劉 翔， 楊麗娟， 沈 梅， 郝 瓊， 郭邦成， 李 剛

（1.寧夏回族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，銀川 750004； 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，銀川 750004）

肺炎是臨床常見的一種下呼吸道感染性疾病，主要臨床表現(xiàn)為呼吸急促、乏力、高熱、咳嗽等癥狀，通常病情較重，嚴(yán)重危害人類健康，位居感染性疾病病死率之首，在人類總病死率中排第5～6 位[1]。引起肺炎的病原主要有細(xì)菌、病毒、支原體和衣原體等[2]。為了解寧夏銀川地區(qū)某醫(yī)院肺炎病例病原譜構(gòu)成，本研究收集2019 年1 月至2020 年12 月寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院300 例住院肺炎病例的肺泡灌洗液進(jìn)行檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 材料

2019 年1 月至2020 年12 月，收集在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院就診，有急性感染和呼吸道臨床癥狀，且胸部X 線片提示肺部炎性改變，臨床診斷為肺炎患者的支氣管肺泡灌洗液樣本300 份。

1.2 主要試劑和儀器

病毒總RNA/DNA 和細(xì)菌DNA 提取試劑盒購自德國凱杰公司，呼吸道病原體多重?zé)晒釶CR檢測試劑盒購自北京卓誠惠生生物科技股份有限公司，熒光PCR 儀使用美國ABI 公司Q7 Pro和瑞士羅氏制藥公司Roch 480Ⅱ。

1.3 方法

參照《發(fā)熱呼吸道癥候群病原學(xué)監(jiān)測與檢測技術(shù)》[3]中的病原種類，手工提取肺泡灌洗液樣本總RNA 和DNA，采用熒光PCR 法對流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、副流感病毒、偏肺病毒、博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、腸道病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎克雷伯菌、百日咳鮑特菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌、A 組乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌共19 種病原體進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)過程設(shè)置內(nèi)標(biāo)、陽性對照和空白對照，檢測結(jié)果CT 值＜35 且擴(kuò)增曲線呈典型的S 形曲線判定為陽性，按照北京卓誠惠生生物科技股份有限公司產(chǎn)品說明書判定結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

病例數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，樣本陽性率用率（%）表示，圖表制作均用Excel 2013 完成，對樣本陽性率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P≤0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病原譜

共檢測300 份病例樣本，檢出15 種病原，陽性樣本123 份，陽性率為41.00%，其中僅病毒感染樣本29 份，陽性率為9.67%（29/300），占陽性樣本的23.58%（29/123）；僅細(xì)菌感染樣本68份，陽性率為22.67%（68/300），占陽性樣本的55.28%（68/123）；細(xì)菌病毒合并感染樣本26 份，陽性率為8.67%（26/300），占陽性樣本的21.14%（26/123），各類病原陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=31.02，P＜0.01）。病毒感染病例以冠狀病毒、鼻病毒、博卡病毒和腺病毒為主，共占病毒陽性病例的80%以上，呼吸道合胞病毒和腸道病毒未檢出；細(xì)菌感染病例以肺炎支原體、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌為主，共占細(xì)菌陽性病例的85%以上，嗜肺軍團(tuán)菌和肺炎衣原體未檢出，見圖1。

圖1 陽性樣本分類病原譜分析

2.2 年度病原譜

123 例陽性樣本中，2019 年74 例，陽性率59.68%（74/124），2020 年49 例，陽性率為27.84%（49/176），兩年度間樣本陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=30.481，P＜0.01）。2019 年感染病原以肺炎支原體、博卡病毒、冠狀病毒和流感嗜血桿菌為主，2020 年感染病原以流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、銅綠假單胞菌和鼻病毒為主。肺炎支原體、博卡病毒、百日咳鮑特菌、流感病毒和偏肺病毒僅在2019 年檢出，見圖2。

圖2 不同年度病原譜分析

2.3 年齡組病原譜

各年齡組中，細(xì)菌和病毒均有檢出，且細(xì)菌感染均高于病毒感染。5 歲以下嬰幼兒和5～15歲兒童陽性率較高，分別達(dá)到86.67%和88.89%，其余年齡組陽性樣本檢出率均在40%以下，各年齡組陽性樣本檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=45.235，P＜0.01）。從整體來看，65 歲以上老人病原譜最為多樣，16～35 歲青少年和36～50 歲青壯年檢出病原種類相對較少，肺炎支原體和流感嗜血桿菌在各年齡組均有檢出，但肺炎支原體主要在15 歲及以下年齡組檢出，陽性率達(dá)到71.43%（30/42），流感嗜血桿菌主要在36 歲及以上年齡組檢出。肺炎鏈球菌除了16～35 歲年齡組，在其他年齡組均有檢出，肺炎支原體和博卡病毒在5～15 歲年齡組占比較高，流感嗜血桿菌和冠狀病毒在36 歲及以上年齡組占比較高，肺炎克雷伯菌和鼻病毒主要在51 歲及以上老年人群中檢出，見圖3。

圖3 不同年齡組病原譜分析

2.4 混合感染病原譜

123 份陽性樣本中，僅細(xì)菌或病毒單一感染84 例，混合感染病例39 例。混合感染病例中，2種病原感染30 例，3 種病原感染8 例，4 種病原感染1 例，其中細(xì)菌病毒合并感染和細(xì)菌間混合感染病例占97.44%（38/39），病毒間混合感染僅占2.56%（1/39）。2 種病原感染的病例中檢出的病原以肺炎支原體、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、博卡病毒和冠狀病毒為主；3 種及以上病原感染的病例中檢出的病原以流感嗜血桿菌、鼻病毒、肺炎鏈球菌和肺炎支原體為主，見圖4。

圖4 陽性樣本混合感染病原譜分析

3 討論

目前，國內(nèi)多數(shù)研究僅作細(xì)菌或病毒單一種類病原的感染調(diào)查和病原譜研究[4-8]，或者僅作兒童、老人的肺炎病例病原譜[9-10]，檢測病原種類和年齡組覆蓋不全，不能完整反映肺炎病例感染的真實(shí)病原譜情況，寧夏地區(qū)也未見呼吸道病原譜相關(guān)的研究和報道。本研究對300 份肺炎病例的肺泡灌洗液樣本同時進(jìn)行了常見引起肺炎的共19 種細(xì)菌和病毒的病原檢測，覆蓋了絕大部分引起呼吸道感染的病原，樣本總陽性率為41%，檢出最多的病原是肺炎支原體，與石鑫等[11]在黑龍江省的研究結(jié)果一致。此次研究中，有177 例病例未檢出明確感染源，占總病例數(shù)的59.00%，分析可能有以下原因：一是，陰性病例中存在非感染性原因引發(fā)的肺炎病例；二是，受目前國內(nèi)呼吸道多重病原檢測方法和試劑的限制，此次研究未涵蓋所有引起肺炎的病原；三是，住院病歷顯示大多使用抗生素和抗病毒藥物治療，致使患者體內(nèi)病原感染量降低，受核酸提取試劑盒效率和檢測方法、試劑盒靈敏度的限制，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

從整體病原譜來看，細(xì)菌性病原感染高于病毒性感染，單一病原感染高于多病原合并感染，細(xì)菌感染病例以肺炎支原體、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌為主，病毒感染病例以冠狀病毒、鼻病毒、博卡病毒和腺病毒為主，各類病原陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義。上述結(jié)果說明，下呼吸道感染的肺炎病例主要感染源是細(xì)菌，這與黎孟楓等[3]的結(jié)論（上呼吸道感染70%～80%由病毒感染引起，下呼吸道感染多由細(xì)菌引起）一致。

從年齡分布來看，各年齡組陽性病例中，細(xì)菌構(gòu)成比均高于病毒，5 歲以下嬰幼兒和5～15歲兒童陽性率較高，感染的主要病原體是肺炎支原體。其次為65 歲以上老人，病原譜呈現(xiàn)多樣化，各病原檢出情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果表明，肺炎支原體更容易誘發(fā)15 歲及以下兒童和嬰幼兒肺炎；中老年人群由于機(jī)體免疫力衰退，對各類病原均易感。

從年度分布來看，2019 年感染病原體以肺炎支原體、博卡病毒、冠狀病毒和流感嗜血桿菌為主，2020 年感染病原以流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、銅綠假單胞菌和鼻病毒為主，年度間陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義。所有肺炎支原體陽性病例均分布于2019 年，結(jié)合2019—2020 年各年度病例數(shù)和年齡病原譜分布數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體主要從學(xué)齡兒童中檢出，而2020 年15 歲及以下病例僅有5 例，均未檢出肺炎支原體。由此推斷，學(xué)齡兒童可能既是肺炎支原體的易感人群，也是主要的傳染源。2019 年和2020 年采取的防控措施是肺炎支原體感染差異明顯的直接原因。

從混合感染來看，混合感染病例大多數(shù)伴有細(xì)菌感染，其中細(xì)菌病毒合并感染和細(xì)菌間混合感染病例占比超過97%，病毒間混合感染僅占2.56%，在2 種病原、3 種病原、4 種病原感染的病例中，肺炎支原體、流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌占比較高。

綜上所述，本次研究從病原類別、年度、年齡組和多重感染4 個方面系統(tǒng)闡述了寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院肺炎感染病原譜分布情況，均是以細(xì)菌感染為主、病毒感染為輔，提示在肺炎住院患者的臨床治療過程中，可以優(yōu)先考慮抗生素治療方案，同時做好院內(nèi)感染的防控，避免交叉感染，以提升臨床治愈效果，減輕患者疾病負(fù)擔(dān)。

本研究中，采用熒光PCR 方法對同一樣本進(jìn)行了19 種病原的檢測，受檢測試劑費(fèi)用和項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)的限制，未收集2019 年1 月至2020 年12月該院所有住院的肺炎病例進(jìn)行檢測，但所檢測項(xiàng)目覆蓋了大部分引起肺炎的病原，結(jié)果對臨床肺炎病例診治有一定的幫助。