羅進韜，鄭 玲，趙媛媛，黃瓊嬌，雷金清，阮 萍

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011）

宮頸鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell cervical carcinoma，SCC）是女性常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率為6.5%，死亡率為7.7%，二者均排名第四，僅2020 年世界約有604 000 例新發(fā)病例和342 000 例死亡病例［1］。在我國，SCC 在女性癌癥中的發(fā)病率為5.5%，死亡率為4.4%，二者排名分別是第六名和第八名［2］。本研究通過對52 例SCC 及對應(yīng)癌旁組織進行細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）及細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）免疫組化染色，并結(jié)合相應(yīng)的病理、臨床資料，尋找CK7 和CK19 在SCC 的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探索SCC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能機制，尋找SCC 預(yù)后相關(guān)指標(biāo)，為SCC的治療和預(yù)后提供方向。

1 材料與方法

1.1 材料 回顧性收集2016 年1 月至2021 年1 月間在廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院行手術(shù)切除治療并術(shù)后經(jīng)病理醫(yī)師確診為SCC的患者52例為研究對象，收集相關(guān)的病歷資料及術(shù)后組織病理蠟塊、淋巴結(jié)蠟塊?；颊吣挲g35～89歲，平均51.44歲。根據(jù)宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期（2018 年）標(biāo)準(zhǔn)［3］，Ⅰ～Ⅱ期患者31 例，Ⅲ～Ⅳ期患者21 例?；颊卟v資料完整，術(shù)前無放化療及激素治療史，無其他全身嚴(yán)重合并癥。所有入選者及其家屬均對本次研究內(nèi)容知情、了解，簽署知情同意書。本次研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)開展。

1.2 免疫組化染色 所有標(biāo)本均充分取材，經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，組織切片3～4 μm 厚，HE 染色。免疫組化染色用LUMATAS 自動免疫組化染色機（美國，Lumatas BioSystems Inc）進行。切片用下列抗體染色：北京中杉金橋公司鼠抗人CK7、CK19 單克隆抗體。二抗、顯色系統(tǒng)、脫蠟液、緩沖液、抗原修復(fù)液和抗體稀釋開放試劑瓶均由全自動染色儀配套提供。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定 采用組織學(xué)評分，所得免疫組化切片表達結(jié)果由本院病理科2位副主任醫(yī)師及以上專家閱片審核。CK7 及CK19 均在細(xì)胞質(zhì)表達，隨機選取具有代表性的10 個高倍視野（×400），進行陽性細(xì)胞的計數(shù)和顯色強度判定［4］：①陽性細(xì)胞百分比評分：百分率＞75%為4 分，＞50%～75%為3 分，＞25%～50%為2 分，5%～25%為1 分，＜5%為0 分；②顯色強度評分：棕褐色為3分，棕黃色為2分，淺黃色為1分，未著色為0 分。二者乘積為最終結(jié)果，≥1 分判定為陽性，＜1分判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗或連續(xù)性校正χ2檢驗；CK7 和CK19 的表達相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)性分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CK7 和CK19 的表達與SCC 臨床病理特征的關(guān)系 結(jié)果表明CK7 表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及FIGO 分期呈正相關(guān)（均P＜0.05），與年齡及組織學(xué)分化程度無相關(guān)性（均P＞0.05），而CK19 表達與上述臨床病理特征均不相關(guān)（均P＞0.05），如表1所示。

表1 CK7及CK19的表達與臨床病理特征相關(guān)性分析（例）

2.2 CK7和CK19在SCC 原發(fā)癌灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達情況 CK7 在SCC 原發(fā)灶中的陽性表達率為59.62%（31/52），表達模式為癌細(xì)胞胞漿成片（多表達于癌巢中央）或彌漫陽性。CK19 在SCC 原發(fā)灶中的陽性表達率為96.15%（50/52），表達模式為癌細(xì)胞胞漿成片（多表達于癌巢周邊）或彌漫陽性（如圖1 所示）。52 例SCC 患者中有21 例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，CK7在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達陽性率為71.43%（15/21），CK19 在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達陽性率為95.24%（20/21）。在SCC 原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶之間，CK7 的表達呈正相關(guān)（r=0.767，P=0.000，如表2 所示），CK19 的表達亦為正相關(guān)（r=0.689，P=0.001，如表3所示）。

圖1 免疫組織化學(xué)檢測CK7和CK19在宮頸癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中的表達（×200）

表2 SCC原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CK7的表達（例）

表3 SCC原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CK19的表達（例）

2.3 CK7和CK19在SCC 原發(fā)癌灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中表達的相關(guān)性分析 Spearman 相關(guān)性分析表明，SCC原發(fā)癌灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CK7 及CK19 的表達均無相關(guān)性（如表4、表5所示）。

表4 SCC原發(fā)灶中CK7和CK19的表達（例）

3 討 論

SCC 仍然是我國女性主要的衛(wèi)生問題之一，Xia等［5］預(yù)測，通過增加預(yù)算，我國可于21 世紀(jì)70 年代消除宮頸癌，但對于中低收入國家而言，實現(xiàn)這一目標(biāo)可能需要到2120 年［6］。SCC 病程發(fā)生主要經(jīng)歷低級別鱗狀上皮內(nèi)病變（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）及浸潤癌。SCC的起始部位為鱗狀交界處（squamocolumnar junction，SCJ）細(xì)胞，SCJ細(xì)胞被確定為殘留的胚胎細(xì)胞，容易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)化［7］。早期的研究報告稱，與來自宮頸外區(qū)域的相比，來自SCJ的LSIL更傾向于進展為HSIL［8］。

CK 作為細(xì)胞骨架蛋白的主要成分。當(dāng)上皮細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時，CK 的表達也往往發(fā)生改變。CK 的表達隨著細(xì)胞的正常生長、分裂、分化和惡性轉(zhuǎn)化而出現(xiàn)上調(diào)、不變或下調(diào)等現(xiàn)象，基于這一特點，CK成為上皮源性腫瘤病理診斷與分類的標(biāo)志之一［9］。

CK7 屬于Ⅰ型細(xì)胞角蛋白，多表達于腺上皮細(xì)胞，常見的鱗癌細(xì)胞中多不表達，但SCC 及食管鱗癌均可見表達，并且胎兒時期的宮頸基底鱗狀上皮細(xì)胞同樣表達CK7［10］。CK7 作為SCJ 前體細(xì)胞的標(biāo)志，在大多數(shù)宮頸上皮內(nèi)病變及SCC 中呈陽性表達［11-12］。我們前期的研究中同樣驗證了上述結(jié)果，與正常的宮頸細(xì)胞相比，CK7、CK19 在宮頸上皮內(nèi)病變及宮頸癌中的表達率增加，且陽性表達率與上皮內(nèi)病變的高低呈正相關(guān)［13］。研究發(fā)現(xiàn)，隨著SCC 分期進展，CK7 陽性率和表達率下降，提示CK7 表達的缺失或許與腫瘤的分化相關(guān)，低分化SCC 的腫瘤細(xì)胞與來源于中、高分化SCC 的不一樣，并非來源于SCJ［12，14-15］。而本次研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CK7 的表達與腫瘤的分化程度并不相關(guān)，低分化SCC 同樣大部分表達CK7，提示不同分化的SCC 仍然可能是同一來源的譜系進展。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，以往研究沒有發(fā)現(xiàn)CK7 的表達與SCC 的淋巴血管侵襲有顯著的相關(guān)性［12，16］。但在其他腫瘤的研究中，則有不同發(fā)現(xiàn)。Xu 等［17］發(fā)現(xiàn)，CK7 的表達與食管鱗癌分化有關(guān)，其高表達是一個獨立的預(yù)后不良標(biāo)志物。與陰性表達相比，CK7 陽性表達的食管鱗癌預(yù)后更差且易伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移［18］。結(jié)直腸癌的CK7 陽性表達同樣與淋巴轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，且CK7 陽性表達的腫瘤細(xì)胞具有較強的浸潤侵襲能力［19］。在本研究中，CK7 的陽性表達與SCC 的FIGO 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，CK7 陽性表達者更易伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，F(xiàn)IGO 分期較高。以上結(jié)果提示CK7 的表達與SCC 的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，可能是腫瘤侵襲性生長及轉(zhuǎn)移的危險因素。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶CK7 的表達方面，有文獻報道，CK7 在結(jié)直腸原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶表達率相符，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CK7 的陽性表達與腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有很強的相關(guān)性，提示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶表達CK7 的腫瘤具有更高的生物學(xué)侵襲性［20］。李德峰等［21］研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的CK7陽性率比原發(fā)灶組織高，由此可推測，CK7 蛋白的高表達可能和肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶CK7 的表達則與腫瘤的手術(shù)分期、腫瘤組織分化程度有關(guān)。隨著手術(shù)分期的增高及分化程度的降低，CK7 在子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的陽性表達率增高［22］。本研究的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CK7 的表達陽性率與原發(fā)癌灶的表達一致，提示原發(fā)癌與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞大多有相似的特性。但21 例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，仍有2例為原發(fā)灶CK7表達陽性，而轉(zhuǎn)移灶表達為陰性的，CK7 在轉(zhuǎn)移灶的失表達是否與腫瘤的轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)，其具體機制有待進一步分析。

CK19 屬于Ⅰ型細(xì)胞角蛋白，相對分子量最小，表達主要定位在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿，其過表達約在30種腫瘤中被報道，這表明CK19 可能是一種有效腫瘤標(biāo)記物［23］。研究表明CK19可能與病毒復(fù)制和惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)。CK7/CK19 協(xié)同染色可作為預(yù)測宮頸腫瘤中HR、HPV 和E7 等腫瘤相關(guān)蛋白水平的有價值的指標(biāo)［24］，是影響SCC 復(fù)發(fā)的獨立預(yù)測因素［25］。本研究中，CK19 在所有SCC 原發(fā)灶中陽性表達率非常高，F(xiàn)IGO分期早期及中晚期的SCC 組織的表達率沒有統(tǒng)計學(xué)差異，這可能與本次研究的病例均為中低分化SCC 有關(guān)。李琳等［26］研究發(fā)現(xiàn)，CK19 表達與宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與本研究結(jié)果一致。

綜上所述，CK7 及CK19 在SCC 原發(fā)癌灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中均有表達，且原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶表達基本一致。SCC 中CK7 陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和FIGO 分期具有相關(guān)性，對判斷SCC 病情進展及預(yù)后有一定的參考意義。本研究的病例數(shù)仍較少，且多為中、低分化腫瘤，后期仍需要擴大樣本量并開展多中心研究以進一步驗證。