婁紫微 郭秀霞 王奕婷 楊琳琳 王文倩 公茂慶 程 鵬

1.山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）研究生部，山東 濟(jì)南 250117； 2.山東省寄生蟲病防治研究所醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)部，山東 濟(jì)寧 272033； 3.濟(jì)寧市疾病預(yù)防控制中心病媒生物防制科，山東 濟(jì)寧 272000

三帶喙庫蚊（Culex tritaeniorhynchus）是流行性乙型腦炎（乙腦）流行傳播的主要媒介，同時(shí)也是山東省乙腦病毒傳播的主要優(yōu)勢(shì)蚊種[1］。乙腦為中國分布最廣、發(fā)病最多、危害最大的一種蟲媒病毒感染性疾病，且流行及分布區(qū)在逐漸擴(kuò)大[2］。三帶喙庫蚊幼蟲主要孳生于稻田、灌溉田和田邊溝渠等積水中[3］。微山湖地區(qū)地表水系發(fā)達(dá)，稻田范圍廣，有利于蚊蟲大量繁殖。近年來，隨著全球氣候變暖、城鎮(zhèn)化改造等因素，使得三帶喙庫蚊的孳生地發(fā)生變化[4］。加之農(nóng)業(yè)廣泛噴灑、使用殺蟲劑使得蚊蟲抗藥性不斷形成和發(fā)展，目前抗藥性已成為三帶喙庫蚊防控和乙腦防治的主要障礙[5］，因此加強(qiáng)媒介的監(jiān)測(cè)工作對(duì)乙腦防控意義重大。本課題組于2022年7月至9月在微山湖地區(qū)監(jiān)測(cè)點(diǎn)開展相關(guān)工作，以期為微山湖地區(qū)有效防控乙腦提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源

1.1.1 野外種群 2022 年7 月至9 月在微山湖地區(qū)監(jiān)測(cè)點(diǎn)（任城區(qū)唐口街道、魚臺(tái)縣王魯街道、微山縣歡城鎮(zhèn)）采集三帶喙庫蚊幼蟲，將幼蟲混勻飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)用幼蟲為Ⅲ齡末、Ⅳ齡初幼蟲，成蚊為羽化3 ～5 d未吸血雌蚊。

1.1.2 敏感品系 敏感品系數(shù)據(jù)參考文獻(xiàn)[6］。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及來源

實(shí)驗(yàn)用0.05%溴氰菊酯藥膜、0.15%氯氰菊酯藥膜、0.5%馬拉硫磷藥膜、0.1%殘殺威藥膜以及敵敵畏（95.0%乳油）、殘殺威（97.0%原粉）、溴氰菊酯（98.0%原粉）、氯氰菊酯（91.16%原粉）均由中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所相贈(zèng)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 幼蟲浸漬法[7］測(cè)試微山湖地區(qū)三帶喙庫蚊野外種群幼蟲對(duì)4 種常用化學(xué)殺蟲劑的敏感性。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)所得出蚊蟲對(duì)殺蟲劑的敏感程度，將4 種殺蟲劑稀釋成6 個(gè)不同的濃度梯度，將試蟲置于裝有不同藥液濃度的200 mL塑料杯中，每個(gè)濃度梯度重復(fù)3次，每組蚊蟲為25只。并以丙酮作為空白對(duì)照。24 h后觀察并記錄試蟲接觸4種常用殺蟲劑的死亡情況：幼蟲體態(tài)有改變者或用鑷子輕觸幼蟲呼吸管，幼蟲無逃避反應(yīng)或不能自主逃逸判定為死亡。

1.3.2 成蚊接觸筒法[8］使用WHO標(biāo)準(zhǔn)的藥膜濾紙測(cè)定成蚊對(duì)4種不同濃度殺蟲劑的抗藥性。每種藥膜重復(fù)3次，空白對(duì)照為涂有白油和乙醚的濾紙。試蟲擊倒和死亡鑒定標(biāo)準(zhǔn)：觀察期內(nèi)，蚊蟲出現(xiàn)姿態(tài)異?；蛲耆粍?dòng)、不能正常飛行即視為擊倒，用鑷子輕觸蚊體，試蟲無反應(yīng)或僅有震顫即視為死亡。

1.4 抗藥性判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 幼蟲抗藥性判定標(biāo)準(zhǔn) 抗性倍數(shù)（R/S）=野外種群LC50/敏感品系LC50，抗性倍數(shù)≤ 3為敏感；3 ＜抗性倍數(shù)≤ 10 為低抗；10 ≤ 抗性倍數(shù) ＜ 40 為中抗；抗性倍數(shù) ≥ 40為高抗[9］。若對(duì)照組死亡率達(dá)到5% ～20%，則采用Abbott公式進(jìn)行校正；超過20%視為無效實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 成蚊抗藥性判定標(biāo)準(zhǔn) 死亡率=（死亡蟲數(shù)/試蟲總數(shù)）×100%，在診斷劑量下，蚊蟲死亡率在98% ～ 100%為敏感群體；死亡率在80% ～ 98%（不含）為可能抗性群體；死亡率 ＜ 80%為抗性群體。

1.5 三帶喙庫蚊孳生地調(diào)查

采用勺捕法對(duì)位于濟(jì)寧城區(qū)附近農(nóng)村稻田、灌溉渠、蓄水池塘、污水坑、排水溝、景觀水池、積水容器、人畜糞池和其他水體等孳生地三帶喙庫蚊幼蟲孳生情況進(jìn)行調(diào)查。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用EXCEL 2019軟件對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行整理分析，根據(jù)結(jié)果繪制成蚊60 min 內(nèi)抗性擊倒率曲線圖；利用SPSS 22.0 軟件計(jì)算每種殺蟲劑的毒力回歸方程、95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）、LC50以及抗性倍數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 三帶喙庫蚊孳生地調(diào)查

共調(diào)查微山湖地區(qū)1 346個(gè)調(diào)查點(diǎn)幼蟲孳生情況，大致分為9 種類型。稻田和灌溉渠2 種孳生地類型中三帶喙庫蚊的密度較高，陽性率分別為86.11%和80.29%；其次在蓄水池塘、污水坑和排水溝中三帶喙庫蚊幼蟲的陽性率分別為28.00%、24.64%和30.00%；景觀水池、積水容器和其他水體孳生地監(jiān)測(cè)到三帶喙庫蚊少量分布，陽性率均在10%以下；在人畜糞池中未采集到三帶喙庫蚊幼蟲。詳見表1。

表1 微山湖地區(qū)不同孳生地三帶喙庫蚊幼蟲孳生情況

2.2 三帶喙庫蚊幼蟲抗藥性調(diào)查

微山湖地區(qū)三帶喙庫蚊幼蟲對(duì)溴氰菊酯和氯氰菊酯的抗性倍數(shù)最高，分別為98.75倍和295.50倍，表現(xiàn)為高度抗性；對(duì)殘殺威和敵敵畏的抗性倍數(shù)分別為3.27倍和6.53倍，表現(xiàn)為中度抗性。詳見表2。

表2 2022年微山湖地區(qū)三帶喙庫蚊幼蟲對(duì)4種常用殺蟲劑的抗性

2.3 三帶喙庫蚊成蚊對(duì)4 種殺蟲劑的擊倒變化趨勢(shì)

微山湖地區(qū)三帶喙庫蚊成蚊對(duì)殘殺威呈可疑抗性，死亡率為94.11%，對(duì)馬拉硫磷、溴氰菊酯和氯氰菊酯呈抗性，死亡率分別為45.45%、21.05%、19.35%。見表3。在0 ～ 60 min 內(nèi)，成蚊接觸不同藥膜的擊倒率均呈現(xiàn)出不同程度的上升趨勢(shì)，氯氰菊酯和溴氰菊酯上升趨勢(shì)較殘殺威和馬拉硫磷較為緩慢，溴氰菊酯并于50 min 達(dá)到峰值，此后進(jìn)入平穩(wěn)期。見圖1。

圖1 不同藥膜對(duì)三帶喙庫蚊60 min擊倒率變化趨勢(shì)

表3 2022年微山湖地區(qū)三帶喙庫蚊成蚊抗藥性測(cè)定結(jié)果

3 討 論

微山湖地區(qū)是山東省重要的農(nóng)業(yè)及水產(chǎn)生產(chǎn)基地，該地區(qū)河流湖泊眾多，交通較為便利。這些地域條件有利于蚊媒疾病的暴發(fā)和流行，同時(shí)蚊蟲的分布范圍也可伴隨人流和貿(mào)易的交流而改變。因此蚊蟲抗藥性及孳生地的監(jiān)測(cè)是蚊媒傳染病防控十分重要的環(huán)節(jié)[10］，可以為控制蚊媒密度和降低蚊媒傳染病的發(fā)生提供科學(xué)依據(jù)。

三帶喙庫蚊作為微山湖地區(qū)常見蚊種，主要孳生于水質(zhì)較清的水稻田等水體中[11］，本調(diào)查研究結(jié)果與之相符合。近年來，隨著環(huán)境變遷，三帶喙庫蚊的孳生習(xí)性發(fā)生了改變[12］，在非傳統(tǒng)報(bào)道的生境中監(jiān)測(cè)到三帶喙庫蚊幼蟲，提示應(yīng)當(dāng)擴(kuò)大生境監(jiān)測(cè)范圍，采取高效、合理的滅蚊措施，以減少蚊媒傳染病的發(fā)生[13］。

由于大多數(shù)蚊媒病毒缺乏預(yù)防性藥物和疫苗，化學(xué)防治仍然是蚊媒疾病預(yù)防和控制的主要手段。自上世紀(jì)八十年代以來，殺蟲劑便廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)以及媒介蚊蟲防治[14］。殺蟲劑長期廣泛不合理的使用，導(dǎo)致蚊蟲的抗藥性不斷地發(fā)生和發(fā)展[15］。本調(diào)查結(jié)果顯示，微山湖地區(qū)三帶喙庫蚊幼蟲對(duì)4 種常用殺蟲劑均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，其中對(duì)擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗性程度較強(qiáng)。究其原因，可能與監(jiān)測(cè)地區(qū)過多使用該類殺蟲劑有關(guān)。該類殺蟲劑因其使用的便捷性被廣泛應(yīng)用于人們?nèi)粘Ｉ畹亩鄠€(gè)場(chǎng)所中。我國自20世紀(jì)50年代開始，每年在室內(nèi)外都投放大量擬除蟲菊酯殺蟲劑進(jìn)行滅蚊[16］。加之近幾年夏季高溫天氣頻繁出現(xiàn)，蚊蟲繁殖加快，蚊香、氣霧劑使用量增加，其有效成分大都以擬除蟲菊酯類殺蟲劑為主[17］，由于菊酯類殺蟲劑為廣譜性殺蟲劑，對(duì)多種害蟲均有顯著的防治效果，在農(nóng)業(yè)害蟲防治中廣泛應(yīng)用，致使菊酯類殺蟲劑在土壤和水體中長期、高濃度積累，從而導(dǎo)致媒介蚊蟲對(duì)其抗性水平大幅度增高[18］。這些因素導(dǎo)致媒介蚊蟲對(duì)擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗藥性不斷形成和發(fā)展。由于殘殺威和敵敵畏毒性大，在日常生活中使用較少，蚊蟲接觸此類殺蟲劑較少，這可能是三帶喙庫蚊對(duì)殘殺威和敵敵畏的抗性水平相對(duì)較低的原因。此外本研究發(fā)現(xiàn)，三帶喙庫蚊成蚊對(duì)溴氰菊酯和氯氰菊酯表現(xiàn)為抗性，成蚊和幼蟲的測(cè)定結(jié)果均證實(shí)三帶喙庫蚊幼蟲對(duì)菊酯類殺蟲劑產(chǎn)生了抗藥性。

綜上，在今后的蚊蟲防治過程中，微山湖地區(qū)應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)際情況，定期開展媒介蚊蟲抗藥性的監(jiān)測(cè)工作，可以將不同作用機(jī)制的殺蟲劑輪換使用，避免單一殺蟲劑長期使用，可采取不同作用機(jī)制的殺蟲劑復(fù)配來提高其毒力作用，延緩抗藥性的發(fā)生和發(fā)展[19］。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突