陳俊玉，張景楠，彭楠，滕景芳，曹彩霞，孟明，王彥

作者單位：1河北大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 保定071000；2河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 保定071000；3保定市中心血站，河北 保定071000

自然殺傷T細(xì)胞（natural killer T cell，NKT cell）是一類兼具T細(xì)胞相關(guān)受體和自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK cell）相關(guān)受體的淋巴細(xì)胞亞群。根據(jù)細(xì)胞是否表達(dá)恒定TCR鏈，NKT細(xì)胞可分為恒定性NKT（invariant NKT，iNKT）細(xì)胞與多樣性NKT（diverse NKT，dNKT）細(xì)胞。通過CD1d分子提呈的糖脂類抗原可與iNKT細(xì)胞的TCR結(jié)合使其活化，活化的iNKT細(xì)胞可迅速高效地分泌大量細(xì)胞因子和趨化因子［1］，通過與其他免疫細(xì)胞的相互作用，調(diào)控機(jī)體的免疫系統(tǒng)，在造血、腫瘤、自身免疫病等方面發(fā)揮重要的作用［2-4］。根據(jù)其分泌細(xì)胞因子的不同，iNKT細(xì)胞可分為iNKT1、iNKT2、iNKT10及iNKT17亞群［5］，分別分泌干擾素-γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素（IL）-4、IL-10、白細(xì)胞介素-17（IL-17）。不同的iNKT細(xì)胞亞群功能不同，甚至截然相反，故iNKT細(xì)胞不同方向的激活以及亞群的差異分布，可調(diào)控免疫反應(yīng)朝不同的方向進(jìn)展，并且產(chǎn)生不同強(qiáng)度的免疫反應(yīng)，對機(jī)體起到雙向調(diào)節(jié)作用［6］。

α-半乳糖基神經(jīng)酰胺（α-GalCer）是一種從海綿中提取的糖脂類物質(zhì)，可特異性激活iNKT細(xì)胞，刺激其增殖活化并釋放多種促炎和抑炎因子［7］，在不同器官中引起不同亞群的變化。研究表明，肝組織中存在大量的 iNKT 細(xì)胞，約為其他器官的20～100倍，約占肝臟總淋巴細(xì)胞數(shù)的20%～35%［8］，是體內(nèi)重要的免疫反應(yīng)器官。大量研究表明，iNKT細(xì)胞與許多肝臟疾病如乙型病毒性肝炎、肝癌、自身免疫性肝病等有著密切的關(guān)系［9-11］。由于iNKT細(xì)胞對機(jī)體的調(diào)控具有雙向功能，因此研究如何使iNKT細(xì)胞向保護(hù)機(jī)體的方向分化至關(guān)重要。本研究自2022年1―3月通過采用靜脈注射α-GalCer的方式，用流式細(xì)胞儀在注射完成后第2、4、6、8、10天對小鼠肝臟中的 iNKT 細(xì)胞頻率和亞群進(jìn)行檢測，外周血血清中 IL-4，IFN-γ，IL-17A 的表達(dá)水平采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測，來探討靜脈注射α-GalCer對肝臟中iNKT細(xì)胞增殖與分化的影響，從而為臨床上肝臟相關(guān)疾病中以iNKT為靶標(biāo)的免疫治療提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 C57BL/6J雄性4～5 周齡小鼠。購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證編號SCXK（京）2019-0008。飼養(yǎng)于 無特定病原體（SPF）級動物室內(nèi)，所有動物均適應(yīng)飼養(yǎng)1周后予以分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。大鼠的處理符合動物倫理學(xué)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.2.1 材料 α-GalCer購于AdipoGen 公司，小鼠組織淋巴細(xì)胞分離液、0.5 mol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）（pH8.0）、牛血清白蛋白（BSA）購于北京索萊寶生物科技有限公司，F(xiàn)oxp3/TRN Factor Stain Buffer購于Invitrogen 公司，F(xiàn)ITC Hamster Anti-Mouse TCR-β、AlexaFluor?647-mouse anti-PLZF、BV421 Mouse Anti-Mouse RORγt購于美國BD Pharmingen公司，T-selected-CD1d tetramer-PE 購于日本MBL公司，PE/Cyanine7 anti-T-bet Antibody購于美國Biolegend公司。小鼠IFN-γ、IL-4、IL-17A ELISA試劑盒購于杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司。

α-GalCer 溶液的配制： 以100%的二甲基亞砜溶液（DMSO）溶解α-GalCer成濃度為1 g/L，用 磷酸鹽緩沖溶液（PBS）稀釋到10 mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 儀器 流式細(xì)胞儀FACS CantoII 為美國BD Pharmingen公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀為美國Bio-tek EPOCH公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 動物分組 選擇C57BL/6健康雄性小鼠60只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對照組，每組30只（每組分為5個時間點(diǎn)，每個時間點(diǎn)6只小鼠）。觀察組以100 ng/g體質(zhì)量的劑量注射α-GalCer，對照組以同樣的注射方式注射相同劑量的生理鹽水。

1.3.2 小鼠肝臟中淋巴細(xì)胞的獲取 分別于注射后第2、4、6、8、10天取小鼠肝臟組織，在培養(yǎng)皿中加入適量的 PBS，潤濕細(xì)胞篩，剪碎組織并研磨，制備單細(xì)胞懸液，1 000 r/min，4 ℃離心8 min，獲取細(xì)胞沉淀，PBS重懸后轉(zhuǎn)移到裝有淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，2 000 r/min，4 ℃，20 min進(jìn)行密度梯度離心，分離出淋巴細(xì)胞。PBS 清洗離心，棄上清后獲取單細(xì)胞懸液。

1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)（FACS）檢測肝臟中iNKT細(xì)胞頻率 計(jì)數(shù)單細(xì)胞懸液并調(diào)整細(xì)胞密度，置于流式管中（每管1×106個細(xì)胞），加入anti-TCRβ 1 μL和α-GalCer負(fù)載的CD1d-tetramers 1 μL并混勻，4 ℃避光孵育30 min，1 mL PBS清洗重懸，1 000 r/min，4 ℃離心5 min，棄上清，加500 μL PBS重懸，F(xiàn)ACS檢測。

1.3.4 FACS 檢測肝臟中 iNKT 細(xì)胞亞群 同“1.3.3”，清洗棄上清后，依據(jù) Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer試劑盒的具體操作步驟對細(xì)胞進(jìn)行透化固定處理，4 ℃避光45 min，加1 mL破膜緩沖液，4 ℃ 500g離心 5 min，棄上清，加入1 μL PLZF，1 μL T-bet和1 μL ROR-γt ，混勻，4 ℃避光孵育 30 min，加1 mL破膜緩沖液渦旋混勻，4 ℃條件下500g離心 5 min，棄上清，加 500 μL PBS 重懸，F(xiàn)ACS上機(jī)檢測。

1.3.5 ELISA檢測外周血血清IL-4，IFN-γ，IL-17A水平 小鼠眼球血，4 ℃條件下，12 000 r/min離心8 min，離心后血清轉(zhuǎn)移到EP 管中，-20 ℃保存，檢測前低溫復(fù)溶。采用杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司提供的Mouse IL-4、IFN-γ，IL-17A ELISA試劑盒進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)用 SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)符合正態(tài)分布，采用表示，各指標(biāo)間比較采用多因素設(shè)計(jì)的方差分析，組內(nèi)不同時間點(diǎn)比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠肝臟 iNKT 細(xì)胞頻率及亞群的變化

2.1.1 肝臟iNKT細(xì)胞頻率及亞群頻率變化 組間比較發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，靜脈注射α-GalCer可引起肝臟iNKT細(xì)胞頻率及亞群頻率變化，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=198.40，P＜0.001）。組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)，對照組肝臟iNKT細(xì)胞頻率及亞群頻率變化與時間節(jié)點(diǎn)無關(guān)（P＜0.05）；靜脈注射α-GalCer可引起肝臟iNKT細(xì)胞及亞群頻率隨時間推移呈波動性變化（P＜0.05）。觀察組不同時間點(diǎn)iNKT細(xì)胞頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.46，P=0.003）。靜脈注射α-GalCer 第2天可使肝臟iNKT細(xì)胞達(dá)到較高水平，于第4天降至低于正常水平，隨后逐漸恢復(fù)至正常水平（P＜0.05）。與第2天相比，第4、6、8 和10天iNKT細(xì)胞頻率均顯著降低，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 小鼠肝臟iNKT細(xì)胞頻率變化/（%，）

表1 小鼠肝臟iNKT細(xì)胞頻率變化/（%，）

注：①與第2天相比，P＜0.05。

組別對照組觀察組第10天3.14±0.35 2.51±0.11①鼠數(shù)6 6第2天2.72±0.19 20.87±2.15第4天2.72±0.19 5.61±0.51①第6天2.93±0.24 2.65±0.26①第8天3.06±0.45 2.62±0.64①

2.1.2 肝臟iNKT1亞群細(xì)胞頻率變化 觀察組iNKT1亞群細(xì)胞頻率在各時間點(diǎn)的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.19，P=0.001）。靜脈注射α-GalCer可使肝臟iNKT1亞群頻率降至低于正常水平，且隨時間延長呈現(xiàn)上下波動，與第2天相比，第4天iNKT1亞群頻率降低（P＜0.05），第6天iNKT1亞群頻率升高（P＜0.05），第8天iNKT1亞群頻率再次降低（P＜0.05），直至第10天iNKT1亞群頻率恢復(fù)至正常水平（P＜0.05）。見表2。

表2 小鼠肝臟iNKT1細(xì)胞頻率變化/（%，）

表2 小鼠肝臟iNKT1細(xì)胞頻率變化/（%，）

注：①與第2天相比，P＜0.05。

組別對照組觀察組第10天3.12±0.11 3.25±0.53①鼠數(shù)6 6第2天3.68±1.02 1.04±0.37第4天2.74±0.21 0.48±0.12①第6天2.81±0.33 1.99±1.04第8天2.93±0.29 0.60±0.11

2.1.3 肝臟iNKT2亞群細(xì)胞頻率變化 觀察組各時間點(diǎn)iNKT2亞群細(xì)胞頻率間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.79，P=0.002）。iNKT2亞群細(xì)胞頻率于注射α-Gal-Cer后第2天達(dá)到較高水平，后逐漸下降，與第2天相比，各時間點(diǎn)iNKT2亞群頻率均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 小鼠肝臟iNKT2細(xì)胞頻率變化/（%，）

表3 小鼠肝臟iNKT2細(xì)胞頻率變化/（%，）

注：①與第2天相比，P＜0.05。

組別對照組觀察組第10天36.37±1..18 6.26±1.28①鼠數(shù)6 6第2天38.03±1.70 75.13±3.48第4天40.13±3.20 33.83±9.08①第6天40.16±3.15 17.20±5.37①第8天38.03±1.70 12.00±1.99①

2.1.4 肝臟iNKT17亞群細(xì)胞頻率變化 觀察組各時間點(diǎn)iNKT17亞群細(xì)胞頻率間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.02，P=0.012）。靜脈注射α-GalCer可使肝臟iNKT17亞群頻率低于正常水平，隨后逐漸恢復(fù)，與第2天比較，第4和10天肝臟iNKT17亞群頻率均顯著提高（P＜0.05）。第6和8天略有提高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 小鼠肝臟iNKT17細(xì)胞頻率變化/（%，）

表4 小鼠肝臟iNKT17細(xì)胞頻率變化/（%，）

注：①與第2天相比，P＜0.05。

組別對照組觀察組第10天4.17±0.14 2.72±1.09①鼠數(shù)6 6第2天4.53±1.29 0.17±0.06第4天4.35±1.29 4.13±1.08①第6天3.11±0.33 1.44±0.45第8天3.90±0.33 1.17±0.26

2.1.5 各時間點(diǎn)肝臟iNKT17各亞群細(xì)胞頻率變化 第2、4天觀察組與對照組的iNKT細(xì)胞頻率相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；除第10天外，其他時間點(diǎn)觀察組iNKT1亞群細(xì)胞頻率與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；除第4天外，其他時間點(diǎn)iNKT2及iNKT17亞群細(xì)胞頻率與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 不同時間血清細(xì)胞因子的變化情況 與第2天相比，觀察組靜脈注射α-GalCer后IL-4水平于第6天降低； IFN-γ水平于第6天和第8天降低；IL-17A水平于第8天升高，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組第6天IL-4水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組各時間點(diǎn)IFN-γ濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；除第6天外，兩組IL-17A的濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表5。

表5 兩組小鼠外周血血清細(xì)胞因子濃度比較/（ng/L，）

表5 兩組小鼠外周血血清細(xì)胞因子濃度比較/（ng/L，）

注：IL-4為白細(xì)胞介素-4，IFN-γ為干擾素-γ，IL-17A為白細(xì)胞介素-17A。①與觀察組第2天 相比，P＜0.05。

類別IL-4對照組觀察組IFN-γ對照組觀察組IL-17A對照組觀察組鼠數(shù)第2天第6天第8天F值72.14 P值＜0.001 6 6 6 6 6 6 32.38±0.45 33.42±1.67 43.50±0.56 31.64±1.61①32.89±0.78 32.30±1.12 2 768.42＜0.001 403.56±6.18 143.00±15.59 84.47±6.41 59.19±3.57①52.79±0.96 100.07±2.78①199.16＜0.001 47.25±1.67 32.81±0.96 33.64±2.09 33.64±2.40 52.78±0.46 41.97±1.74①

3 討論

最新研究顯示，iNKT細(xì)胞可分為四個主要亞群包括iNKT1、iNKT2、iNKT17和iNKT10，目前普遍認(rèn)為，肝臟和脾臟中主要包含iNKT1亞群，iNKT2亞群則主要分布在胸腺、脾臟和肺中，iNKT17亞群主要存在于淋巴結(jié)、肺和皮膚中，iNKT10為近幾年在脂肪組織中發(fā)現(xiàn)的一種新的iNKT亞群［12］。本研究主要檢測了肝臟中的iNKT1、iNKT2、iNKT17三種亞群，結(jié)果顯示肝臟中iNKT2亞群頻率高于iNKT1亞群，與多數(shù)研究不符。之前有一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)［13］，iNKT細(xì)胞在自然活化狀態(tài)下能夠抑制肝臟炎性介質(zhì)的增多與聚集從而達(dá)到保護(hù)肝組織的目的，這說明機(jī)體在正常情況下，是處于保護(hù)機(jī)體的狀態(tài)，能夠通過某種機(jī)制控制炎癥因素的產(chǎn)生與擴(kuò)大，因此本實(shí)驗(yàn)中對照組小鼠肝臟iNKT2亞群頻率高于iNKT1亞群，可能是小鼠處于對自身機(jī)體的保護(hù)狀態(tài)下。

靜脈注射α-GalCer后，肝臟iNKT1亞群低于正常水平，后逐漸升高，于第10天升至正常水平；iNKT2亞群高于正常水平，但隨時間逐漸下降；iNKT2亞群頻率始終高于iNKT1亞群。而以往有實(shí)驗(yàn)研究顯示，靜脈注射α-GalCer能使脾臟和肝臟中的NKT1細(xì)胞被激活［14］。可能是因?yàn)榇舜螌?shí)驗(yàn)中正常情況下時iNKT2亞群就高于iNKT1亞群，再加上注射α-GalCer后，機(jī)體對于抗原的侵入所做出的應(yīng)答為抑炎效應(yīng)大于促炎效應(yīng)。許多研究表明，iNKT細(xì)胞在激活后很快（在8～12 h內(nèi)）變得不可檢測［15］，其TCR受體在8～12 h時下調(diào)最為明顯，之后表達(dá)水平再次升高，在24～48 h時恢復(fù)正常水平。因此，iNKT1亞群頻率的下調(diào)，可能是因?yàn)槠浔砻娴腡CR受體下調(diào)，導(dǎo)致其被檢出受限，并非真正數(shù)量上的減低。

iNKT17細(xì)胞亞群主要分布在淋巴結(jié)、肺和皮膚等組織中，在肝臟、脾臟等組織中含量較低，正常對照組中，iNKT17亞群頻率低于iNKT1亞群和iNKT2亞群，在注射α-GalCer后iNKT17亞群頻率也始終低于正常對照組，可能與此有關(guān)［16］。另外在我們前期的一項(xiàng)研究中［17］，通過單次及多次尾根皮下注射α-GalCer，觀察各個臟器iNKT細(xì)胞及亞群的變化，結(jié)果顯示注射α-GalCer后能誘導(dǎo)iNKT 細(xì)胞明顯增殖，各器官中的iNKT亞群變化也有較大差異，這兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均說明不僅iNKT細(xì)胞的分布具有器官組織特異性，iNKT對于刺激做出反應(yīng)進(jìn)而向不同亞群分化時，在不同組織中也有著較大差異，也進(jìn)一步說明iNKT細(xì)胞亞群的器官組織定位以及所產(chǎn)生細(xì)胞因子的種類和運(yùn)作方式的重要性。

iNKT細(xì)胞是先天性淋巴細(xì)胞，聯(lián)系著先天性免疫和適應(yīng)性免疫。與適應(yīng)性免疫細(xì)胞相比，它們具有成熟的效應(yīng)表型，使其能夠快速對刺激做出應(yīng)答。本研究中，靜脈注射α-GalCer后第2天，iNKT細(xì)胞的頻率即迅速升高，除iNKT細(xì)胞能迅速對刺激做出應(yīng)答的原因外，還可能與靜脈注射的方式有關(guān)，靜脈給藥途徑是將物質(zhì)輸送到動物體內(nèi)的最有效途徑，藥物能迅速進(jìn)入血液，起效快［18］，另外由于在血液中代謝較快，靜脈注射抗原免疫應(yīng)答持續(xù)時間短，也就導(dǎo)致結(jié)果變化較為迅速。

iNKT1細(xì)胞在激活時主要分泌IFN-γ；iNKT2細(xì)胞則主要產(chǎn)生IL-4、IL-13和IL-5；iNKT17細(xì)胞分泌大量IL-17［5］。分泌IFN-γ的iNKT細(xì)胞和分泌IL-17的iNKT細(xì)胞可促進(jìn)肝臟炎癥的病理進(jìn)程，分泌IL-4的iNKT細(xì)胞則發(fā)揮抑制炎性反應(yīng)的作用。觀察組血清IFN-γ自注射后即低于正常水平（P＜0.05），到第8天超過正常水平（P＜0.05），與iNKT細(xì)胞亞群的變化一致。在一項(xiàng)來自幼稚小鼠的離體iNKT細(xì)胞的分析中顯示［19］，在體內(nèi)暴露于抗原的2 h內(nèi)，肝臟中的大多數(shù)iNKT細(xì)胞就會同時產(chǎn)生IL-4和IFN-γ。而本實(shí)驗(yàn)中顯示血液中IL-4和IFN-γ水平的變化有著明顯的時間差異，這說明iNKT細(xì)胞激活后，組織中的細(xì)胞因子與血液中的細(xì)胞因子可能在數(shù)量及種類上有著不同程度的差異，加上本實(shí)驗(yàn)采集外周血的時間與注射時間間隔較長，導(dǎo)致未能及時捕捉到血液中細(xì)胞因子初始的變化情況，所以，外周血血清中的細(xì)胞因子水平與組織中iNKT細(xì)胞的增殖活化的關(guān)系尚需進(jìn)一步研究探討。

IL-17家族有A～F六個成員，其中關(guān)于IL-17A的研究較多［20］，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，觀察組IL-17A水平一直低于對照組，IL-17A是一種參與慢性炎癥的促炎因子，在一項(xiàng)由α-GalCer誘導(dǎo)的急性肝功能衰竭的模型中發(fā)現(xiàn)，IL-17的分泌增加在加快疾病進(jìn)展方面起著重要作用［21］。再次說明此實(shí)驗(yàn)中小鼠對于抗原刺激所產(chǎn)生的效應(yīng)以保護(hù)機(jī)體為主。

α-GalCer等外源性糖脂類抗原刺激體內(nèi)iNKT細(xì)胞，使其能夠迅速產(chǎn)生IL-4和IFN-γ。有研究表明，靜息的iNKT細(xì)胞具有高水平的IL-4和IFN-γ mRNA，在高水平表達(dá)IL-4和IFN-γ mRNA的T細(xì)胞中存在的一種識別基序家族RNA結(jié)合蛋白TIA-1和TIAR的編碼mRNA，同樣存在于iNKT細(xì)胞中，同時還發(fā)現(xiàn)編碼趨化因子RANTES（CCL5）的mRNA在iNKT細(xì)胞中具有組成性表達(dá)［22-23］。這些發(fā)現(xiàn)表明，iNKT調(diào)節(jié)其細(xì)胞因子分泌的機(jī)制可能在某種程度上與之有關(guān)，這也可能是細(xì)胞能做出快速反應(yīng)的原因之一。但它是否適用于iNKT細(xì)胞產(chǎn)生的所有細(xì)胞因子及趨化因子，以及它們具體的作用機(jī)制，是我們下一步需要研究探討的問題。

iNKT細(xì)胞和細(xì)胞因子、趨化因子、其他免疫細(xì)胞及免疫組織微環(huán)境等互相交織成一張復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)，其功能的多樣性提示我們它在機(jī)體中發(fā)揮作用的復(fù)雜性，α-GalCer重復(fù)處理會導(dǎo)致無能，有研究依據(jù)iNKT細(xì)胞功能的雙面性，設(shè)計(jì)了一種“雙重打擊”的方法治療膿毒血癥，使iNKT細(xì)胞能夠逃脫無能并在雙相敗血癥中發(fā)揮有益作用［24］。這說明合理利用iNKT細(xì)胞的免疫雙重功能來治療疾病是未來一大熱點(diǎn)。

綜上所述，靜脈注射α-GalCer能促進(jìn)小鼠肝臟iNKT細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)iNKT 細(xì)胞各亞群的變化，本實(shí)驗(yàn)為肝臟疾病的基于iNKT細(xì)胞的免疫治療提供了基礎(chǔ)研究依據(jù)。