吳福林 吳偉樂斯

(1內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院胸外科,內(nèi)蒙古 通遼 028000;2內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院)

肺癌是呼吸系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,在全球惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率中位居首位〔1,2〕。肺癌一般可分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌,其中非小細(xì)胞肺癌是肺癌的常見類型,還包括鱗癌、腺癌和大細(xì)胞癌,占肺癌80%以上〔3,4〕。目前非小細(xì)胞肺癌發(fā)病機(jī)制尚不清楚,其首選治療方案是手術(shù)治療,胸腔鏡微創(chuàng)因其創(chuàng)口美觀、損傷小、恢復(fù)快等優(yōu)勢(shì)已逐步取代開胸術(shù)式。提高患者術(shù)后生存率,術(shù)后治療、預(yù)測(cè)預(yù)后及防止復(fù)發(fā)是關(guān)鍵〔5〕。本文通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者癌及癌旁組織和血清中癌基因紡錘體與著絲粒相關(guān)蛋白(SKA)3、TP酶激活蛋白SH3結(jié)合蛋白(G3BP)2和Prospero相關(guān)同源異形盒蛋白(PROX)1的表達(dá)及分析其與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系,探尋非小細(xì)胞肺癌治療的靶點(diǎn)及預(yù)測(cè)預(yù)后和復(fù)發(fā)的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2019年10月至2022年8月內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院行微創(chuàng)手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者102例,其中男65例,女37例;平均年齡(68.25±3.19)歲。

1.2入選標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)后經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)確診為原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌,術(shù)中清掃淋巴結(jié);②年齡≥65歲,可自行簽署知情同意書;③均行單孔微創(chuàng)切除術(shù),入院前未接受放化療治療。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有嚴(yán)重心、肝、腎功能不全及腦、血液系統(tǒng)等疾病;②伴有其他原發(fā)性腫瘤或自身免疫性疾病;③伴有精神系統(tǒng)疾病或自我認(rèn)知能力障礙。

1.3試劑和儀器設(shè)備 抗人的癌基因紡錘體與著絲粒相關(guān)蛋白(SKA)3、TP酶激活蛋白SH3結(jié)合蛋白(G3BP)2和Prospero相關(guān)同源異形盒蛋白(PROX)1酶聯(lián)免疫試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供;抗人一抗SKA3、G3BP2、PROX1由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供;鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)和顯色試劑盒由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供;bioteck酶標(biāo)儀(美國);Liaca石蠟切片機(jī)(德國)。

1.4非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)前后血清中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白含量檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),手術(shù)前清晨空腹和術(shù)后7 d清晨空腹抽取靜脈血5 ml,3 000 r/min離心10 min后,留取上層血清液氮保存,待檢測(cè)。

1.5非小細(xì)胞肺癌患者癌和癌旁組織中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度檢測(cè) 取非小細(xì)胞肺癌患者癌和癌旁組織,甲醛溶液固定、脫水和包埋,制備3 μm的病理切片3張,采用SP免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行染色,染色結(jié)果通過Motic Images Advanced3.2圖像分析軟件測(cè)定光密度(OD)值,OD值越大陽性表達(dá)越強(qiáng),反之越弱。

1.6癌組織中SKA3、G3BP2、PROX1的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系 分析SKA3、G3BP2、PROX1表達(dá)陽性率與患者組織學(xué)分型、病理分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,計(jì)量資料均符合正態(tài)分布,組間采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)前后血清中SKA3、G3BP2、PROX1蛋白含量的比較 與術(shù)前比較,術(shù)后非小細(xì)胞肺癌患者血清中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白含量均顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)前后SKA3、G3BP2、PROX1蛋白血清中含量及癌和癌旁組織陽性表達(dá)強(qiáng)度的比較

2.2非小細(xì)胞肺癌患者癌和癌旁組織中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度的比較 非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度明顯高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

2.3SKA3、G3BP2、PROX1的陽性表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征關(guān)系 不同組織學(xué)分型的非小細(xì)胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);不同病理分型、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且陽性表達(dá)隨病理分級(jí)越低、臨床分期越高及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有增高趨勢(shì)。見表2。

表2 SKA3、G3BP2、PROX1陽性表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

肺癌是全球腫瘤死亡的主要原因之一,也是致死率最高的惡性腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌占 85% 以上,治療以手術(shù)切除為主,但大部分患者術(shù)后轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后不良〔6,7〕。近年針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的特異性靶向治療取得了較大進(jìn)展〔8～11〕,對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的全基因組篩查為不同分子分型的患者提供了個(gè)體化醫(yī)學(xué)的個(gè)體化用藥的治療機(jī)會(huì),因此尋找非小細(xì)胞肺癌的新的治療靶向基因、預(yù)測(cè)預(yù)后和復(fù)發(fā)的基因是當(dāng)下醫(yī)學(xué)研究熱點(diǎn)。

SKA3位于人類13q號(hào)染色體,是線粒體外層子單元SKA復(fù)合物,直接介導(dǎo)染色體兩側(cè)動(dòng)粒與微管、染色體的分離與分裂及調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖與凋亡,在肝、甲狀腺、結(jié)直腸癌等腫瘤的增殖、侵襲、惡化和轉(zhuǎn)移中高表達(dá)〔12,13〕。PROX1位于人類1q32號(hào)染色體,介導(dǎo)細(xì)胞分化、器官發(fā)育、促進(jìn)淋巴管的生成,是具有高度保守性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,主要表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞,參與新生毛細(xì)血管的生成,從而促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲及淋巴轉(zhuǎn)移〔14,15〕。G3BP2位于人類4號(hào)染色體,是RNA結(jié)合蛋白家族中Ras GAP SH3結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合蛋白,在食管癌、膀胱癌等腫瘤中高表達(dá),亦參與腫瘤的生長(zhǎng)、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移〔16,17〕。

綜上,SKA3、G3BP2、PROX1蛋白在肺癌發(fā)生及病情進(jìn)展中均發(fā)揮重要作用,能夠影響非小細(xì)胞肺癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后,SKA3、G3BP2、PROX1可作為關(guān)鍵分子標(biāo)記物,有望成為非小細(xì)胞肺癌治療的靶點(diǎn)及預(yù)測(cè)預(yù)后和復(fù)發(fā)的指標(biāo),為臨床應(yīng)用靶向基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。