劉 瑤，王 琳

（大連理工大學(xué)附屬中心醫(yī)院 整形美容科，遼寧 大連，116024）

面部衰老是由內(nèi)在因素和外在因素共同影響的結(jié)果[1]。內(nèi)在因素包括遺傳背景，外在因素則主要包括生活習(xí)慣，如吸煙、過(guò)量飲酒、營(yíng)養(yǎng)不良和長(zhǎng)期暴露在陽(yáng)光下等。其中，長(zhǎng)期暴露在陽(yáng)光下對(duì)皮膚的危害最大，紫外線能直接損傷皮膚的表皮層和真皮層，使膠原蛋白和彈性蛋白發(fā)生斷裂，導(dǎo)致皮膚光老化[2]。隨著單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，皮膚老化的分子機(jī)制研究提示，與生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子下調(diào)是皮膚衰老的重要特征。除細(xì)胞內(nèi)的變化，細(xì)胞外基質(zhì)在老化皮膚中也表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)和功能的變化，其中膠原蛋白的含量顯著減少[3]。皮膚光老化的主要表現(xiàn)為皮膚松弛、皺紋、屏障功能受損、表面干燥粗糙、色素沉著，出現(xiàn)色斑、曬斑等[2,4-6]。

膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成成分，在皮膚美容中受到廣泛關(guān)注[7]。皮膚組織的膠原蛋白主要是I型和Ⅲ型膠原蛋白，成年后其量和比例隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸降低[10]。已有較多的研究表明，將膠原蛋白注射于真皮層則可用來(lái)消除較深的皺紋[8，9]。

可口服的膠原蛋白肽（collagen peptides，CP），主要來(lái)源于魚(yú)皮、豬皮、牛皮和肌腱，經(jīng)過(guò)酶水解形式制成膳食補(bǔ)充劑。其中富含羥脯氨酸的CP具有最強(qiáng)的生物活性[5]。2020年，Barati等人[11]對(duì)已有水解膠原蛋白對(duì)皮膚老化的影響做了Meta分析，對(duì)補(bǔ)充CP對(duì)于健康和病人皮膚健康參數(shù)影響的效果和作用機(jī)制進(jìn)行了分析。系統(tǒng)分析的結(jié)果支持口服CP或完整的膠原蛋白均可以改善皮膚的健康狀況。改善的作用機(jī)制可能包括3種：CP對(duì)成纖維細(xì)胞、M2-類巨噬細(xì)胞的直接作用以及與口腔耐受有關(guān)的機(jī)制。當(dāng)前，口服膠原蛋白產(chǎn)品種類繁多，但由于缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法，產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊。因此，通過(guò)臨床評(píng)價(jià)，建立完善的口服膠原蛋白產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法，才能更好地發(fā)揮口服膠原蛋白皮膚美容作用[12,13]。

本研究評(píng)估一種含有透明質(zhì)酸鈉的小分子膠原蛋白肽飲品在皮膚美容中的使用效果，研究選擇了對(duì)面部皮膚的美容效果有確切影響的8項(xiàng)指標(biāo)，采用檢測(cè)儀器加志愿者自評(píng)的方法，對(duì)其功效進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2023年5月16日-2023年7月12日期間，于大連理工大學(xué)附屬中心醫(yī)院整形美容科收治的健康受試者。計(jì)劃入組40人，實(shí)際入組40人，其中女性34人，男性6人，完成人數(shù)38人，其中女性33人，男性5人，分析人數(shù)38人，年齡26-50歲，平均年齡為（37.1±5.9）歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）年齡范圍25-50歲，男女不限；（2）魚(yú)尾紋2-4級(jí)；（3）健康狀況良好；（4）試驗(yàn)期間同意不使用任何對(duì)結(jié)果有影響的化妝品、藥物和保健品。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）近1周使用抗組胺藥或近1個(gè)月內(nèi)使用免疫抑制劑者或免疫調(diào)節(jié)相關(guān)生物制劑與小分子藥物者；（2）近兩個(gè)月內(nèi)受試部位應(yīng)用任何抗炎藥物者；（3）受試者患有炎性皮膚病臨床未愈者；（4）胰島素依賴性糖尿病患者；（5）近1月內(nèi)有過(guò)敏性疾病的發(fā)作和治療或用過(guò)激素等抗炎藥物者；（6）還有癌癥等嚴(yán)重系統(tǒng)健康問(wèn)題者；（7）免疫缺陷或自身免疫性疾病患者；（8）嬰幼兒，孕婦哺乳期婦女；（9）在皮膚待測(cè)試部位由于瘢痕、色素、萎縮、鮮紅斑痣或其他瑕疵而影響試驗(yàn)結(jié)果的判定著；（10）體質(zhì)高度敏感者；（11）對(duì)魚(yú)類及其制品過(guò)敏者；（12）非志愿參加或不能按試驗(yàn)要求完成規(guī)定內(nèi)容者；（13）其他經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究者評(píng)估認(rèn)為不合適參加實(shí)驗(yàn)者。

1.4 方法

1.4.1 材料 膠原蛋白肽透明質(zhì)酸鈉飲品，每25 ml 含有膠原蛋白5000 mg，透明質(zhì)酸鈉50 mg（BIOYONCE縵研，斐縵（長(zhǎng)春）醫(yī)藥生物科技有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號(hào)：671680220001，包裝規(guī)格為25 ml*10 支/盒）。

1.4.2 方法 開(kāi)瓶即飲，每次25 ml（1 支），每日一次。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 皮膚生理指標(biāo)檢測(cè)

試驗(yàn)中檢測(cè)的皮膚指標(biāo)，評(píng)價(jià)方法及時(shí)間點(diǎn)總結(jié)在表1中。檢測(cè)時(shí)間為試驗(yàn)開(kāi)始前和第2、4、8周。

表1 皮膚試驗(yàn)參數(shù)

1.5.2 受試者自評(píng)

受試者自評(píng)在使用產(chǎn)品2,4,8周后進(jìn)行。分別對(duì)表2中的10項(xiàng)描述進(jìn)行評(píng)價(jià)。

表2 受試者自評(píng)

1.5.3 安全性評(píng)價(jià)

參考《化妝品安全技術(shù)規(guī)范2015年版》中規(guī)定的人體使用試驗(yàn)皮膚翻譯分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行安全性評(píng)估，反應(yīng)分級(jí)為：0，無(wú)反應(yīng)；1，微弱紅斑；2，紅斑、浸潤(rùn)、丘疹；3，紅斑、水腫、丘疹、水皰；4紅斑、水腫、大皰。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)分析軟件為SPSS 22.0版本。如數(shù)值為正態(tài)分布，則采用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析:如數(shù)值為非正態(tài)分布，則采用秩和檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;統(tǒng)計(jì)方法均采用雙尾檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α-0.05.

變化率即相對(duì)使用前的變化率,計(jì)算公式如下:

公式中,

W0——受試區(qū)使用產(chǎn)品前,皮膚參數(shù)基礎(chǔ)值。

W2——受試區(qū)使用產(chǎn)品第2周,皮膚參數(shù)數(shù)值。

W4—受試區(qū)使用產(chǎn)品第4周,皮膚參數(shù)數(shù)值。

W8—受試區(qū)使用產(chǎn)品第8周，皮膚參數(shù)數(shù)值。

N—受試者人數(shù)。

2 結(jié)果

總計(jì)入組40例，其中38例完成了所有的8周試驗(yàn)和隨訪。

2.1 治療前后的皮膚指標(biāo)變化

治療前后的皮膚指標(biāo)總結(jié)在表3。使用德國(guó)CK公司的Corneometer CM825角層水分計(jì)測(cè)定了皮膚角質(zhì)層中的水分含量[14]。測(cè)試值越高，皮膚角質(zhì)層水分含量越高。研究結(jié)果顯示，服用本口服液后受試者的皮膚角質(zhì)層含水量顯著增高，8周后相對(duì)于使用本產(chǎn)品前，含水量提高了23.8%。

使用皮膚表面紋理測(cè)試系統(tǒng)VisioScan VC20 plus對(duì)皮膚的平滑度進(jìn)行了檢測(cè)，使用SEsm參數(shù)進(jìn)行表征，該值越低，表示皮膚約光滑[15]。試驗(yàn)期間，皮膚光滑度顯著下降，8周下降幅度為23.6%。皮膚光澤度采用Glossymeter GL200測(cè)定，測(cè)試值越高，皮膚光澤度越好[16]，使用期間，受試者皮膚光澤度最高增加27.2%（第8周）。皮膚顏色測(cè)試探頭Colorimeter CL400測(cè)定皮膚的黃度（b值），b值越低，皮膚黃度改善越好[17]，產(chǎn)品使用期間黃度下降最大幅度為10.4%（第8周）。Mexameter MX18（色素測(cè)試探頭）測(cè)試皮膚黑色素的改變，數(shù)值越低，黑色素含量越低，皮膚越白[17]，試用期間，測(cè)試值持續(xù)下降，下降幅度最大為23.2%。德國(guó)CK公司皮膚彈性測(cè)試儀MPA580用于測(cè)試皮膚彈性變化，最常見(jiàn)的評(píng)價(jià)參考值為R2和F4。R2值被認(rèn)為是最接近皮膚彈力真實(shí)狀態(tài)的參數(shù)值。F4值越小表征皮膚越緊實(shí)[18]。試用期間，F(xiàn)4值持續(xù)下降，下降幅度最大為25.1%；R2值持續(xù)上升，上升幅度最大為18.1%Visia結(jié)合圖像分析軟件Image-Pro Plus來(lái)分析眼角皺紋的變化。面積占比越小越好，使用期間，該指標(biāo)持續(xù)下降，平均下降幅度在第8周達(dá)到了29.1%。

2.2 受試者自評(píng)

表4總結(jié)了受試者的自評(píng)結(jié)果。從數(shù)據(jù)上來(lái)看，受試者的主觀感受較好，好評(píng)率隨著試驗(yàn)的進(jìn)行逐步提高，這與客觀的皮膚檢測(cè)指標(biāo)相吻合。

表4 受試者自評(píng)結(jié)果

2.3 安全性評(píng)價(jià)

受試者連續(xù)使用產(chǎn)品8周，通過(guò)觀察、詢問(wèn)、檢查并記錄受試者在使用產(chǎn)品期間所發(fā)生的任何不良事件，結(jié)果顯示測(cè)試期間未見(jiàn)任何皮膚不良反應(yīng)。

2.4 典型案例

圖1展示了編號(hào)為019的受試者眼角皺紋在試驗(yàn)過(guò)程中的變化情況，受試者女性，44歲，眼角皺紋面積從試驗(yàn)前的5.46%，逐漸降低，第2周和第4周分別為4.81%和4.13%，第8周降低到3.74%。

圖1 受試者典型圖片

3 討論

亞洲人的面部皮膚衰老的特征主要體現(xiàn)在皮膚的色素沉著、皺紋的形成和皮膚的松弛[19]。近年來(lái)，醫(yī)療美容市場(chǎng)愈發(fā)火熱，大家對(duì)無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)的美容方式也展現(xiàn)出更高的熱情[21]。多種治療方法及材料中，膠原蛋白憑借其理化性質(zhì)的穩(wěn)定性、生物相容性和生物降解性，在醫(yī)療和皮膚美容領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。在美容外科治療中，膠原蛋白主要用于填充劑[8]、皮膚再生材料和皮膚護(hù)理產(chǎn)品等。作為填充劑，膠原蛋白可以填充皮膚的凹陷部分，改善皮膚的外觀。作為皮膚再生材料，膠原蛋白可以促進(jìn)傷口愈合，改善疤痕。作為皮膚護(hù)理產(chǎn)品，膠原蛋白可以改善皮膚的彈性和緊致度，減少皺紋和細(xì)紋[22]。

3.1 口服膠原蛋白的研究現(xiàn)狀

口服膠原蛋白的美容效果常受到爭(zhēng)議。因?yàn)橹苯涌诜奈章蕵O低。但膠原蛋白經(jīng)蛋白酶水解為小分子量的CP后，三螺旋結(jié)構(gòu)遭到破壞，膠原蛋白穩(wěn)定性降低，膠原蛋白更容易被消化吸收，營(yíng)養(yǎng)、功能特性等都得到了顯著改善。多項(xiàng)研究表明口服低分子量CP可以作為一種保健功能食品成分來(lái)改善人體皮膚的水合作用、彈性和皺紋。一項(xiàng)隨機(jī)、三盲、安慰劑對(duì)照研究[23]表明，口服12周后，實(shí)驗(yàn)組皮膚整體水合度、皮膚彈性較安慰劑組有明顯改善。另一項(xiàng)臨床研究[24]顯示，39名65歲或以上住院患者中，每天口服1次含有CP的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑（10.0 g）的患者，比對(duì)照組角質(zhì)層水化度和皮膚彈性改善明顯，這樣可以幫助減少老年人皮膚的脆弱性。Kim等[25]進(jìn)行了隨機(jī)、雙盲、安慰劑的對(duì)照試驗(yàn)，給予每日1000 mg低分子量鲇魚(yú)皮CP的女性比安慰劑組女性皮膚水化值更高，皮膚彈性更好，皺紋更少。一項(xiàng)針對(duì)34名40-65歲健康女性進(jìn)行的為期12周的臨床試驗(yàn)表明[26]，實(shí)驗(yàn)組通過(guò)服用以水溶性輔酶Q10和膠原蛋白結(jié)合為特征的液態(tài)食物補(bǔ)充劑，使真皮層密度得到改善，眼眶周圍皺紋面積和皺紋總評(píng)分減少，皮膚光滑度得到改善。而皮膚的滋潤(rùn)度、真皮層的厚度、失去經(jīng)皮的滋潤(rùn)度以及黏性彈性等方面的變化，則沒(méi)有明顯的差別。為了研究這種營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑對(duì)皮膚特性的影響，Borumand等人進(jìn)行了一項(xiàng)開(kāi)放標(biāo)簽研究。在連續(xù)60天每天補(bǔ)充50毫升膠原蛋白后，皮膚干燥、皺紋和鼻唇溝深度明顯減少。此外，12周后還觀察到膠原蛋白密度和皮膚緊致度明顯增加[27]。Mbg等人利用生物物理學(xué)和皮膚成像技術(shù)，評(píng)估水解膠原蛋白和維生素口服補(bǔ)充劑在改善老化皮膚狀況方面的臨床療效。在這項(xiàng)雙盲、安慰劑對(duì)照試驗(yàn)中，60名年齡在40-60歲之間的女性被隨機(jī)分配到含有水解膠原蛋白和維生素的產(chǎn)品（A組）或安慰劑（B組）中，每天服用一次，連續(xù)服用90天。結(jié)果顯示，與安慰劑組相比，A組皮膚的真皮回聲性和皮膚彈性有所改善，皺紋和毛孔總數(shù)也有所減少[28]。

3.2 膠原蛋白來(lái)源、工藝及聯(lián)合其他成分對(duì)其美容效果的影響

盡管口服膠原蛋白肽被認(rèn)為是改善皮膚外觀的有效手段，但是，膠原蛋白的來(lái)源、提取工藝及聯(lián)合其他功能成分也是影響其功能的重要因素[29]。

3.2.1 來(lái)源

牛骨中的膠原蛋白主要為I型膠原蛋白，具有較高的生物相容性；海洋生物的膠原蛋白中脯氨酸含量較低，膠原蛋白結(jié)構(gòu)較松散，提取率和吸收性更高[5]。

3.2.2 工藝

膠原蛋白可以通過(guò)酶水解形式制成膳食補(bǔ)充劑，這種形式的膠原蛋白在腸道中可以被消化為二肽或三肽，通過(guò)寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白跨腸黏膜轉(zhuǎn)運(yùn)吸收入血，并可在皮膚中持續(xù)存在96 h。為了防止膠原蛋白在胃腸道中被降解，可以使用微囊化、納米化等技術(shù)將膠原蛋白包裹起來(lái)，使其能夠順利通過(guò)胃腸道，到達(dá)小腸進(jìn)行吸收。這種技術(shù)不僅提高了膠原蛋白的穩(wěn)定性，也提高了其在體內(nèi)的利用率。

3.2.3 聯(lián)合其他成分

膠原蛋白肽配合其他功能性成分可能具有更好抗皮膚老化效果。目前研究主要為透明質(zhì)酸和維生素。透明質(zhì)酸是一種天然存在的多糖，能夠吸附大量的水分，使皮膚保持濕潤(rùn)。它與膠原蛋白肽的配合使用，可增強(qiáng)皮膚保濕效果，提高皮膚彈性和緊致度。膠原蛋白的合成需要維生素C的參與，因此在飲品中添加適量的維生素C，可以提高膠原蛋白的生物活性。還可考慮在飲品中添加一些有助于膠原蛋白合成和抗氧化的營(yíng)養(yǎng)成分，如維生素C、維生素E、硒等。

本次研究的產(chǎn)品BIOYONCE縵研在以膠原蛋白肽為主要功能性成分的前提下，添加了透明質(zhì)酸鈉作為皮膚的保水性成分，添加了煙酰胺作為美白成分，添加彈性蛋白肽作為膠原蛋白肽的輔助成分，上述配方的優(yōu)化，在本次評(píng)價(jià)中各個(gè)指標(biāo)均有顯著的改善。此外，通過(guò)添加濃縮蘋果汁、野生藍(lán)莓濃縮汁等調(diào)味成分，調(diào)節(jié)了飲品的口感，提高了受試者的滿意程度，這也增加了消費(fèi)者按時(shí)服用可能性。

3.3 展望

限于研究的周期和經(jīng)費(fèi)，本研究只考察了8周，相對(duì)有些文獻(xiàn)報(bào)道的研究較短，而且是連續(xù)使用的8周，沒(méi)有考察停止服用該產(chǎn)品后的效果。此外，研究的入組人員40個(gè)，樣本量也不是太大。對(duì)于最后膠原蛋白肽在人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等生物利用度問(wèn)題，尚未得到明確的科學(xué)解答。希望以后可以通過(guò)擴(kuò)大觀察的樣本量及觀察時(shí)間，為口服膠原蛋白肽類產(chǎn)品提供更多的研究支持。