朱由瑾，周向昭，吳遠慧，溫杰，高曉莉，馮冬梅

作者單位：河北北方學院附屬第一醫(yī)院皮膚科，河北 張家口075000

梅毒是由梅毒螺旋體引起的慢性性傳播疾病，可侵犯全身各器官，導致病人出現(xiàn)硬下疳、腹股溝淋巴結腫大、皮膚丘疹或斑塊、潰瘍等多種癥狀或體征，并可引發(fā)骨骼梅毒、神經梅毒等，嚴重危害病人身心健康［1］。相關研究［2］報道，我國近年來梅毒的發(fā)病率仍居高不下，呈逐年上升趨勢。但在臨床上，有部分梅毒病人多年無明顯臨床表現(xiàn)，而梅毒血清試驗反應陽性，呈現(xiàn)潛伏狀態(tài)，稱為潛伏梅毒，其難以被發(fā)現(xiàn)，對機體的影響更大。早期潛伏梅毒是指感染期限在2年以下的潛伏梅毒，因無臨床癥狀且具有傳染性，成為重要的傳染源［3］。目前，已有研究［4］指出，T淋巴細胞介導的細胞免疫應答在梅毒病人的發(fā)病、疾病進展及轉歸中均發(fā)揮重要作用。另有研究［5］表明，梅毒血清固定病人外周血自然殺傷細胞（NK）水平低于體檢健康人群，NK細胞功能失調與梅毒病情變化具有一定的關系。但關于早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞的變化情況尚有待進一步探索。鑒于此，本研究特開展對照試驗，分析T淋巴細胞亞群、NK細胞與早期潛伏梅毒發(fā)病的關系，為臨床早期潛伏梅毒病人的診治提供一定的理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2021年3月河北北方學院附屬第一醫(yī)院診治的早期潛伏梅毒病人135例為觀察組，另選取同期健康體檢者116例為對照組。其中觀察組男76例，女59例；年齡范圍為24～57歲，年齡（35.19±5.87）歲；病程3個月至2年，病程（1.27±0.25）年。對照組男55例，女48例；年齡范圍為21～59歲，年齡（34.52±6.13）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》。病人或其近親屬對研究方案簽署知情同意書。

納入標準：觀察組均為經臨床診斷的早期潛伏梅毒病人，無皮膚、黏膜、神經系統(tǒng)等臨床癥狀，過去2年內非螺旋體試驗、梅毒螺旋體試驗均陽性，或有一期或二期梅毒史，或其性伴侶患有病程2年以內的一期、二期或潛伏梅毒；對照組均為體檢健康者，無感染性疾病等，非螺旋體試驗、梅毒螺旋體試驗均陰性；均知情同意，且自愿參與。

排除標準：出現(xiàn)一期或二期梅毒臨床癥狀或體征者；接受腦脊液檢查而結果顯示陽性者；自身免疫性疾病者；機體各系統(tǒng)及組織器官疾病者；近期急慢性期感染者；獲得性免疫缺陷綜合征；惡性腫瘤者；有精神疾患、無法配合研究者。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞表達檢測觀察組于治療前、對照組于體檢時，抽取空腹靜脈血4 mL，抗凝，離心，收集血清，采用流失細胞儀檢測、并應用Canto自動軟件計算外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞絕對計數(shù)，并測算CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞占總淋巴細胞的百分比，并計算CD4+/CD8+，其中FACSC alibur流失細胞儀、相關試劑盒均購自美國BD公司，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.2.2 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）初始滴度檢測 所有病人均行RPR檢測，抽取靜脈血2 mL，分離血清，加入卡片上圓圈內，并設陰性、陽性對照，滴加RPR抗原，旋轉搖動，觀察結果；根據檢測結果將病人分為RPR初始滴度≤1∶8組與＞1∶8組。

1.2.3 治療方法 對經臨床明確診斷的早期潛伏梅毒病人，均給予芐星青霉素治療，肌內注射，240萬單位/次，1次/周，共注射3次。

1.3 觀察指標 （1）觀察組與對照組外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞檢測結果比較（百分比與絕對計數(shù)）。（2）RPR初始滴度≤1∶8組與＞1∶8組外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞檢測結果比較。（3）早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞與RPR初始滴度的相關性。

1.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據分析采用SPSS 24.0軟件，計量資料以表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；T淋巴細胞亞群、NK細胞與RPR初始滴度的相關性采用Spearman秩相關性分析法；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞檢測結果比較 觀察組外周血CD3+、CD8+絕對計數(shù)及所占比例與對照組比較均差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），外周血CD4+絕對計數(shù)及所占比例、CD4+/CD8+所占比例均高于對照組（P＜0.05），NK細胞絕對計數(shù)及所占比例均低于對照組（P＜0.05）。見表1，2。

表1 觀察組與對照組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）絕對計數(shù)/（個/微升，）

組別對照組觀察組t值P值例數(shù)116 135 CD3+1 316.52±259.84 1 379.94±263.07 1.92 0.057 CD4+679.84±159.33 765.41±164.29 4.17＜0.001 CD8+563.72±141.23 598.75±148.35 1.91 0.058 NK 351.27±63.28 331.62±64.59 2.43 0.016

表2 觀察組與對照組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）百分比/

表2 觀察組與對照組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）百分比/

組別對照組觀察組t值P值例數(shù)116 135 CD3+/%64.85±12.95 67.79±10.76 1.96 0.051 CD4+/%29.73±5.84 37.36±7.26 9.07＜0.001 CD8+/%28.09±5.61 29.51±5.92 1.94 0.053 CD4+/CD8+1.06±0.21 1.27±0.25 7.14＜0.001 NK/%17.46±3.34 16.59±3.29 2.07 0.039

2.2 RPR初始滴度≤1∶8組與＞1∶8組外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞檢測結果比較 根據RPR檢測結果，135例早期梅毒潛伏病人中RPR初始滴度≤1∶8者有61例，＞1∶8者有74例。RPR初始滴度≤1∶8組外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)及所占比例均低于RPR初始滴度＞1∶8組（P＜0.05），且CD4+/CD8+所占比例低于RPR初始滴度＞1∶8組（P＜0.05），NK細胞絕對計數(shù)及所占比例均高于RPR初始滴度＞1∶8組（P＜0.05）。見表3，4。

表3 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）絕對計數(shù)/（個/微升，）

表3 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）絕對計數(shù)/（個/微升，）

組別≤1∶8滴度組＞1∶8滴度組t值P值例數(shù)61 74 CD3+1 325.79±273.48 1 424.58±264.91 2.12 0.035 CD4+715.84±145.32 806.27±131.06 3.80＜0.001 CD8+571.03±132.46 621.60±138.53 2.15 0.033 NK 345.75±68.42 319.97±60.14 2.33 0.021

表4 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）百分比/

表4 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）百分比/

組別≤1∶8滴度組＞1∶8滴度組t值P值例數(shù)61 74 CD3+/%66.01±9.48 69.28±8.63 2.10 0.038 CD4+/%34.25±6.17 39.92±7.34 4.80＜0.001 CD8+/%28.46±5.35 30.38±5.74 1.99 0.048 CD4+/CD8+1.20±0.23 1.31±0.26 2.58 0.011 NK/%17.32±3.45 15.99±3.16 2.34 0.021

2.3 早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞與RPR初始滴度的相關性 經Spearman秩相關性分析顯示，早期潛伏梅毒病人外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)與百分比均與RPR初始滴度呈正相關（P＜0.05），CD4+/CD8+比值與RPR初始滴度呈正相關（P＜0.05），NK細胞絕對計數(shù)、百分比均與RPR初始滴度呈負相關（P＜0.05）。見表5，6。

表5 早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）絕對計數(shù)與RPR初始滴度的相關性

表6 早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK）百分比與RPR初始滴度的相關性

3 討論

梅毒主要通過性接觸傳播，好發(fā)于多個性伴侶、男同性戀、無保護性交等人群，臨床表現(xiàn)多種多樣，亦可無癥狀而長期處于潛伏狀態(tài)［6-7］。潛伏梅毒不易被發(fā)現(xiàn)，可對機體狀態(tài)與心理健康造成嚴重影響，危害性極大［8］。梅毒發(fā)病機制復雜，已有研究［9］證實細胞免疫調節(jié)與該病的發(fā)生發(fā)展關系密切。外周血T淋巴細胞亞群與NK細胞是機體免疫應答中的重要反應指標，在機體的整個免疫狀態(tài)中舉足輕重。為了解外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞在早期潛伏梅毒病人發(fā)病中的作用，本研究就此展開探討。

CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均是T淋巴細胞亞群重要參數(shù)，可對機體細胞免疫狀態(tài)進行良好地反應。CD3+細胞屬于成熟的T淋巴細胞，可代表淋巴細胞亞群，主要執(zhí)行機體細胞免疫功能，反映特異性免疫應答狀態(tài)；CD4+細胞屬于輔助性T細胞，具有免疫調節(jié)能力與特殊殺傷功能；多數(shù)CD8+細胞屬于抑制性T細胞，部分屬于毒性T淋巴細胞，可通過介導抗病毒性感染等細胞免疫反應而抑制機體免疫反應。正常情況下，CD4+、CD8+細胞相對穩(wěn)定，維持機體免疫功能。相關研究［10］指出，T淋巴細胞免疫可抑制梅毒螺旋體，以保護機體避免感染。有研究［11］表明，兔感染梅毒后，CD3+細胞逐漸上升，在第18 d時達到最高峰，表現(xiàn)為睪丸炎，而隨著癥狀的緩解逐漸下降到一個相對低水平，但數(shù)天后，再次持續(xù)上升，此推測可能在人體感染梅毒后亦可出現(xiàn)上述CD3+細胞變化情況。本研究中觀察組病人外周血CD3+細胞絕對計數(shù)與百分比與健康人群無明顯差異，可能是因此類病人屬于早期無癥狀感染。CD4+細胞在機體抗梅毒螺旋體感染過程中具有重要作用，其可分泌白細胞介素-2、抗腫瘤因子等多種細胞因子，激活細胞遲發(fā)型超敏反應，從而發(fā)揮抗梅毒免疫［12］。而在抗梅毒螺旋體感染的免疫中，CD8+細胞在抑制機體免疫反應的同時亦可抑制梅毒螺旋體抗體生成，避免造成梅毒螺旋體擴散與潛伏［13］。本研究中觀察組外周血CD4+絕對計數(shù)及所占比例、CD4+/CD8+所占比例均較對照組高，而CD8+絕對計數(shù)及所占比例與對照組相當，此與屈曉威［14］等研究結果相一致，提示早期潛伏梅毒病人可能存在一定的細胞免疫力增強情況，利于消除梅毒螺旋體。NK細胞是參與機體免疫調節(jié)的重要免疫細胞，可識別靶細胞與殺傷介質而非特異性殺傷病毒感染細胞，在清除梅毒螺旋體方面起著重要作用。本研究中觀察組外周血NK細胞絕對計數(shù)及所占比例較對照組低，可能是因早期潛伏梅毒病人機體的防御功能受到一定的損傷，吞噬及殺傷梅毒螺旋體的功能降低，清除梅毒螺旋體的作用減弱，則引發(fā)機體被梅毒螺旋體感染［15］。相關研究［16］報道，梅毒血清固定病人NK細胞較健康者低，此與本研究結果基本符合。

本研究結果還發(fā)現(xiàn)，外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)與所占比例以及CD4+/CD8+所占比例在RPR初始滴度≤1∶8的早期潛伏梅毒病人中較RPR初始滴度＞1∶8者低，而NK細胞絕對計數(shù)及所占比例在RPR初始滴度≤1∶8者中較RPR初始滴度＞1∶8者高，且經Spearman秩相關性分析，早期潛伏梅毒病人外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)和百分比以及CD4+/CD8+比值均與RPR初始滴度呈正相關，而NK細胞絕對計數(shù)、百分比均與RPR初始滴度呈負相關，提示外周血T淋巴細胞亞群與NK細胞變化情況可能與早期潛伏梅毒滴度存在一定的關系。早期潛伏梅毒滴度越高，則病人機體防御功能損壞越明顯，NK細胞下降，刺激機體自身產生更強的細胞免疫應答能力以抵抗梅毒螺旋體感染，相關研究［17］顯示，甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）滴度＜1∶8的梅毒病人CD3+、CD4+、CD8+細胞均低于TRUST≥1∶8病人，而NK細胞高于TRUST≥1∶8病人，此與本研究結果基本符合，進一步表明外周血T淋巴亞群、NK細胞的檢測對早期潛伏梅毒滴度評估有積極臨床意義。

綜上，與健康人群相比，早期梅毒潛伏病人外周血CD4+、CD4+/CD8+升高，NK細胞降低，而CD3+、CD8+細胞無明顯改變，但外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞變化均與早期潛伏梅毒滴度存在一定的關系，推測此可能參與了早期潛伏梅毒的發(fā)病過程。