洪明鳳

（廈門科威生物技術(shù)有限公司，福建 廈門 361000）

糞便隱血試驗(yàn)是臨床消化道出血性疾病常用診斷方法，可將消化道腫瘤等疾病有效篩查，當(dāng)上消化道出血量較少時(shí)，外觀表現(xiàn)無異常改變，且肉眼不能辨認(rèn)，因此對(duì)于疑似上消化道出血患者需要予以糞便隱血檢查。通常情況下，將聯(lián)苯胺作為檢測(cè)試劑，由于血紅蛋白中的鐵具有過氧化酶作用，可對(duì)過氧化氫中進(jìn)行分解，并釋放出氧，將聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，并形成藍(lán)色特征，即可檢測(cè)為陽性。并可根據(jù)顏色變化速度及深度將陽性結(jié)果進(jìn)行區(qū)分，包括弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性。

但是此種檢測(cè)方法缺乏特異性，且假陽性率較高，會(huì)受到多種因素的干擾，影響最終檢測(cè)結(jié)果，因此現(xiàn)階段該種檢測(cè)方法未得到廣泛應(yīng)用。免疫學(xué)方法中包括多種方法，如膠體金法、免疫斑點(diǎn)法、酶聯(lián)免疫法等，其中膠體金法的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)較為突出，具有快速、便捷、經(jīng)濟(jì)、干擾少、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，被各大醫(yī)院廣泛應(yīng)用。但在實(shí)際應(yīng)用中，會(huì)存在假陰性結(jié)果，需要對(duì)其綜合分析，判斷該檢測(cè)方法的診斷效能及應(yīng)用價(jià)值?；诖耍?00例住院患者為研究觀察對(duì)象，意在分析膠體金法在檢測(cè)糞便隱血中的應(yīng)用效果，具體報(bào)告下述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取某院收治的住院患者200例，收治時(shí)間（2021年4月～2022年5月）。其中包括消化道出血者50例、潰瘍性結(jié)腸炎患者50例、胃潰瘍患者50例、胃炎患者50例，其中男性患者為120例，女性患者為80例，其年齡集中在37～74歲，均值（61.52±1.65）歲。此次研究不違背醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)，納入患者均對(duì)研究?jī)?nèi)容知情。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者接受醫(yī)學(xué)診斷；②患者資料完整；③同意醫(yī)學(xué)觀察。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝腎功能障礙者；②合并凝血功能障礙者；③認(rèn)知/交流/精神障礙；④傳染性疾?。虎莺喜⒛[瘤/癌癥；⑥資料缺失。

1.2 方法

對(duì)所有受檢者行糞便隱血檢測(cè)。

聯(lián)苯胺法檢測(cè)：選擇1%聯(lián)苯胺冰醋酸試劑，其中將110 g聯(lián)苯胺與50%冰醋酸混合，至10 mL，待其充分溶解，并置入棕色瓶中保存。另選擇3%過氧化氫溶液，其制備方法為將10 mL30%過氧化氫溶液與蒸餾水混合，至100 mL，并置入棕色瓶中保存。在鄰甲苯胺法檢測(cè)操作中需按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》中的相關(guān)要求進(jìn)行實(shí)施，并注意檢測(cè)相關(guān)注意事項(xiàng)。

膠體金法檢測(cè)：選擇檢測(cè)試劑由艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司提供，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為 YZB/浙2476-2012，確保試驗(yàn)在試劑有效期內(nèi)使用。檢測(cè)原理為：利用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上檢測(cè)區(qū)（T）的抗人血紅蛋白和質(zhì)量控制區(qū)（C ）的相應(yīng)抗體。試劑測(cè)試中，需將試劑插入樣本中，并在毛細(xì)效應(yīng)作用下向上層析，若樣本中含人血紅蛋白則判定為陽性，其檢測(cè)區(qū)中出現(xiàn)一條紫紅色條帶。若樣本中無人血紅蛋白則為陰性，其檢測(cè)區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶。但無論人血紅蛋白是否處于樣本中，質(zhì)量控制區(qū)（C）中均會(huì)呈現(xiàn)出一條紫紅色帶。質(zhì)量控制區(qū)中呈現(xiàn)出的紫紅色條帶可用于判斷樣本是否充足，在層析過程中是否為正常的標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，也可作為試劑中內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。在操作方法中，需要向檢測(cè)管中加入0.5 mL蒸餾水，并用試管在糞便樣本的不同部位取出糞便（火柴頭大?。?，放置于檢測(cè)管中充分混合均勻，并將試紙條插入試管中，維持5 s，在5 min后讀取結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率，并對(duì)比兩組檢查方式的診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 臨床診斷結(jié)果

200例住院患者中，經(jīng)臨床檢驗(yàn)診斷確診陽性為135例，占比67.50%。

2.2 聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率

鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法陽性檢出率為55.00%，免疫膠體金法陽性檢出率為66.00%，免疫膠體金法陽性檢出率高于鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率比較[n（%）]

2.3 陽性患者疾病分布

聯(lián)苯胺法陽性檢查中，包括消化道出血38例，占比76.00%；潰瘍性結(jié)腸炎35例，占比55.00%；胃潰瘍22例，占比44.00%；胃炎15例，占比30.00%。聯(lián)苯胺法陽性檢查中，包括消化道出血42例，占比84.00%；潰瘍性結(jié)腸炎37例，占比74.00%；胃潰瘍30例，占比60.00%；胃炎23例，占比54.00%。見表2。

表2 聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率比較[n（%）]

2.4 診斷效能比較

靈敏度、特異度、診斷符合率數(shù)據(jù)比較，鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法檢查效能81.48%、86.15%、83.00%；免疫膠體金法檢查效能：97.78%、95.38%、97.00%，靈敏度、特異度、診斷符合率均是免疫膠體金法檢出效能更加理想（P＜0.05）。見表3，表4，表5。

表3 鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法檢出情況

表4 免疫膠體金法檢出情況

表5 兩種檢查方式診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度比較

3 討論

糞便隱血檢查也稱為便潛血試驗(yàn)，對(duì)于上消化道出血等疾病患者來說，可通過糞便隱血檢查明確疾病，并對(duì)消化道惡性腫瘤進(jìn)行篩查，具有重要的臨床參考價(jià)值。且在相關(guān)數(shù)據(jù)研究統(tǒng)計(jì)中，消化性潰瘍的陽性率在40%～70%范圍內(nèi)，并呈現(xiàn)出間斷陽性。而一些消化道癌癥如肺癌的糞便隱血陽性檢出率可高達(dá)95%，同時(shí)對(duì)于其他多種疾病導(dǎo)致的消化道出血患者來說，在糞便隱血檢查中，均會(huì)呈現(xiàn)出陽性反應(yīng)。因此，糞便隱血檢查在臨床診療中具有重要意義，需要提高該檢查結(jié)果準(zhǔn)確性，為患者治療提供有力依據(jù)。需要找到一種敏感性高，特異性強(qiáng)的檢驗(yàn)方法，在糞便隱血檢驗(yàn)中發(fā)揮作用。其中包括鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法及免疫膠體金法等，不同檢測(cè)方法的操作要求及注意事項(xiàng)均有所不同，且得到的檢驗(yàn)結(jié)果也存在差異。

膠體金法是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，其示蹤標(biāo)志物為膠體金，將其應(yīng)用于抗原抗體檢測(cè)中，是一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。其優(yōu)勢(shì)明顯，特點(diǎn)顯著，近年來在各種生物學(xué)中被廣泛應(yīng)用，臨床利用免疫印跡技術(shù)均會(huì)使用膠體金標(biāo)記，并且會(huì)用于流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)及生物芯片中。需要將特異的抗體固定于酸類纖維素膜的某區(qū)帶中，并在干燥的酸類纖維素一端浸入樣品后，受到毛細(xì)管的作用，使得樣品沿著該膜向前移動(dòng)，在移動(dòng)至固定抗體區(qū)域后，樣品中相應(yīng)抗原會(huì)與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合。同時(shí)，利用金粒的高電子密度的特性，可在金標(biāo)蛋白結(jié)合位置，當(dāng)標(biāo)志物在相應(yīng)配體位置大量聚集時(shí)，會(huì)出現(xiàn)明顯的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)呈現(xiàn)紅色，肉眼清晰可見，如圖1。

圖1 膠體金法檢測(cè)

在試劑制備中，需要確保其生產(chǎn)快速且精確，其要點(diǎn)在于運(yùn)用到的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的靈敏性及特異性等是否會(huì)達(dá)到最高標(biāo)準(zhǔn)。而鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法的檢測(cè)原理則不同，主要基于一些過氧化物活性的亞鐵血紅素中，可將過氧化氫進(jìn)行還原，并形成水，將無色的供氧體鄰-甲苯胺氧化成藍(lán)色的鄰-甲偶氮苯，但是會(huì)受到多種藥物、食品等因素的影響產(chǎn)生假陽性的檢測(cè)結(jié)果，并影響最終檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。而免疫膠體金法則不會(huì)受到相關(guān)因素的干擾。

研究對(duì)200例住院患者進(jìn)行糞便隱血檢測(cè)，分別實(shí)施鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法和免疫膠體金法，免疫膠體金法陽性檢出率高于鄰甲聯(lián)苯胺化學(xué)法（P＜0.05）；靈敏度、特異度、診斷符合率均是免疫膠體金法檢出效能更加理想（P＜0.05）。結(jié)果提示，在糞便隱血樣本檢測(cè)中，選用免疫膠體金法檢測(cè)具有較高的診斷效能。但是在實(shí)際操作中也需明確細(xì)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)及注意事項(xiàng)，在實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需要注意，將原包裝袋中取出的試條需在1小時(shí)之內(nèi)盡快使用，并在使用時(shí)將試紙條與樣品稀釋液恢復(fù)至室溫20～30 ℃，而對(duì)于收集到的糞便樣本也需在30 min內(nèi)檢測(cè)。同時(shí)，在試紙條箭頭指向的一端浸入標(biāo)本溶液中，要避免超過標(biāo)記線，并當(dāng)紫紅色條帶顯現(xiàn)時(shí)，測(cè)試結(jié)果需在5 min內(nèi)讀取，而10 min后再讀取結(jié)果則無效。

4 結(jié)束語

免疫膠體金法在糞便隱血檢測(cè)中具有諸多優(yōu)勢(shì)，其靈敏度高、特異性強(qiáng)，不易受到多因素的干擾，操作簡(jiǎn)單、快捷，整體檢查效能較佳，值得臨床推廣應(yīng)用。