fā)階段的鹽堿脅迫抗性，促進(jìn)根的發(fā)育。本研究為RAE和CBS的資源化利用提供了重要理論依據(jù)，同時(shí)為我國(guó)鹽堿土棉花種植提供了一項(xiàng)簡(jiǎn)便易行的提高種子萌發(fā)率的新技術(shù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］梁亞軍，李雪源，鄭巨云，等. 新疆2019年棉花產(chǎn)業(yè)情況概述及存在問題與策略［J］. 棉花科學(xué)，2020，42（1）：14-20.

［2］李雙男，郭慧娟，王 晶，等. 不同鹽堿脅迫對(duì)棉花種子萌發(fā)的影響［J］. 種子，2018，37（1）：38-45.

［3］Fang S M，Hou X，Liang X L.Response mechanisms of plants under saline-alkali stress［J］. Frontiers in Plant Science，2021，12：667458.

［4］Zhang H，Liu X L，Zhang R X，et al. Root damage under alkaline stress is associated with reactive oxygen species accumulation in rice （Oryza sativa L.）［J］. Frontiers in Plant Science，2017，8：1580.

［5］王妮妮. 混合鹽堿脅迫對(duì)皂莢種子萌發(fā)的影響［J］. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，45（4）：14-18，27.

［6］An M J，Wang X L，Chang D D，et al. Application of compound material alleviates saline and alkaline stress in cotton leaves through regulation of the transcriptome［J］. BMC Plant Biology，2020，20（1）：462.

［7］白燈莎·買買提艾力，李寒暝，張少民，等. 不同棉花品種種子萌發(fā)階段耐鹽性綜合評(píng)價(jià)［J］. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，48（1）：18-24.

［8］薛金利. 基于無(wú)人機(jī)可見光影像的棉花苗情監(jiān)測(cè)［D］. 石河子：石河子大學(xué)，2020.

［9］張志忠，孫志浩，陳文輝，等. 有機(jī)酸類化感物質(zhì)對(duì)甜瓜的化感效應(yīng)［J］. 生態(tài)學(xué)報(bào)，2013，33（15）：4591-4598.

［10］李芹梅，潘曲波，聞?dòng)阑?，? 外源低分子有機(jī)酸對(duì)銅脅迫下珊瑚櫻種子萌發(fā)的影響［J］. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2022，50（6）：20-27，34.

［11］楊洪兵. 外源有機(jī)酸對(duì)鹽脅迫下蕎麥種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的效應(yīng)［J］. 吉林農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，38（4）：5-7.

［12］林志偉，肖翠紅，白鑫雨，等. 解磷菌DQ-N對(duì)大豆種子萌發(fā)及苗期生長(zhǎng)的影響［J］. 大豆科學(xué)，2021，40（5）：676-681.

［13］徐 慧，楊偉超，李嘉文. 維生素C第二步混菌發(fā)酵技術(shù)研究新進(jìn)展［J］. 微生物學(xué)雜志，2021，41（2）：1-9.

［14］吳淑娟，任運(yùn)濤，吳彩霞，等. 草地土壤pH值測(cè)定方法比較研究［J］. 土壤通報(bào)，2018，49（2）：343-348.

［15］高翠萍，李 巖，劉美英，等. Vario MACRO cube元素分析儀測(cè)定土壤碳氮方法研究［J］. 北方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，45（1）：76-79.

［16］Gao M F，Sun H，Shi M J，et al. 2-Keto-L-gulonic acid improved the salt stress resistance of non-heading Chinese cabbage by increasing L-ascorbic acid accumulation［J］. Frontiers in Plant Science，2021，12：697184. [HJ2mm]

［17］Kong T，Xu H，Wang Z Y，et al. Effect of a residue after evaporation from industrial vitamin C fermentation on chemical and microbial properties of alkali-saline soil［J］. Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences，2014，27（4）：1069-1074.

［18］趙 穎，魏小紅，赫亞龍，等. 混合鹽堿脅迫對(duì)藜麥種子萌發(fā)和幼苗抗氧化特性的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報(bào)，2019，28（2）：156-167.

［19］張安琪，鄭春蓮，李宗毅，等. 棉花成苗和幼苗生長(zhǎng)對(duì)咸水滴灌的響應(yīng)特征［J］. 灌溉排水學(xué)報(bào)，2018，37（10）：16-22.

［20］彭 浩，宋文路，王曉強(qiáng). 水楊酸、脫落酸對(duì)鹽脅迫下玉米種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響［J］. 玉米科學(xué)，2016，24（6）：75-78，87.

［21］劉 強(qiáng)，袁延飛，劉一帆，等. 生物炭對(duì)鹽漬化土壤改良的研究進(jìn)展［J］. 地球科學(xué)進(jìn)展，2022，37（10）：1005-1024.

［22］孔 濤，孟凡浩，關(guān) 飛，等. 古龍酸母液對(duì)鹽堿土壤微生物數(shù)量和酶活性的影響［J］. 環(huán)境化學(xué)，2015，34（11）：2053-2058.

［23］趙小蓉，林啟美，孫焱鑫，等. 小麥根際與非根際解磷細(xì)菌的分布［J］. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2001，16（1）：111-115.

［24］王 萍，李一曼，王雪佳，等. 巨大芽孢桿菌對(duì)土壤理化性質(zhì)及植物富集鎘鋅的影響［J］. 環(huán)境科學(xué)，2022，43（12）：5798-5807.

［25］韓麗珍，林佳靜，鄭 歡，等. 一株溶磷菌的抗逆促生特性及對(duì)種子萌發(fā)的研究［J］. 種子，2019，38（10）：34-40.

［26］Aghaei K，Ehsanpour A A，Komatsu S. Proteome analysis of potato under salt stress［J］. Journal of Proteome Research，2008，7（11）：4858-4868.

［27］Niu J P，Chen Z，Yu S，et al. Ascorbic acid regulates nitrogen，energy，and gas exchange metabolisms of alfalfa in response to high-nitrate stress［J］. Environmental Science and Pollution Research，2022，29（16）：24085-24097.

［28］Liang Y R，Liao F C，Huang T P. Deciphering the influence of Bacillus subtilis strain Ydj3 colonization on the vitamin C contents and rhizosphere microbiomes of sweet peppers［J］. PLoS One，2022，17（2）：e0264276.

［29］歐陽(yáng)石文，趙開軍，馮蘭香. 植物中幾丁質(zhì)酶的作用［J］. 生物學(xué)通報(bào)，2002，37（6）：13-14.

［30］呂照清，任丹丹，周 賀，等. ‘黃花梨及其芽變‘綠黃花梨HHT基因克隆與表達(dá)分析［J］. 西北植物學(xué)報(bào)，2016，36（6）：1105-1109.

［31］Wang B，Sun H，Yang W C，et al. Potential utilization of vitamin C industrial effluents in agriculture：soil fertility and bacterial community composition［J］. Science of the Total Environment，2022，851：158253.

收稿日期：2022-12-07

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（編號(hào)：2020YFA0907800）；沈陽(yáng)市科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：22-322-3-05）。

作者簡(jiǎn)介：韓 曉（1998—），女，山東泰安人，碩士研究生，研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)代謝與非生物脅迫。E-mail：hanxiao52002591@163.com。

通信作者：徐 慧，博士，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹参餇I(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)與環(huán)境微生物。E-mail：xuhui@iae.ac.cn。