張永康,楊秀進

(1.寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院,寧夏 銀川 750021;2.北京科牧豐生物制藥有限公司,北京 102600)

豬圓環(huán)病毒(porcine circovirus,PCV)為圓環(huán)病毒科的圓環(huán)病毒屬成員,動物病毒中直徑最小的環(huán)狀 DNA 病毒,該病毒主要分為1型(PCV-1)和 2型(PCV-2),其中PCV-2為引起仔豬發(fā)病的致病血清型[1]。相關(guān)研究表明,國內(nèi)豬場 PCV-2 陽性率高達100%,常常引起混合感染或繼發(fā)感染[2]。豬感染PCV-2后免疫功能會受到損害,機體抵抗力降低,更易與豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬甚至腸道疾病形成混合感染,被視為我國養(yǎng)殖業(yè)重大危害之一,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。

生長育肥豬腹瀉在國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)是一個很普遍的問題,很多人認為主要原因是胞內(nèi)勞森氏菌導(dǎo)致的回腸炎,卻忽略了另外一個因素——PCV2。本文介紹一起典型的由PCV-2引起感染的案例,涵蓋鑒別診斷和綜合防控,希望對生長育肥豬腹瀉的控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 豬場情況

寧夏某1 500頭單點式豬場,商品豬不進行PCV-2免疫,80日齡左右的生長育肥豬群出現(xiàn)頑固性腹瀉,腹瀉糞便的形狀復(fù)雜,大致分為水泥樣糞便和黃色糞便,發(fā)病率70%以上,其中部分豬只最終會出現(xiàn)逐漸消瘦、死亡。用抗生素僅能控制約50%的病例。

1.2 試驗材料

1.2.1 病料采集 選取2頭具有典型腹瀉癥狀的病豬撲殺,用注射器采集5 mL血液樣品,2～8 ℃保存,送實驗室進行病原檢測。無菌采取其脾臟、回腸、淋巴結(jié)等臟器,進行福爾馬林固定。

1.2.2 主要試劑和儀器 中性福爾馬林固定液(10%),G2161,北京索萊寶科技有限公司,PCV-2熒光PCR檢測試劑盒,SYA415-VQF,北京百奧萊博科技有限公司。大動物解剖器械,ZM-21,泰興市振牧畜禽器材廠;實時熒光定量PCR檢測儀,QuantStudio 5,美國ABI。

1.3 試驗方法

1.3.1 病毒DNA提取和PCR檢測 采集病豬血液分離出血清,然后采用無菌槍頭吸取50 μL血清至1.5 mL無菌試管中,加入50 μL DNA抽提液充分混勻,100 ℃恒溫10 min,13 000 r/min離心3 min,取上清5 μL進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系配制、qPCR反應(yīng)條件和結(jié)果分析均根據(jù)說明書進行操作。

1.3.2 病理變化分析 無菌采集病豬的脾臟、淋巴結(jié)等主要病變組織,觀察其病變。

1.3.3 病理組織學(xué)觀察 選取剖檢病豬回腸、淋巴結(jié)、脾臟等病變部位,置于中性福爾馬林固定液。固定3 d后,修剪組織至合適大小,用PBS清洗組織5遍,然后進行石蠟切片制作并進行HE染色,顯微鏡下觀察結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

臨床癥狀主要表現(xiàn)為80日齡左右的生長育肥豬群出現(xiàn)頑固性腹瀉,腹瀉糞便形狀以水泥樣糞便(圖1A)和黃色糞便(圖1B)為主,發(fā)病率在70%以上,其中部分豬只最終會出現(xiàn)逐漸消瘦、死亡。

圖1 腹瀉病豬的糞便

2.2 實時熒光定量PCR檢測

實時熒光定量PCR檢測顯示,剖檢的2頭豬的血液樣本中PCV-2的CT值均遠遠小于PC對照,結(jié)果顯示,2頭豬均為PCV-2強陽性(CT值3.5～5)(圖2)。

圖2 實時熒光定量PCR結(jié)果

2.3 剖檢及病理組織學(xué)觀察

剖檢發(fā)現(xiàn)有許多具有普遍性的病變:脾臟有輕微梗死(圖3)、淋巴結(jié)萎縮,其他臟器無顯著變化。

圖3 脾臟輕微梗死

通過對病料組織固定、脫鈣、石蠟包埋、切片和HE染色,鏡檢結(jié)果顯示,回腸腸粘膜上皮細胞顯著增生,由單層變?yōu)槎鄬?圖4)。淋巴結(jié)和脾臟的淋巴細胞數(shù)量顯著減少(圖5、圖6)。

圖4 回腸粘膜上皮細胞顯著增生,由單層增生為多層

圖6 脾臟淋巴細胞數(shù)量顯著減少,白髓淋巴細胞減少尤為明顯

3 討 論

豬圓環(huán)病毒(PCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬,是當前已知的最小的病毒。PCV主要分為3種血清型:PCV-1、PCV-2 和PCV-3。其中 PCV-2是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)等相關(guān)疾病的主要病原[3]。PCV-2 對不同年齡、品種的豬都具有很強的感染性,育肥豬一般是隱形感染;母豬感染主要表現(xiàn)為繁殖障礙;仔豬感染后主要表現(xiàn)為仔豬先天性震顫(CT)、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)和豬皮炎腎病綜合征(PDNS)等,其中PMWS和PDNS對仔豬危害較大[4]。在國內(nèi)豬場PCV-2相關(guān)性疾病發(fā)病率高,但在生長育肥豬階段與回腸炎一起引起頑固性腹瀉的病例并未見報道。

本豬場育肥豬出現(xiàn)頑固性腹瀉,發(fā)病率70%以上,其中部分豬只出現(xiàn)逐漸消瘦、死亡。用抗生素僅能控制約50%的病例。從臨床發(fā)病癥狀可以獲知該病原不只是胞內(nèi)勞森氏菌導(dǎo)致的回腸炎,還存在病毒性傳染病的可能;從剖檢及病理組織學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)該病主要損害的是免疫器官和免疫細胞,這和豬圓環(huán)病毒作為一種免疫抑制性疾病引起的癥狀相契合,最后通過實時熒光定量PCR檢測PCV-2呈強陽性,而該豬場未免疫PCV-2,進一步證實了該豬場受到了豬圓環(huán)病毒2型的感染。

本試驗在生長育肥豬腹瀉中檢出PCV-2,并確定其是引起育肥豬腹瀉的罪魁禍首之一,對臨床防治育肥豬腹瀉具有很強的指導(dǎo)意義。該豬場后來加強了PCV-2免疫,生長育肥豬再結(jié)合抗生素對回腸炎的防控,豬群腹瀉控制得到了極大改善(腹瀉率<3%)。

4 結(jié) 論

本試驗通過對發(fā)病豬場病豬進行臨床癥狀觀察、實時熒光定量PCR檢測、剖檢及病理組織學(xué)觀察,實驗結(jié)果表明,豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)是引起該豬場生長育肥豬腹瀉的主要病原之一。