陳祖照

（南寧傲農(nóng)育種技術(shù)有限公司，廣西 隆安 532700）

雞白?。≒ullorum disease）于1899 年被發(fā)現(xiàn)并確認［1］，屬二級傳染病、寄生蟲病，是由雞白痢沙門氏菌（Salmonella pullorum）引起的一種細菌性傳染性疾病。該病在各地均有發(fā)生，是雞養(yǎng)殖戶常見疾病之一，也是危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴重的疾病之一。其傳播方式主要有兩種：水平傳播和垂直傳播。不同品種、不同日齡的雞均可有可能被感染，其中雛雞的感染率和死亡率最高。雞白痢高度適應(yīng)專一宿主的特點可引起雛雞的急性敗血癥［1］，因此雞白痢最早被命名為“雛雞致死性敗血癥”［2］，其臨床癥狀有：精神萎靡、食欲廢絕、雞毛雜亂、排白色糞便等。成雞通常呈慢性及隱性感染狀況，沒有明顯的臨床表現(xiàn)，但雞群死亡率及淘汰率大幅增加［3］。發(fā)病雞易擴散病原，導(dǎo)致感染率增加，且難以凈化。雞白痢嚴重影響家禽的生產(chǎn)性能和腸道健康，給家禽產(chǎn)業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。雖然通過實施群體凈化可有效控制雞白痢的傳播，但目前為止仍無法廣泛實施，究其原因是由于我國養(yǎng)禽業(yè)的硬件水平、生產(chǎn)條件還比較低［4］，家庭農(nóng)場數(shù)量多、飼養(yǎng)模式多樣化、管理水平參差不齊、淘汰陽性個體的策略成本過高。在未來很長的一段時間里，雞白痢仍會在全球范圍內(nèi)影響?zhàn)B雞業(yè)的發(fā)展，并嚴重阻礙我國家禽產(chǎn)業(yè)的高效、健康發(fā)展［5］。

噬菌體能夠感染細菌、真菌、藻類、放線菌或螺旋體等微生物［6］，其以細菌為宿主，專一殺滅病原菌。噬菌體作為細菌的天敵，在抗細菌感染領(lǐng)域具有天然的營養(yǎng)前景［7］。其作為感染細菌的病毒，天然具有抗細菌感染的作用。噬菌體在宿主的菌體內(nèi)繁殖速度快，感染一個細菌后可迅速復(fù)制出許多子代噬菌體，每個子代噬菌體與親代噬菌體具有相同的侵染、復(fù)制能力，從而發(fā)揮高效殺菌作用［6］。馬翠麗等［8］發(fā)現(xiàn)分離的18 株沙門氏菌中有17 株分離株對沙門氏菌噬菌體DS2 敏感，說明噬菌體可作為一種替抗添加劑，用于防治雞源沙門氏菌。本試驗所使用的噬菌體藥物是由嗜大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌和綠膿桿菌的噬菌體按一定比例混合而成的雞尾酒制劑。本研究旨在評估噬菌體藥物對雞白痢沙門氏菌的臨床治療效果并測試最佳的藥物濃度，為該藥的臨床使用提供數(shù)據(jù)支撐及理論指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 試驗動物

試驗對象為廣西某種雞場145 日齡廣西三黃雞。通過雞翅靜脈采血后，使用平板凝集方法進行雞白痢檢測，根據(jù)檢測結(jié)果隨機挑選部分陽性和陰性個體。分別在150 日齡和155 日齡再次進行雞白痢檢測，最終選取8 只雞白痢陰性雞和32 只雞白痢陽性雞作為試驗對象。

1.2 檢測試劑和藥物

雞白痢、雞傷寒多價染色平板凝集試驗抗原購自北京中海生物科技有限公司，噬菌體藥物購自武漢格瑞農(nóng)生物科技有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 雞白痢的檢測

無菌采集雞翅靜脈血，室溫下析出血清后收集血清置于1.5 mL 滅菌EP 離心管中，4℃保存?zhèn)溆?。參照劉洋等?］建立的檢測方法進行雞白痢檢測。取被檢血清和反應(yīng)抗原各50 μL 于新的離心管中，震蕩充分混合，2 min 內(nèi)判定結(jié)果，被檢血清和抗原發(fā)生50 %以上凝集反應(yīng)判定為陽性，不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的為陰性，介于二者之間的判定為可疑。

1.3.2 實驗分組

本試驗使用的藥物規(guī)格為1000 mL/瓶（4.0×106pfu/mL），推薦的治療劑量是每瓶（1000 mL）兌1000 L 水，三小時內(nèi)飲完，連用2-3 天，根據(jù)推薦劑量使用3 個藥物濃度，分別為：

低劑量組：1000 mL/1000 L×0.5=0.5 mL/L（ 2.0×106pfu/mL）

中劑量組：1000 mL/1000 L×1=1.0 mL/L（4.0×106pfu/mL）

高劑量組：1000 mL/1000 L×2=2.0 mL/L（8.0×106pfu/mL）

同時設(shè)一個健康對照組和一個感染對照組。將32 只雞白痢陽性母雞隨機分成4 組，每組8 只，其中3 組為給藥試驗組，1 組為沙門氏菌感染對照組。另取8 只雞白痢陰性母雞作為健康對照組。給藥組按中、高、低劑量連續(xù)給藥4 天，之后每隔一周按同樣劑量喂藥一次，試驗持續(xù)5 周。健康對照組和感染對照組只給清水，不添加任何藥物。根據(jù)日耗料量（80 g/只），耗料量×2 換算成飲水量，以此計算出所需噬菌體量。試驗動物分組及處理方法見表1。

表1 試驗動物分組及處理方法

1.3.3 藥物對體重的影響

試驗前先稱取重量，之后每周喂藥前都先稱量一次所有試驗雞的體重直至試驗結(jié)束，并計算各組的相對增重率，以觀察藥物對試驗雞體重的影響。

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

用Excel 軟件記錄數(shù)據(jù)，采用生物統(tǒng)計學方法檢驗，比較各組數(shù)據(jù)差異顯著性，數(shù)值以平均值±標準差（SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞白痢感染情況

采用雞白痢血清平板凝集試驗方法檢測145 日齡所有種雞群白痢感染情況。經(jīng)過三次檢測后，結(jié)果如表2 所示：該場母雞雞白痢陽性率為8.26%，公雞的雞白痢陽性率為1.97%，雞白痢感染情況比較嚴重，亟待推進雞白痢的凈化工作。

表2 雞白痢感染情況

2.2 藥物對雞體重的影響

將試驗用的32 只雞白痢陽性母雞和8 只雞白痢陰性母雞，分別于試驗前、中、后期按分組稱重，計算相對增重，結(jié)果見表3：以第1 組（健康對照組）作為參考組（100%），第2 組至5 組的相對增重率分別為90.99%、187.93%、151.36%、93.11%。第2 組（感染對照組）和第5 組（高劑量組）的相對增重率均低于第1 組（健康對照組），表明感染雞白痢沙門氏菌病后對機體的生長性能產(chǎn)生較大的影響，而高劑量組對雞白痢沙門氏菌病引起的雞體重下降沒有顯著改善作用。第3 組和第4 組的相對增重率均在150%以上，表明本試驗所使用的噬菌體制劑的低劑量、中劑量均可有效緩解由雞白痢沙門氏菌感染后引起的雞體重下降現(xiàn)象。

表3 體重變化統(tǒng)計

2.3 治療效果

通過對各組治療結(jié)果（圖1）分析可知，用藥第一和第二周，高劑量組的治療效果優(yōu)于中劑量組，而中劑量組的治療效果又優(yōu)于低劑量組；用藥第五周，三個藥物組的治愈率一致，均為25%（表4）。表明在前期使用高劑量噬菌體對雞白痢沙門氏菌病的治療效果最好，中劑量和低劑量次之，到后期三個藥物組均能發(fā)揮良好的治療作用。但高劑量和低劑量組均存在一例雞白痢抗原轉(zhuǎn)陰后又轉(zhuǎn)為陽性，然后再次轉(zhuǎn)陰性，表明高劑量和低劑量組的治療效果不穩(wěn)定。而中劑量組的治愈率是逐步增加且穩(wěn)定。綜上所述，在本試驗中，以中劑量1.25 mL/L 的治療效果最好。

圖1 治療結(jié)果

3 討論

在家禽產(chǎn)業(yè)中，雞白痢沙門氏菌病越來越普遍，且發(fā)病率較高。目前沒有禽沙門氏菌商品化疫苗批準上市，對該病的防治一般是依靠抗菌藥。抗生素是治療雞白痢沙門氏菌感染的主要手段，但抗生素的長期不合理使用，會導(dǎo)致細菌多重耐藥性、藥物殘留、食品安全及環(huán)境菌群不平衡等問題［10，11］。因此，家禽生產(chǎn)中上迫切需要一些安全、無副作用、無耐藥性和抗菌效果優(yōu)良的抗雞白痢沙門氏菌感染的藥物。因此，開發(fā)嗜沙門氏桿菌的噬菌體藥物具有重要意義。

噬菌體因其安全、有效、無耐藥性且不破壞機體內(nèi)體的菌群結(jié)構(gòu)，而被認為是優(yōu)良的抗生素替代品［12］。噬菌體雞尾酒制劑為多種具有不同功能的噬菌體的混合物，根據(jù)拓寬噬菌體的裂解譜、增強噬菌體的殺菌能力等目的人工合成［13］。為了研究噬菌體對雞白痢沙門氏菌病的治療效果，本研究使用不同劑量的噬菌體雞尾酒制劑來治療感染雞白痢沙門氏菌的陽性雞。結(jié)果顯示，中劑量組對雞白痢的治療效果比較穩(wěn)定，而高劑量組和低劑量組中均存在復(fù)陽個體，這可能是由于飼養(yǎng)環(huán)境中一直有病原菌存在，觀察時間周期較長，從而導(dǎo)致試驗雞出現(xiàn)二次感染。因此需提升養(yǎng)殖場的生物安全，加強消毒和滅鼠滅蠅等工作。另有研究表明：雛雞經(jīng)過噬菌體治療后，其存活率到達100%，治療效果顯著優(yōu)于阿莫西林和新霉素治療組［14］。趙虹澤［15］使用噬菌體評估對雞白痢沙門氏菌的治療效果及對盲腸菌群的影響，發(fā)現(xiàn)噬菌體能夠降低雛雞的發(fā)病率，緩解感染后導(dǎo)致的體重下降和被破環(huán)的腸道功能，且不影響腸道菌群。

在本試驗中，陽性對照組由于是被雞白痢沙門氏菌感染，因此平均增重低于健康對照組。使用低劑量和中劑量的噬菌體制劑后能夠緩解雞白痢沙門氏菌感染后的體重下降，有可能是添加的噬菌體制劑抑制甚至是殺滅體內(nèi)的雞白痢沙門氏菌，因而緩解了沙門氏菌對宿主的侵害。本試驗所使用的噬菌體藥物是一種混合制劑，不僅對沙門氏菌有作用效果，對大腸桿菌、葡萄球菌和綠膿桿菌也有效果。添加高劑量的制劑后，可能破壞機體內(nèi)的腸道菌群結(jié)構(gòu)，從而影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收。因此，添加高劑量的噬菌體制劑后雞群的平均增重反而低于健康對照組。也提示我們，任何飼料添加劑都應(yīng)在一個合理范圍內(nèi)，避免加重畜禽內(nèi)臟的負擔，甚至是出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。

在本試驗中，發(fā)現(xiàn)中劑量的效果是比較穩(wěn)定的，但治療率也只有25%。治療效果不是很理想，這個可能是與本次使用的噬菌體制劑存在一定的關(guān)系。本試驗中所使用的是噬菌體混合制劑，不但是對沙門氏菌有作用效果，對大腸桿菌、葡萄球菌和綠膿桿菌也同樣具有滅菌的作用，可能專門針對雞白痢沙門氏菌噬菌體數(shù)量不足，從而導(dǎo)致其效率不高；另外，所使用的噬菌體制劑可能存在種屬問題，對雞源的沙門氏菌作用不夠強。因此在本試驗中，所使用的噬菌體制劑效果沒有達到理想的狀態(tài)。這也給予了我們一些提示：對于新型藥物，先小范圍進行試用，在確認其效果優(yōu)良且對個體無毒害作用，即可進行大規(guī)模使用。

4 結(jié)論

在本試驗中，使用低劑量和中劑量的噬菌體制劑可有效緩解因感染雞白痢沙門氏菌后引起的體重下降現(xiàn)象；不同劑量的噬菌體制劑對雞白痢沙門氏菌病均有一定的治療效果，但中劑量（1.0 mL/L）的效果比較穩(wěn)定。因此，噬菌體制劑可應(yīng)用到家禽雞白痢沙門氏菌的防治應(yīng)用中，但其最佳防治劑量和制劑的配比仍需進一步研究。