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        微柱凝膠技術(shù)在ABO血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

        2023-09-26 08:58:40蔣金燕楊媛媛
        中華養(yǎng)生保健 2023年18期
        關(guān)鍵詞:不合格率血型交叉

        蔣金燕 楊媛媛

        (中國人民解放軍陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院輸血科,山東 濰坊,261000)

        母體、新生兒的血型融合度低或不融合,是導(dǎo)致ABO血型不合新生兒溶血?。ˋBO-HDN)發(fā)生的主要原因,本病為血型免疫反應(yīng)疾病[1]。母體在孕育胎兒的過程中產(chǎn)生的血型抗體無法與胎兒抗原相匹配,但血型抗體隨胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi),導(dǎo)致同族免疫性溶血[2]。這類患兒的母親多為O型血,新生兒多為A/B型血,O型血母體內(nèi)部會產(chǎn)生大量的抗A、抗B免疫球蛋白,拮抗A型血與B型血,當(dāng)母體血液從胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi),極易使其發(fā)生溶血。產(chǎn)前IgG抗體的降低,也是導(dǎo)致ABO-HDN發(fā)生的關(guān)鍵原因[3]。新生兒出生后尚未完全適應(yīng)外在環(huán)境,抗A、抗B型抗體并未產(chǎn)生,與成人相比,新生兒紅細(xì)胞表面血型抗原的表達(dá)能力弱,因此無法利用成人血型鑒定方式對新生兒血型進(jìn)行鑒定[4]。新生兒有ABO血型不合新生兒溶血?。ˋBO-hemolytic disease of the newborn,ABO-HDN)傾向時(shí)需盡早診斷,確診后要做好輸血前檢驗(yàn)工作,通過交叉配血選擇與患兒血液相容度較高的同型血液。在交叉配血篩查中,重點(diǎn)篩查抗A、抗B的存在,以提升臨床檢驗(yàn)結(jié)果的精確性,避免誤診,為后續(xù)臨床制訂相應(yīng)的治療方案奠定基礎(chǔ)[5]。在眾多檢驗(yàn)方法中,大量學(xué)者認(rèn)為微柱凝膠技術(shù)(microbubes gel technology,MGT)在ABO-HDN診斷中具有較大優(yōu)勢,且用于輸血前檢驗(yàn)的安全性高。微柱凝膠法的基本原理是將生物分子放入一種叫作凝膠的特殊介質(zhì)中,然后用電流將它們分離出來。凝膠是一種半固體、稠厚的物質(zhì),它可以將生物分子分離出來,并且可以控制分子的運(yùn)動方向。凝膠的結(jié)構(gòu)可以由電流控制,從而使生物分子在凝膠中沿著一定的方向移動,從而實(shí)現(xiàn)分離。因此本研究以2021年2月—2023年2月收治的58例ABO-HDN新生兒為對象,分析MGT技術(shù)優(yōu)勢,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2021年2月—2023年2月中國人民解放軍陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院收治的58例ABO-HDN新生兒為研究對象。新生兒中男、女患兒分別為30例、28例;日齡2~12 d,平均日齡(6.15±0.25)d;體質(zhì)量4687.58~6584.56 g,平均體質(zhì)量(5964.45±25.13)g;分娩方式:自然分娩、剖宮產(chǎn)分別40例、18例;HDN分型:輕型、中型、重型分別24例、25例、9例。胎齡38~41周,平均胎齡(39.45±1.23)周;血型:A型、B型分別30例、28例;網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍為21.56×109/L~89.65×109/L?;純嘿Y料完整,可進(jìn)行后續(xù)報(bào)道。本研究所納入患兒的家長對研究內(nèi)容知情同意,并簽署知情同意書。本研究經(jīng)中國人民解放軍陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

        1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

        納入標(biāo)準(zhǔn):①符合ABO-HDN的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];②足月新生兒;③生長發(fā)育正常。

        排除標(biāo)準(zhǔn):①無惡性腫瘤等合并癥;合并先天性心臟病等先天疾??;②新生兒家族存在精神病史;③對藥物過敏;④生存時(shí)間<3個(gè)月。⑤合并先天性畸形;⑥合并肝腎功能異常。

        1.3 方法

        對58例ABO-HDN患兒分別進(jìn)行MGT和MPT檢驗(yàn),同時(shí)與5份ABO同型紅細(xì)胞制劑進(jìn)行急性交叉配血試驗(yàn)。

        樣本采集:取患兒空腹靜脈血6 mL,分為兩份。正定、反定凝集強(qiáng)度分別達(dá)到3+、2+,且正反定型血型復(fù)查一致,即樣本質(zhì)量符合檢測要求。

        MPT檢驗(yàn)過程:取一支干凈空試管,滴入2滴ABO-HDN患兒的紅細(xì)胞放散液/血漿,同時(shí)加入同型ABO-HDN紅細(xì)胞懸液(3%~5%),再加入低離子介質(zhì)(0.7 mL),所有液體加入完成后完全混合,再加入凝聚胺溶液。利用離心機(jī)(生產(chǎn)企業(yè):長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司,型號:TD-3A)高速離心處理,靜置10 min后去掉上清液,對紅細(xì)胞凝聚狀況進(jìn)行評估,存在凝集狀態(tài)需重新進(jìn)行上述操作。

        MGT檢驗(yàn):取微柱凝膠卡,將紅細(xì)胞放散液/血漿滴入2滴,然后將血樣加入凝膠卡中,持續(xù)離心處理5 min,轉(zhuǎn)速1500 r/min,觀測最終結(jié)果。

        溶血試驗(yàn):(1)游離抗體試驗(yàn):準(zhǔn)備三支試管,分別標(biāo)號A、B、O,在各試管中加入50 μL紅細(xì)胞懸液(濃度0.8%),再加入血清25 μL,置于孵育器中快速處理,等待15 min,然后高速離心10 min,離心速度2500 r/min。(2)直接抗球蛋白試驗(yàn):取一張抗人球蛋白卡,將A、B與O三孔標(biāo)記出來,加入濃度為0.8%的紅細(xì)胞懸液,劑量50 μL,持續(xù)離心1 min,觀察離心結(jié)果。(3)抗體釋放試驗(yàn):取一張空白的抗人球蛋白卡,將A、B與O三孔標(biāo)記出來,加入濃度為0.8%的紅細(xì)胞懸液,劑量50 μL,滴入放散液后持續(xù)孵育15~20 min,離心10 min后觀察結(jié)果。

        1.4 觀察指標(biāo)

        (1)統(tǒng)計(jì)不同溶血檢驗(yàn)下,ABO-HDN的診斷結(jié)果。(2)記錄MGT與MPT檢驗(yàn)方式下,直抗與血清交叉配血的結(jié)果。(3)記錄MGT與MPT檢驗(yàn)方式下,直抗與放散液交叉配血的結(jié)果。(4)統(tǒng)計(jì)血清MGT與MPT配血的結(jié)果。(5)統(tǒng)計(jì)放散液MGT與MPT配血的結(jié)果。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料[n(%)]表示,采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一致性檢驗(yàn)利用Kappa檢驗(yàn),Kappa值大小與一致性程度成正比。K為0~1。

        2 結(jié)果

        2.1 直抗、游離及放散診斷結(jié)果

        三種溶血試驗(yàn)結(jié)果顯示,直抗、游離及放散檢驗(yàn)為陽性分別為29例(50.00%)、44例(75.86%)、58例(100.00%),見表1。

        表1 直抗、游離及放散診斷結(jié)果 [n(%)]

        2.2 直抗與血清交叉配血

        58例ABO-HDN患兒共進(jìn)行290次交叉配血試驗(yàn),MGT試驗(yàn)顯示不合格率為173/290次(59.66%),MPT不合格率為82次(28.78%),MGT檢出不合格率顯著高于MPT試驗(yàn)(χ2=57.955,P=0.001)。直抗+與直抗-交叉配血的不合格率分別為137/290(47.24%)、118/290(40.69%),陽性高于陰性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.239,P=0.001<0.05),見表2。

        表2 直抗與血清交叉配血 [n(%)]

        2.3 直抗與放散液交叉配血

        58例ABO-HDN患兒共進(jìn)行290次交叉配血試驗(yàn),MGT試驗(yàn)顯示不合格率為155次(53.45%),MPT不合格率為73次(25.17%),MGT檢出不合格率顯著高于MPT試驗(yàn)(χ2=48.594,P=0.001)。直抗+與直抗-交叉配血的不合格率分別為120/290(41.38%)、108/290(37.24%),陽性高于陰性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.041,P=0.037<0.05),見表3。

        表3 直抗與放散液交叉配血 [n(%)]

        2.4 配血結(jié)果(血清MGT與MPT)

        血清MGT與MPT配血結(jié)果顯示,MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性。Kappa檢驗(yàn)顯示MGT與MPT一致性較差(Kappa值=0.215,P=0.002),見表4。

        表4 配血結(jié)果(血清MGT與MPT) [n(%)]

        2.5 配血結(jié)果(放散液MGT與MPT)

        放散液MGT與MPT配血結(jié)果顯示,MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性。Kappa檢驗(yàn)顯示MGT與MPT一致性較差(Kappa值=0.185,P=0.001),見表5。

        表5 配血結(jié)果(放散液MGT與MPT) [n(%)]

        3 討論

        臨床常采用抗體釋放、游離血清等方法對ABO-HDN進(jìn)行檢測,確診后需根據(jù)患兒狀況給予輸血治療[7]。先進(jìn)行交叉配血再輸血,能摒除與患兒血液相容性較差的血型,通過對放散液和游離血清同時(shí)進(jìn)行交叉配血,能保證交叉配血全面性[8-9]。采用放散液交叉配血,能有效評估細(xì)胞溶血性抗體、紅細(xì)胞的不相容程度。采用游離血清交叉配血,能評估血液溶血抗體、紅細(xì)胞的不相容程度,細(xì)胞和血液兼顧,有效提升交叉配血精度[10]。在眾多檢測技術(shù)中,MGT技術(shù)的應(yīng)用效果較為理想。

        本研究先對ABO-HDN患兒進(jìn)行溶血檢驗(yàn),結(jié)果顯示:放散檢驗(yàn)的陽性率為100%,可見放散檢驗(yàn)在是ABO-HDN患兒的首選方法,配合游離與直抗試驗(yàn)?zāi)軌颢@得更加精確的診斷結(jié)果。在確定所有患兒都為ABO-HDN類型后,給予MGT檢驗(yàn),獲得良好效果。MGT與MPT配血結(jié)果也顯示,MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性,且兩者一致性差,MGT檢驗(yàn)不合格率較高。由統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果可知,MGT技術(shù)在ABO-HDN新生兒診斷中具有明顯優(yōu)勢,其診斷精確率明顯高于MPT,能夠更加準(zhǔn)確地檢驗(yàn)出不合格交叉配血情況,提高輸血安全性。

        本次獲得上述良好結(jié)果,與MGT的實(shí)施有密切關(guān)系。與其他檢驗(yàn)技術(shù)相比,MGT技術(shù)在診斷ABO-HDN中優(yōu)勢突出,兼具可重復(fù)、診斷結(jié)果準(zhǔn)確、無創(chuàng)等優(yōu)勢,在檢驗(yàn)的同時(shí)保證患兒安全性,避免對患兒造成二次損傷[11]。同時(shí)在交叉配血過程中應(yīng)用MGT技術(shù),能有效提升檢驗(yàn)敏感度,減少假陰性可能[12]。但MGT技術(shù)無法完全避免假陰性結(jié)果,因此在臨床檢驗(yàn)過程中,需配合放散液、血清兩種交叉配血方式,提高不合格交叉配血檢出率,進(jìn)而降低漏檢、誤檢風(fēng)險(xiǎn)[13]。由于ABO-HDN患兒的個(gè)體化差異,身體的抗體數(shù)量、紅細(xì)胞血型抗原表達(dá)強(qiáng)度等都存在差異性,加上胎兒時(shí)期被動接收的溶血性抗體數(shù)量不同,都會對交叉配血靈敏度產(chǎn)生不同程度的影響,因此在利用MGT技術(shù)進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)時(shí),要合理把控靈敏度的彈性范圍[14]。

        直接抗人球蛋白檢測,是當(dāng)前ABO-HDN廣泛應(yīng)用的方法,但受到多種因素的限制,應(yīng)用MPT技術(shù)所獲得的診斷結(jié)果仍存在較大爭議性[15]。與MPT技術(shù)相比,MGT技術(shù)是近年來臨床認(rèn)可度較高的診斷技術(shù),總結(jié)該項(xiàng)技術(shù)優(yōu)勢主要包括:操作過程簡單,檢驗(yàn)人員只需按照特定程序,依次完成各個(gè)檢測步驟,就能獲得相應(yīng)結(jié)果,且檢測過程無需洗滌,檢驗(yàn)時(shí)間短,滿足患者即時(shí)查看結(jié)果的需求;MGT檢驗(yàn)的判讀方式簡單,可通過存盤、拍照方式進(jìn)行檢驗(yàn),結(jié)果清晰且穩(wěn)定;檢驗(yàn)過程自動化程度高,有效避免人工檢驗(yàn)導(dǎo)致的誤差;MGT技術(shù)具有較高的靈敏度,結(jié)合條形碼技術(shù)進(jìn)行上機(jī)檢測,有利于降低檢測錯(cuò)誤率,保證交叉配血檢驗(yàn)的精準(zhǔn)度。但需要注意的是,MGT技術(shù)并不是十全十美的,交叉配血檢驗(yàn)過程中仍存在誤診風(fēng)險(xiǎn),因此臨床檢驗(yàn)過程中,仍需注意規(guī)避相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)[16-17]。

        楊鑫等[18]的報(bào)道中,對MGT技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行評價(jià),收治284例ABO-HDN新生兒,分別進(jìn)行MGT檢驗(yàn)及MPT檢驗(yàn),結(jié)果顯示:直抗、血清、放散試驗(yàn)陽性率分別為53.1%、85.2%、100.00%,MGT檢出不合格率均顯著高于MPT試驗(yàn)(P<0.05),直抗+與直抗-交叉配血的不合格率相比,“+”均高于“-”(P<0.05),本研究結(jié)果與上述報(bào)道具有一致性,可見本次結(jié)果具有較高的可信度。盡管本次研究初步取得成效,但仍存在漏診、樣本量少、健康教育不到位等問題[19-20]。

        綜上所述,ABO-HDN患兒診斷及輸血前檢驗(yàn)中,MGT技術(shù)的血液檢驗(yàn)不合格率較高,且陽性檢出高于MPT。

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