歐慧慧,胡新,李婧,張暢

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是以雄性激素過(guò)高、胰島素抵抗(insulin resis-tance,IR)、內(nèi)分泌失調(diào)造成卵巢異常改變的常見(jiàn)病,常見(jiàn)于育齡女性[1]。有研究認(rèn)為[2],大約有4%的女性會(huì)患PCOS,表現(xiàn)為月經(jīng)紊亂、多毛、肥胖,還容易影響生育力,對(duì)患者家庭生活造成嚴(yán)重傷害。PCOS病因尚不清楚,多認(rèn)為與代謝、環(huán)境、遺傳有關(guān)。脂肪組織作為機(jī)體最大內(nèi)分泌組織,可分泌參與PCOS發(fā)生發(fā)展的脂肪因子,如白脂素(Asprosin)可調(diào)節(jié)IR,與糖尿病、肥胖疾病有關(guān)[3]。研究認(rèn)為[4],PCOS缺血介導(dǎo)的炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激是PCOS發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵,微小RNA-206(micro RNA-206,miR-206)作為miRNA家族重要成員,其表達(dá)與IR關(guān)系密切;缺血修飾白蛋白(ischemia-modified albumin,IMA)是組織缺血的敏感標(biāo)志物,可反映不同疾病活動(dòng)狀態(tài),在PCOS患者中可反映機(jī)體氧化應(yīng)激[5]。但由于目前Asprosin、miR-206、IMA三者在PCOS患者中的研究相對(duì)較少,對(duì)PCOS患者發(fā)生IR與三者間的關(guān)系不明確,因此,本研究通過(guò)對(duì)PCOS患者血清Asprosin、miR-206、IMA及逆行檢測(cè),旨在分析血清Asprosin、miR-206、IMA在PCOS患者中的表達(dá)變化和意義,為PCOS的可能病理生理變化提供參考依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年6月—2022年6月青島市市立醫(yī)院收治的PCOS患者120例為病例組,另選同期健康體檢孕齡婦女60例為健康對(duì)照組。根據(jù)BMI將PCOS患者分為超重/肥胖亞組(BMI≥25 kg/m2)68例、體質(zhì)量正常亞組(BMI<25 kg/m2)52例;再根據(jù)胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)將PCOS患者分為IR亞組(HOMA-IR≥2.69)73例、非IR亞組(HOMA-IR<2.69)47例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2019審字第077號(hào)),入選者及家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《多囊卵巢綜合征中國(guó)診療指南》中PCOS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],青春期、生育期癥狀:月經(jīng)異常、多毛、不孕;中老年癥狀為糖尿病、心血管疾病、高血脂癥狀;超聲下顯示卵巢有直徑2～9 mm卵泡12個(gè)以上,卵巢體積增大超過(guò)10 cm3;血清激素檢查顯示卵泡刺激素正?；蚱?黃體生成素、雌二醇升高。②患者近期無(wú)感染,3個(gè)月內(nèi)未使用避孕、降脂、降糖藥。③患者均為育齡已婚婦女,年齡18～40歲。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①存在嚴(yán)重精神類、免疫系統(tǒng)疾病患者。②合并肝腎、心血管疾病及導(dǎo)致雄性激素分泌增多、月經(jīng)異常的疾病患者,如庫(kù)欣綜合征、卵泡膜細(xì)胞增殖癥、功能性下丘腦性閉經(jīng)、甲狀腺疾病等。③存在惡性腫瘤者。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 血清Asprosin、IMA表達(dá)水平檢測(cè):研究對(duì)象均于月經(jīng)周期第5～8 d抽取清晨空腹外周靜脈血5 ml,閉經(jīng)患者靜脈血抽取時(shí)間不限,以3 000 r/min離心10 min,取上清,采用上海臻科生物人Asprosin Elisa試劑盒、人IMA Elisa試劑盒檢測(cè)血清Asprosin、IMA,操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.3.2 血清miR-206表達(dá)水平檢測(cè):采用美國(guó) Invitrogen 公司Trizol reagent RNA 提取試劑盒,提取總RNA,采用美國(guó)ABI公司7500型熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)儀,應(yīng)用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)血清miR-206表達(dá)水平,以U6為內(nèi)參,RNA催化合成采用cDNA:PrimerScriptTMRT試劑盒,RNA擴(kuò)增采用SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR試劑盒,miR-206正向引物:5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3',反向引物:5'-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3',U6正向引物:5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3',反向引物:5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3',反應(yīng)條件為:95℃ 5 min預(yù)變性,95℃ 15 s 變性,60℃ 30 s 退火,72℃ 10 s延伸,共40個(gè)循環(huán),以U6為miR-206內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-206表達(dá)水平,ΔΔCt =ΔCt實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本-ΔCt健康對(duì)照組標(biāo)本。

1.3.3 血糖、血脂檢測(cè):魚(yú)躍血糖儀580檢測(cè)空腹血糖(FPG),上海化邦生物人空腹胰島素 Elisa試劑盒檢測(cè)FINS,根據(jù)空腹血糖×空腹胰島素/22.5計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostatic model insulin resistance index,HOMA-IR);采用西門(mén)子全自動(dòng)生化分析儀Viva-proE檢測(cè)總膽固醇、三酰甘油。

1.3.4 性激素檢測(cè):采用西門(mén)子全自動(dòng)生化分析儀(Viva-proE)檢測(cè)雌二醇、催乳素、黃體生成素、卵泡刺激素、睪酮等。

1.3.5 血肌酐(SCr)、hs-CRP檢測(cè):采用西門(mén)子全自動(dòng)生化分析儀(Viva-proE)檢測(cè)SCr,上海初態(tài)生物人高敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)ELISA試劑盒檢測(cè)hs-CRP。

飼用谷子是全株進(jìn)行飼料加工，不僅保留了秸稈中的營(yíng)養(yǎng)，也保留了籽粒中的營(yíng)養(yǎng)，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值要高于普通谷子。綜合來(lái)看，谷草各方面的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)還是優(yōu)于其他主要作物的秸稈的，可以作為一種優(yōu)質(zhì)飼草應(yīng)用。

2 結(jié) 果

2.1 病例組和健康對(duì)照組臨床資料比較 病例組BMI、HOMA-IR、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、黃體生成素、卵泡刺激素、睪酮、hs-CRP、Asprosin、IMA高于健康對(duì)照組,miR-206低于健康對(duì)照組(P<0.05),其他資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。

表1 健康對(duì)照組、病例組臨床資料比較

2.2 病例組不同BMI患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較 超重/肥胖亞組PCOS患者血清Asprosin、IMA高于體質(zhì)量正常亞組(P<0.01),miR-206低于體質(zhì)量正常亞組,見(jiàn)表2。

表2 病例組不同BMI患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較

2.3 病例組不同HOMA-IR患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較 IR亞組PCOS患者血清Asprosin、IMA高于非IR亞組,miR-206低于非RI亞組(P<0.01),見(jiàn)表3。

表3 病例組不同HOMA-IR患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較

2.4 血清Asprosin、miR-206、IMA與各指標(biāo)間的相關(guān)性分析 Asprosin與BMI、HOMA-IR、總膽固醇、三酰甘油呈正相關(guān)(P<0.01),miR-206與HOMA-IR、Asprosin呈負(fù)相關(guān)(P<0.01),IMA與HOMA-IR、Asprosin呈正相關(guān),與miR-206呈負(fù)相關(guān)(P<0.01),見(jiàn)表4。

表4 血清Asprosin、miR-206、IMA與各指標(biāo)間的相關(guān)性分析

2.5 影響PCOS發(fā)生IR的多因素Logistic回歸分析 以PCOS患者是否發(fā)生IR為因變量(1=是,0=否),以血清Asprosin、miR-206、IMA連續(xù)變量為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,血清Asprosin、IMA高表達(dá)水平、miR-206低表達(dá)水平是影響PCOS發(fā)生IR的危險(xiǎn)因素(P<0.05),見(jiàn)表5。

表5 影響PCOS發(fā)生IR的多因素Logistic回歸分析

2.6 血清Asprosin、miR-206、IMA及聯(lián)合對(duì)PCOS發(fā)生IR的預(yù)測(cè)價(jià)值分析 血清Asprosin、miR-206、IMA及聯(lián)合預(yù)測(cè)PCOS發(fā)生IR的AUC為0.761、0.894、0.667、0.918,聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC高于血清Asprosin、IMA(Z=3.831、4.663,P<0.01),見(jiàn)表6、圖1。

圖1 血清Asprosin、miR-206、IMA預(yù)測(cè)PCOS發(fā)生IR的ROC曲線

表6 血清Asprosin、miR-206、IMA及三者聯(lián)合對(duì)PCOS發(fā)生IR的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

3 討 論

Asprosin是由哺乳動(dòng)物白色脂肪組織產(chǎn)生的一種與肝臟葡萄糖釋放有關(guān)的空腹誘導(dǎo)的糖原蛋白激素,由140個(gè)氨基酸組成,分子量30 kDa,是反映葡萄糖穩(wěn)態(tài)、胰島素抵抗、肥胖狀態(tài)等異常代謝性疾病的有效生物標(biāo)志物,機(jī)體正常狀態(tài)下在血液中的含量極少,禁食后表達(dá)水平會(huì)升高,但進(jìn)食后其濃度恢復(fù)正常,因此,認(rèn)為Asprosin可能參與胰島素調(diào)節(jié)[10]。Alan等[11]研究表示,Asprosin表達(dá)水平升高與IR的PCOS有一定相關(guān)性,可作用于下丘腦調(diào)節(jié)患者食欲和體質(zhì)量。miRNAs是一種類似于siRNA的單鏈RNA,由高等真核生物基因組編碼,在細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、凋亡、腫瘤形成過(guò)程的調(diào)節(jié)中起多種作用,miRNA在血液中表達(dá)穩(wěn)定,易于檢測(cè),該分子的發(fā)現(xiàn)和深入探究為臨床疾病的診療提供了新思路。miR-206位于人體染色體6p12.2上,在心肌組織、骨骼、腫瘤形成中具有調(diào)節(jié)作用[12]。研究表示[13],miR-206的表達(dá)可能會(huì)受胰島素調(diào)節(jié),控制卵巢顆粒細(xì)胞凋亡,參與PCOS的發(fā)病。IMA是一種較為理想的新型缺血標(biāo)志物,可反映機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度,在一些心血管疾病的早診斷、指導(dǎo)治療中有重要意義。國(guó)外學(xué)者Guven等[14]首次報(bào)道PCOS患者中存在血清IMA升高情況,PCOS患者由于糖脂代謝異常、胰島素抵抗,使患者機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。卵泡內(nèi)分泌微環(huán)境存在氧化、抗氧化動(dòng)態(tài)平衡,當(dāng)機(jī)體處于氧化應(yīng)激時(shí),卵泡局部微環(huán)境氧化、抗氧化動(dòng)態(tài)失衡,卵母細(xì)胞發(fā)育、成熟受損,無(wú)法正常排卵,出現(xiàn)月經(jīng)少、閉經(jīng)、不孕等PCOS的表現(xiàn),因此,PCOS不單單是一種婦科疾病,還是復(fù)雜、多種因素參與的內(nèi)分泌紊亂疾病[15]。

本研究中,PCOS患者BMI、HOMA-IR、總膽固醇、三酰甘油、黃體生成素、卵泡刺激素、睪酮、hs-CRP、Asprosin、IMA均高于健康對(duì)照組,miR-206表達(dá)水平低于健康對(duì)照組,表明PCOS可能與上述指標(biāo)有關(guān),超重肥胖是PCOS常見(jiàn)特征,同時(shí)本身為代謝類疾病,存在糖脂代謝異常,雖然超重/肥胖并未納入PCOS診斷標(biāo)準(zhǔn),但在PCOS患者中,50%～70%伴有超重/肥胖。IR是PCOS的發(fā)病機(jī)制之一,IR可提高17α羥化酶活性,促進(jìn)卵泡膜細(xì)胞合成雄激素,引發(fā)高雄激素血癥,進(jìn)而影響胰島素介導(dǎo)的葡萄糖代謝能力,加重機(jī)體IR程度,導(dǎo)致惡性循環(huán);IR的存在可影響竇卵泡發(fā)育,增加流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn),降低生育力,同時(shí)IR與超重/肥胖相互促進(jìn),兩者共同存在在PCOS的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[16]。PCOS激素失衡導(dǎo)致總膽固醇、三酰甘油升高,與IR有關(guān),其中激素睪酮作為PCOS患者體內(nèi)活性最高的雄激素,對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的分化影響較嚴(yán)重,可導(dǎo)致卵泡發(fā)育停滯,影響生育力。研究認(rèn)為[17],氧化應(yīng)激是造成PCOS患者體內(nèi)雄激素升高的重要原因。hs-CRP由PCOS慢性炎性反應(yīng)引起,可增高心血管疾病、糖尿病風(fēng)險(xiǎn),袁芬等[18]研究顯示,PCOS患者中BMI、hs-CRP、睪酮、黃體生成素、IMA均高于正常健康體檢者,hs-CRP與IMA無(wú)相關(guān)性,其水平升高的原因可能與PCOS患者超重/肥胖有關(guān),與本研究結(jié)果相符。Asprosin可影響機(jī)體體質(zhì)量,作為增進(jìn)食欲激素,其表達(dá)水平高說(shuō)明患者食欲高,缺乏Asprosin可導(dǎo)致食欲減退,患者出現(xiàn)消瘦情況,因此,本研究結(jié)果中Asprosin在超重/肥胖PCOS患者中的表達(dá)水平較高,同時(shí)IR亞組PCOS患者Asprosin較高,高表達(dá)水平是影響PCOS發(fā)生IR的危險(xiǎn)因素,提示Asprosin與PCOS患者BMI、IR有關(guān)。Alan等[11]研究顯示,RI組和超重/肥胖PCOS患者Asprosin水平較高,Asprosin與PCOS患者的BMI、IR密切相關(guān)。Wang等[19]研究提示Asprosin在肥胖兒童中的表達(dá)水平較高,與HOMA-IR呈正相關(guān)。另有研究表示[20],減肥術(shù)后患者血清Asprosin表達(dá)水平較術(shù)前低,說(shuō)明BMI與Asprosin有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,超重/肥胖PCOS患者血清IMA表達(dá)水平較高,高表達(dá)水平是影響PCOS發(fā)生IR的危險(xiǎn)因素,與歐英霞等[21]研究結(jié)果一致。miR-206可通過(guò)促進(jìn)胰島素信號(hào)減少葡萄糖產(chǎn)生,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),在超重/肥胖和IR亞組PCOS患者中血清miR-206表達(dá)水平較低,低表達(dá)水平是影響PCOS發(fā)生IR的危險(xiǎn)因素,提示miR-206與IR有關(guān),桑敏等[22]研究顯示,miR-206與PCOS患者BMI呈負(fù)相關(guān),劉彩霞等[23]研究顯示,miR-206在PCOS不孕患者中表達(dá)水平較低,經(jīng)治療后藥物通過(guò)改善葡萄糖代謝、IR調(diào)節(jié)miR-206,使miR-206表達(dá)水平上升。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示,血清Asprosin與BMI、總膽固醇、三酰甘油、HOMA-IR呈正相關(guān),miR-206與HOMA-IR、Asprosin呈負(fù)相關(guān),IMA與HOMA-IR、Asprosin呈正相關(guān),與miR-206呈負(fù)相關(guān),與以往研究結(jié)果相符[24-25]。白愛(ài)紅等[13]研究顯示,miR-206與HOMA-IR呈負(fù)相關(guān),與本研究結(jié)果一致。

褚冉等[26]研究提示,Asprosin在胰島素調(diào)節(jié)中扮演重要角色,通過(guò)血糖、胰島素影響PCOS的發(fā)生進(jìn)展,由于PCOS存在IR導(dǎo)致Asprosin水平升高,但具體機(jī)制不明,仍需進(jìn)一步深入研究。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Asprosin預(yù)測(cè)PCOS發(fā)生IR的AUC為0.761,與本研究結(jié)果一致。本研究經(jīng)ROC曲線分析顯示,Asprosin、miR-206、IMA及三者聯(lián)合預(yù)測(cè)PCOS發(fā)生IR的AUC為0.761、0.894、0.667、0.918,三者聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC高于Asprosin和IMA,提示聯(lián)合檢測(cè)有助于提高PCOS發(fā)生IR的預(yù)測(cè)價(jià)值。但由于本研究樣本量較小,對(duì)于Asprosin、miR-206、IMA與PCOS發(fā)生IR的機(jī)制未進(jìn)行詳細(xì)分析,需臨床進(jìn)一步研究。

綜上所述,血清Asprosin、IMA在PCOS中呈高表達(dá),miR-206呈低表達(dá),與IR有關(guān),對(duì)預(yù)測(cè)PCOS患者發(fā)生IR具有一定價(jià)值,可作為PCOS發(fā)生IR的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

歐慧慧:設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過(guò)程,論文撰寫(xiě);胡新:提出研究思路,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),論文審核;李婧:實(shí)施研究過(guò)程,資料搜集整理,論文修改;張暢:進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及課題設(shè)計(jì),論文撰寫(xiě)