鄭紅梅 溫亞錦 韓曉 馮瑞 劉麗娟 陳仁杰 李小玲 金婷婷 周玉峰，5 張曉波△

（1國家兒童醫(yī)學(xué)中心/復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院呼吸科， 2兒科研究所 上海 201102； 3復(fù)旦大學(xué)計算機科學(xué)技術(shù)學(xué)院 上海 200433；4復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室 上海 200032； 5復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院 上海 200032）

支氣管哮喘是兒童最常見的慢性疾病。2010年，我國城市0～14歲兒童哮喘患病率為3.02%，近年又呈逐年上升趨勢［1］。大多數(shù)兒童在吸入中低劑量的糖皮質(zhì)激素后癥狀得到控制，但有約2.5%～5%［2-3］的重癥哮喘兒童需要吸入高劑量糖皮質(zhì)激素來控制癥狀。重癥哮喘兒童雖然占比較小，但由于住院和急診就醫(yī)頻率顯著增加，帶來了巨大的衛(wèi)生資源負(fù)擔(dān)。與輕中度哮喘相比，重癥哮喘兒童年度醫(yī)療費用是其兩倍［4-5］。因此，提高重癥哮喘的診治有利于改善哮喘的整體控制水平，降低醫(yī)療成本。

既往研究顯示，外周血嗜酸性粒細(xì)胞和血清IgE濃度是預(yù)測哮喘急性加重或者高惡化風(fēng)險的重要生物標(biāo)志物［6-7］，但對于預(yù)測重癥哮喘的特異性生物標(biāo)志物目前尚無統(tǒng)一結(jié)論。近年來，代謝組學(xué)方法在篩選與疾病發(fā)生發(fā)展相關(guān)的生物標(biāo)志物研究中得到廣泛應(yīng)用。代謝組學(xué)旨在探究生物體內(nèi)小分子代謝物成分及其在生理病理中的整體動態(tài)變化規(guī)律，強調(diào)對代謝組分的定量和定性分析［8］。既往多項工作［9-15］揭示了與哮喘發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)的代謝物和代謝途徑，前者包括腺苷、丙氨酸等，后者包括脂質(zhì)代謝、三羧酸循環(huán)等，但結(jié)果并不一致。值得注意的是，近年來國外研究報道脂質(zhì)代謝在兒童哮喘的控制中發(fā)揮重要作用［13］。鑒于哮喘是由基因和環(huán)境共同誘發(fā)的異質(zhì)性疾病，人群的基因遺傳易感性在其發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，所以在我國特有的與環(huán)境和飲食相適應(yīng)的遺傳基礎(chǔ)上，研究重癥哮喘與輕中度哮喘兒童脂質(zhì)差異特征具有重要意義。

本研究采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）技術(shù)對重癥哮喘和輕中度哮喘兒童的血漿進行非靶向脂質(zhì)代謝組學(xué)檢測，探索重癥哮喘兒童體內(nèi)脂質(zhì)成分的改變，并篩選重癥哮喘兒童的潛在血漿標(biāo)志物，以期為重癥哮喘的臨床診治提供新思路。

資料和方法

研究對象本研究數(shù)據(jù)來源于復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院哮喘專病數(shù)據(jù)庫。哮喘患者入組后即完成社會人口學(xué)和基線臨床信息收集和評估，并納入哮喘專病管理；哮喘專病庫定期向哮喘兒童推送哮喘隨訪問卷，以評估患者的哮喘控制、藥物依從性、哮喘加重等情況，并在入組后第3、6、9和12個月時安排患者進行哮喘專病門診的隨訪和評估。選取2020年9月1日—2021年4月30日入組哮喘專病數(shù)據(jù)庫且入組時已規(guī)范化治療和管理1年以上，被診斷為重癥哮喘的兒童。根據(jù)重癥哮喘兒童性別、年齡，從哮喘專病數(shù)據(jù)庫中1：1匹配輕中度哮喘兒童。最終納入50例重癥哮喘和54例輕中度哮喘兒童。本研究獲得復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：2018-215），患兒家屬均簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)合2020版GINA及我國兒童支氣管哮喘診治建議，本院哮喘專病門診嚴(yán)格管理并診斷重癥哮喘［3，16］。重癥哮喘納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合我國兒童哮喘防治指南中哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）排除患兒依從性不良、藥物吸入技術(shù)錯誤，并排除誘發(fā)加重或使哮喘難以控制的因素；（3）在過去1年中需要使用第4級或第5級哮喘藥物治療以防止變成為“未控制”哮喘，或即使在上述治療下仍表現(xiàn)為“未控制”哮喘。輕中度哮喘：（1）符合我國兒童哮喘防治指南中哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）使用第3級或以下哮喘藥物治療能達到良好控制的哮喘。

排除標(biāo)準(zhǔn) 兩組均排除以下兒童：（1）存在未控制的胃食管反流、睡眠呼吸暫停、鼻竇炎、心理疾病等共存疾?。唬?）患有遺傳代謝病、先天性心臟病等基礎(chǔ)疾??；（3）無法配合完成肺通氣功能和呼出氣一氧化氮（fractional exhaled nitric oxide，F(xiàn)eNO）檢測；（4）家屬拒絕提供臨床信息及血液樣本。

臨床資料收集與樣本采集在哮喘兒童接受規(guī)范化管理和治療12個月后，哮喘專科醫(yī)師根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)納入重癥哮喘兒童，收集患兒血常規(guī)、肺通氣功能、FeNO、外周血嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)（eosinophils，EOS）等臨床資料，同時采集重癥哮喘兒童空腹靜脈血1 mL。重癥哮喘兒童納入后，?？漆t(yī)師在哮喘專病數(shù)據(jù)庫中根據(jù)年齡、性別，1∶1匹配輕中度哮喘兒童，并收集相同的臨床信息和靜脈血標(biāo)本。所有血漿樣本均于2 h內(nèi)以3 000×g速度離心10 min，留取血漿上清液，凍存于-80 ℃冰箱，用于代謝組學(xué)分析。

試劑與儀器甲醇、乙腈、異丙醇、水等均為色譜純，氯仿為分析純（均購自美國Thermo Fisher公司）。高分辨質(zhì)譜儀（QE plus）、高效液相色譜儀（Dionex U3000）均購自美國Thermo Fisher公司，色譜柱購自美國Waters公司ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）。

血漿代謝分子水平檢測委托上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技公司檢測。

脂質(zhì)提取 從-80 ℃取出血漿，取100 μL上清液，加入10 μL內(nèi)標(biāo)（L-2-氯苯丙氨酸）和300 μL氯仿-甲醇（體積2∶1），渦旋震蕩30 s，靜置30 min后離心（12 000 r/min，離心半徑178.6 mm，4 ℃，10 min，后續(xù)離心條件相同）。取出200 μL下層氯仿裝入新的離心管。在剩余液體中加入200 μL氯仿-甲醇（體積2∶1），超聲提取10 min，離心后再次取出200 μL下層氯仿，加入上一步新的離心管中，進行揮干。揮干后的殘渣用200 μL異丙醇-甲醇（體積1∶1）復(fù)溶，離心后留取150 μL上清用于LC-MS分析。

LC-MS檢測 柱溫：55 ℃；流動相A由乙晴和水（體積6∶4，包含10 mmol/L乙酸銨）組成，流動相B由異丙醇和乙晴（體積9∶1，包含10 mmol/L乙酸銨）組成；流速為0.26 mL/min；進樣5 μL。洗脫梯度：1～15 min，68%流動相A和32%流動相B；15～18 min，3%流動相A和97%流動相B；18～21 min，68%流動相A和32%流動相B。質(zhì)譜參數(shù)：采集范圍100～1 200m/z，電壓3.8（+）/3.8（-） KV，離子源溫度和脫溶劑氣溫為350 ℃。霧化脫溶氣體為氮氣。

統(tǒng)計學(xué)處理臨床資料數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件進行分析。正態(tài)分布的計量資料采用描述，偏態(tài)分布的計量資料采用M（Q1，Q3）描述，計數(shù)資料以率（%）描述，分別采用t檢驗、Mann-Whitney U檢驗和χ2檢驗進行兩組組間比較。脂質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)采用LipidSearch對原始數(shù)據(jù)進行峰識別、峰提取、脂質(zhì)鑒定等預(yù)處理。處理后通過主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘判別分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）和正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLSDA）進行多元統(tǒng)計分析，并進行置換檢驗。根據(jù)變量權(quán)重值（variable importance in projection，VIP）＞1，篩選組間有差異的脂質(zhì)分子。選取P＜0.05且VIP＞1的脂質(zhì)進行代謝通路富集分析。利用變異倍數(shù)（fold change，F(xiàn)C）＞2和P＜0.05篩選顯著差異的特征脂質(zhì)分子。通過受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估臨床指標(biāo)與顯著差異代謝分子的預(yù)測價值。

結(jié) 果

一般資料共納入104例研究對象：重癥哮喘組50例，其中男性34例（68.0%），年齡（8.8±2.6）歲；輕中度哮喘54例，其中男性38例（70.4%），年齡（8.4±2.8）歲。兩組間年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.075，0.422，表1）。

表1 重癥哮喘組與輕中度哮喘組臨床資料比較Tab 1 Clinical characteristics of severe asthma and mild-to-moderate asthma ［n（%） or or M（Q1，Q3）］

表1 重癥哮喘組與輕中度哮喘組臨床資料比較Tab 1 Clinical characteristics of severe asthma and mild-to-moderate asthma ［n（%） or or M（Q1，Q3）］

BMI： Body mass index； compared with growth charts for children who are the same age and sex， healthy weight is a BMI between the 5th to the 85th percentile， overweight is a BMI between the 85th percentile and the 95th percentile， obesity is a BMI in the 95th percentile or above. C-ACT：Childhood asthma control test. EOS： Eosinophils； FeNO： Fractional exhaled nitric oxide； FEV1： Forced expiratory volume in 1 second； FVC：Forced vital capacity； PEF： Peak expiratory flow； FEF25： Forced expiratory flow at 25% of the pulmonary volume； FEF50： Forced expiratory flow at 50% of the pulmonary volume； FEF75： Forced expiratory flow at 75% of the pulmonary volume； MMEF： Forced expiratory flow at 25%-75% of the pulmonary volume.

Severe asthma （n=50）Mild-to-moderate asthma （n=54）Variable Sex Male Female Age （y）BMI ［kg/m2］Healthy weight Overweight Obesity C-ACT scores Course of asthma （y）EOS count （n/μL）EOS percentage FeNO （ppb）% Predicted FVC% Predicted FEV1 FEV1/FVC ratio% Predicted PEF% Predicted FEF25% Predicted FEF50% Predicted FEF75% Predicted MMEF t/z/χ2 0.259 P 0.796 34 （68.0）16 （32.0）8.8±2.6 38 （70.4）16 （29.6）8.4±2.8 0.471 6.793 0.639 0.033＜0.001＜0.001 0.029 0.023 0.051 0.862 0.079 0.003 0.670 0.056 0.005 0.005 0.003 18 （36.0）13 （26.0）19 （38.0）19.26±2.00 3.76±2.96 325 （202， 502）4.65 （2.93，7.63）25 （10， 39）96.29±14.56 94.62 （85.27，105.07）83.65±7.11 89.73±17.08 85.88±20.59 75.18±23.79 65.43±23.51 74.16±22.11 33 （61.1）10 （18.5）11 （20.4）23.70±3.09 1.16±1.00 157.5 （230， 372）2.95 （1.80， 6.25）17 （9， 24）96.75±12.71 102.17 （90.43，112.88）87.97±7.40 91.27±19.54 93.88±21.51 88.54±23.23 81.12±30.96 88.45±24.77-1.870-5.878-2.186-2.271-1.954-0.174-1.757-3.029-0.427-1.935-2.899-2.892-3.095

重癥哮喘和輕中度哮喘臨床指標(biāo)比較與輕中度哮喘相比，重癥哮喘兒童肥胖比例更高、CACT評分更低、哮喘病程更長（P=0.033，＜0.001，＜0.001）。實驗室檢測中，重癥哮喘組EOS計數(shù)、EOS百分比均高于輕中度哮喘組（P=0.029，0.023）。肺通氣功能檢測中，重癥哮喘組FEV1/FVC、FEF50%預(yù)計值、FEF75%預(yù)計值及MMEF%預(yù)計值均低于輕中度哮喘組（P=0.003，0.005，0.005，0.003）；以上差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（表1）。

重癥哮喘和輕中度哮喘的脂質(zhì)分子差異比較脂質(zhì)組學(xué)PCA圖顯示，重癥哮喘組和輕中度哮喘組血漿分離趨勢不明顯（圖1A），進一步采用PLS-DA模型分析，結(jié)果顯示兩組分離趨勢明顯（圖1B）。在PLS-DA的基礎(chǔ)上，通過OPLS-DA模型去除噪音，結(jié)果顯示兩組的分離趨勢進一步明顯（圖1C）。對OPLS-DA模型進行置換驗證（R2=0.0476，Q2=-0.489），顯示OPLS-DA模型未過擬合（圖1D），提示模型穩(wěn)健，可成功區(qū)分兩組樣本。

圖1 重癥哮喘組與輕中度哮喘組兒童脂質(zhì)組學(xué)多元統(tǒng)計分析Fig 1 Multiple statistical analysis of plasma metabolic profiling in children with severe asthma and mild-to-moderate asthma

差異脂質(zhì)分子篩選與聚類分析基于LC-MS法對全部血漿樣本進行非靶向脂質(zhì)檢測，共篩選出1 578個差異代謝分子。以VIP＞1、P＜0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，得到差異脂質(zhì)39個，歸屬于6個亞類。與輕中度哮喘相比，重癥哮喘組中表達上調(diào)的29個，下調(diào)的10個。在這39種差異脂質(zhì)中選取VIP＞1的前20名的表達量對兩組樣本進行層次聚類。結(jié)果顯示（圖2），與輕中度哮喘組相比，重癥哮喘組有8種磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine，PC）、5種鞘磷脂（sphingomyelin，SM）、1種磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）、1種磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine，PS）、1種磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol，PI）顯著性上調(diào)；3種溶血磷脂酰膽堿（lysophosphatidylcholine，LPC）、1種磷脂酰乙醇胺顯著性下調(diào)。其中，在兩組間有顯著差異（FC＞2，P＜0.05）的脂質(zhì)分子為PS（40∶2）和PE（47∶10），均在重癥哮喘中表達下調(diào)。

圖2 重癥哮喘組與輕中度哮喘組VIP前20種脂質(zhì)熱圖比較Fig 2 The heat map of relative abundance of VIP-top 20 plasma lipid species in severe asthma group and mild-to-moderate asthma group

差異脂質(zhì)分子代謝通路富集分析采用京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路數(shù)據(jù)庫對以上20種差異脂質(zhì)分子進行代謝通路富集分析，結(jié)果顯示重癥哮喘組中受干擾的通路有膽堿代謝、甘油磷脂代謝、逆行內(nèi)源性大麻素信號、亞油酸代謝、α亞油酸代謝和花生四烯酸代謝（表2）。

表2 代謝通路富集分析結(jié)果Tab 2 Relevant metabolic pathways were analyzed by KEGG

受試者工作特征（ROC）曲線分析將兩組間有統(tǒng)計學(xué)意義的6個差異臨床指標(biāo)（EOS、EOS%、FEV1/FVC、FEF50%預(yù)計值、FEF75%預(yù)計值、MMEF%預(yù)計值）作為基線，進行ROC曲線評估。并將可能具有診斷潛力的脂質(zhì)分子PE（47∶10）和PS（40∶2）分別與基線進行聯(lián)合ROC曲線分析。結(jié)果顯示，基線、基線聯(lián)合PE（47∶10）和基線聯(lián)合PS（40∶2）的曲線下面積分別是0.737（95%CI：0.640～0.834）、0.928（95%CI：0.851～1.000）和0.923（95%CI：0.863～0.983）（圖3）。提示臨床指標(biāo)聯(lián)合顯著差異脂質(zhì)分子PE（47∶10）或PS（40∶2）后，均能提高對重癥哮喘兒童的診斷準(zhǔn)確度。

圖3 PE（47∶10）和PS（40∶2）用于鑒別重癥哮喘和輕中度哮喘兒童的受試者工作特征曲線分析Fig 3 Receiver operating characteristic curves analysis of lipid species PE（47∶10）and PS（40∶2） in discriminating children with severe asthma and mild-to-moderate-asthma

討 論

研究發(fā)現(xiàn)不同表型的哮喘患者體內(nèi)代謝模式有所區(qū)別。脂質(zhì)通過炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等參與哮喘的發(fā)展，影響哮喘的結(jié)局，越來越多地引起了人們的關(guān)注［17-19］。近來國外研究發(fā)現(xiàn)花生四烯酸與亞油酸代謝在兒童哮喘的控制中發(fā)揮重要作用，且可用脂質(zhì)代謝預(yù)測未控制的哮喘［13］。本研究應(yīng)用脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)對50例重癥哮喘和54例輕中度哮喘兒童的血漿進行了檢測，探討了不同哮喘的脂質(zhì)差異，發(fā)現(xiàn)39個主要差異脂質(zhì)分子。差異的脂質(zhì)成分主要為PC、SM、PE、PS、PI和LPC 6類，代謝通路富集分析顯示膽堿代謝紊亂最為顯著。

在本項研究中，我們分析了重癥和輕中度哮喘兒童的臨床指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)重癥哮喘兒童BMI更高、病程更長。既往研究揭示肥胖顯著影響兒童哮喘的藥物治療敏感性。Reyes-Angel等［20］發(fā)現(xiàn)超重肥胖的哮喘兒童對吸入性糖皮質(zhì)激素藥物治療的反應(yīng)性更差。Bapat等［21］在肥胖的哮喘小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)更多地轉(zhuǎn)化為Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥類型，從而導(dǎo)致小鼠炎癥反應(yīng)加重和藥物耐受。與過往研究一致，本研究中發(fā)現(xiàn)與輕中度哮喘兒童相比，重癥哮喘兒童BMI更高，進而可能加劇了重癥哮喘對激素不敏感。

重癥哮喘的代謝組學(xué)研究對于早期發(fā)現(xiàn)代謝標(biāo)志物、預(yù)測治療反應(yīng)和指導(dǎo)個體化靶向治療具有重要價值［22-23］，但目前重癥哮喘代謝組學(xué)的相關(guān)研究較少，重癥哮喘早期代謝標(biāo)志物的意義尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)了不同嚴(yán)重程度哮喘存在血漿脂質(zhì)代謝差異，并且以膽堿代謝紊亂最為顯著。膽堿是一種人體必需的營養(yǎng)素，可轉(zhuǎn)化為S-腺苷甲硫氨酸、乙酰膽堿等作為甲基供體參與神經(jīng)活動。隊列研究發(fā)現(xiàn)，哮喘患者補充膽堿6個月，可顯著降低氣道阻力、EOS百分比、總IgE水平，以及IL-4、IL-5、TNF-α水平［24］，提示大劑量補充膽堿可以抑制哮喘患者體內(nèi)炎癥和氧化應(yīng)激。但是，Columbo等［25］發(fā)現(xiàn)，老年哮喘患者在補充膽堿6周后，肺通氣功能、外周血EOS百分比、總IgE水平和ACT得分無明顯改變。因此，膽堿在哮喘中的作用尚需更多研究來驗證。

同時，我們發(fā)現(xiàn)EOS、EOS%、FEV1/FVC、FEF50%預(yù)計值、FEF75%預(yù)計值、MMEF%預(yù)計值在重癥和輕中度哮喘兒童間有差異，并以此為ROC曲線分析的基線。ROC曲線分析結(jié)果顯示，差異脂質(zhì)中變異倍數(shù)最大的PS（40∶2）和PE（47∶10）的AUC、靈敏度和特異性均高于基線，提示PE（47∶10）和PS（40∶2）可能是重癥哮喘診斷的潛在生物標(biāo)志物。

PE是體內(nèi)含量豐富的甘油磷脂，廣泛參與多種生命過程，如促進氧化磷酸化、自噬、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、促進鐵沉積等［26-27］。研究發(fā)現(xiàn)，成人女性哮喘患者血清中PE含量高于男性哮喘患者［28］；在健康成人、輕度哮喘和中度哮喘中，PE（38∶1）、PE（18∶1p/22∶6）和PE（20∶0/18∶1）的水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與正常健康人群相比，哮喘患者體內(nèi)PE水平顯著升高，且PE表達水平與哮喘的嚴(yán)重程度、IgE水平呈正相關(guān)［29］；同樣，動物實驗中發(fā)現(xiàn)氣道阻力明顯上升的小鼠支氣管肺泡灌洗液中PE水平顯著升高，提示PE與氣道阻力正相關(guān)［30］。值得注意的是，研究揭示吸煙、感染等哮喘危險因素可降低GPX4活性，從而通過增加脂質(zhì)過氧化導(dǎo)致磷脂氧體的結(jié)構(gòu)和功能平衡改變，導(dǎo)致上皮細(xì)胞功能障礙甚至鐵死亡［31］，而PE作為細(xì)胞膜的主要成分，其解離程度與細(xì)胞發(fā)生鐵死亡的比例正相關(guān)［27］。因此，這在一定程度上提示PE與哮喘的發(fā)生密切相關(guān)，但PE（47∶10）與重癥哮喘的關(guān)聯(lián)機制仍需進一步探討。

PS可以由PE在磷脂酰乙醇胺絲氨酸轉(zhuǎn)移酶的作用下生成，并在生物酶生成和激活過程中扮演關(guān)鍵角色［32-33］。研究發(fā)現(xiàn)，PS是唯一與T細(xì)胞免疫球蛋白和黏蛋白域（T cell immunoglobulin domain and mucin domain，TIM）受體結(jié)合的非蛋白分子［34］。而TIM是哮喘和過敏的重要易感基因，優(yōu)先表達于Th2細(xì)胞，并作為有效共刺激分子激活T細(xì)胞。進一步在小鼠實驗中發(fā)現(xiàn)，TIM高表達與Th2細(xì)胞比例、氣道炎癥程度和氣道高反應(yīng)性正相關(guān)［35］，同時Goth等［36］發(fā)現(xiàn)PS特異性地促進了蛋白質(zhì)抗原誘導(dǎo)的大鼠肥大細(xì)胞釋放組胺，從而誘導(dǎo)氣道平滑肌痙攣。因此，我們猜測PS（40∶2）可能通過與TIM結(jié)合，促進肥大細(xì)胞釋放組胺和Th2型炎癥發(fā)生，從而導(dǎo)致重癥哮喘，然而這需要進一步體內(nèi)外研究進行論證。

本研究初步探究了國內(nèi)重癥哮喘和輕中度哮喘兒童血漿脂質(zhì)代謝差異，發(fā)現(xiàn)相關(guān)差異表達脂質(zhì)分子。本研究也具有一定的局限性：首先，重癥哮喘組與輕中度哮喘組兒童治療用藥存在不同，尤其吸入糖皮質(zhì)激素劑量及療程不同可能在一定程度上影響代謝組學(xué)。雖然既往Picado等［37］、Sparreman等［17］的研究提示激素治療本身對患者血漿脂類代謝、蛋白組學(xué)可能影響較小，但相關(guān)研究不多且尚無明確結(jié)論。其次，單次代謝組學(xué)檢測提供的是靜態(tài)的代謝分子豐度信息，而哮喘是一個慢性炎癥性疾病，機體代謝處于動態(tài)變化中，并受飲食模式等多種因素的影響，因此無法完全展示重癥哮喘兒童體內(nèi)代謝情況。此外，本研究僅探究了重癥哮喘兒童的差異代謝分子，尚未對發(fā)現(xiàn)的差異代謝分子進行靶向驗證。因此，需要在本研究的基礎(chǔ)上進行前瞻性研究，通過進一步擴大樣本量、靶向代謝檢測等深入探討代謝分子在重癥哮喘發(fā)生發(fā)展中的作用。

綜上所述，本研究通過脂質(zhì)組學(xué)檢測，初步探究了國內(nèi)重癥哮喘和輕中度哮喘兒童血漿脂質(zhì)代謝差異。通過代謝通路富集分析發(fā)現(xiàn)差異脂質(zhì)分子主要集中在膽堿代謝通路，并將變異倍數(shù)最大的PE（47∶10）和PS（40∶2）與臨床指標(biāo)聯(lián)合分析，可提高對重癥哮喘的診斷。在后續(xù)的研究中，可通過擴大樣本量、聯(lián)合多組學(xué)等進行更深入地探索重癥哮喘的發(fā)病機制，為重癥哮喘的診斷和治療提供新的思路。

作者貢獻聲明鄭紅梅 實驗設(shè)計與研究，數(shù)據(jù)分析和論文撰寫。溫亞錦 實驗研究，數(shù)據(jù)分析，論文撰寫。韓曉 實驗設(shè)計，論文修訂。馮瑞研究咨詢，數(shù)據(jù)分析。劉麗娟 數(shù)據(jù)分析，論文修訂。陳仁杰 數(shù)據(jù)分析。李小玲，金婷婷 文獻調(diào)研與整理。周玉峰 研究設(shè)計，可行性分析。張曉波 研究設(shè)計，監(jiān)督指導(dǎo)，論文修訂。

利益沖突聲明所有作者均聲明不存在利益沖突。