程玲，秦月雯，楊藝茜，王勇，李劍，徐滿*

1.江西青峰藥業(yè)有限公司，江西 贛州 341000

2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江西 南昌 330000

阿普斯特是一種新型的口服小分子磷酸二酯酶4（PDE4）抑制劑，可抑制PDE4 活性，提高細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷水平，進(jìn)一步調(diào)控腫瘤壞死因子和其他炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，最終抑制炎癥反應(yīng)[1-2]。臨床數(shù)據(jù)顯示，阿普斯特能夠顯著改善指甲、頭皮、掌跖（手足）的銀屑病，有效治療銀屑病關(guān)節(jié)炎，為銀屑病患者群體提供了一種非常有價(jià)值的治療選擇[3]。2019 年7 月，阿普斯特獲得了美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)，用于治療與白塞氏病相關(guān)的口腔潰瘍[4]。阿普斯特口服吸收良好，絕對(duì)生物利用度為73%[5]。在約2.5 h 的達(dá)峰時(shí)間（tmax）出現(xiàn)峰濃度（Cmax），Cmax約為584 ng/mL[6]，食物不影響阿普斯特的吸收。血漿蛋白結(jié)合率約為68%，平均表觀分布容積（Vd）為87 L[5]?？诜o藥后，阿普斯特（45%）為體內(nèi)循環(huán)主要成分，其次為非活性代謝物M12（39%）。阿普斯特可在人體內(nèi)廣泛代謝，在血漿、尿液和糞便中已發(fā)現(xiàn)23 種代謝產(chǎn)物[7]。阿普斯特通過(guò)細(xì)胞色素（CYP）氧化代謝、隨后通過(guò)葡糖苷酸化和非CYP 介導(dǎo)的水解作用進(jìn)行代謝。在體外，阿普斯特的CYP 代謝主要由CYP3A4 介導(dǎo)，CYP1A2、CYP2A6 的作用較小。在健康受試者中，阿普斯特的血漿清除率約為10 L/h，終末消除半衰期為6～9 h。放射性標(biāo)記的阿普斯特經(jīng)口給藥后，以阿普斯特形式存在的放射性劑量在尿液和糞便中分別占3%、7%[5]。本研究采用高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）法測(cè)定健康受試者在空腹和餐后狀態(tài)下服用30 mg 阿普斯特片后人血漿中阿普斯特的質(zhì)量濃度，考察國(guó)產(chǎn)阿普斯特片和原研藥在健康受試者中的藥動(dòng)學(xué)特征和生物等效性。

1 材料與對(duì)象

1.1 藥品

受試制劑（T）：阿普斯特片，江西青峰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格30 mg/片，批號(hào)2020 111003；參比制劑（R）：阿普斯特片，商品名Otezla?，Amgen Europe B.V.生產(chǎn)，規(guī)格30 mg/片，批號(hào)H02445A。阿普斯特對(duì)照品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.9%，批號(hào)2314-033A2，TLC Pharmaceutical Standards ；內(nèi) 標(biāo)Apremilast-d5對(duì)照品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.4%，批號(hào)2314-040A3，TLC Pharmaceutical Standards。

1.2 儀器

LC-20ADXR 高效液相色譜儀（Shimadzu 公司），LC-20ADXR 高效液相色譜泵（Shimadzu 公司），Turbo Spray 離子源（AB Sciex），SIL-30ACMP自動(dòng)進(jìn)樣器（Shimadzu 公司），CTO-20AC 柱溫箱（Shimadzu 公司）；Triple Quad 4500 質(zhì)譜儀（AB Sciex 公司）；XPR6UD5 千萬(wàn)分之五電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；Sorvall Legend Micro 17R 高速離心機(jī)（Thermo Scientific）；Multifuge X1R 高速離心機(jī)（Thermo Fisher）；MTV-100 渦旋混合儀（杭州奧盛儀器有限公司），MX-M渦旋混合儀[大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）有限公司]；移液站：OL7001-26-214，CyBi SELMA 96，德國(guó)耶拿分析儀器股份公司；Analyst 1.6.3 分析軟件（AB Sciex）。

1.3 受試者的選擇

根據(jù)研究報(bào)道[8-9]，阿普斯特片參比制劑空腹Cmax個(gè)體內(nèi)變異度小于30%，為22.5%。假設(shè)α＝0.05，β＝0.2，幾何均值比GMR＝95%、100%、105%，CV 為24%，脫落率為20%，生物等效區(qū)間為80.00%～125.00%，采用SAS 9.4 軟件估計(jì)空腹和餐后樣本量分別為32 例。

本研究經(jīng)南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批件號(hào)：藥臨審[2021]第（22）號(hào)。所有受試者均自愿簽訂知情同意書(shū)?？崭乖囼?yàn)和餐后試驗(yàn)分別入組32 例合格健康受試者，隨機(jī)分為T(mén)-R（受試制劑/參比制劑）和R-T（參比制劑/受試制劑）組，每組各16 例受試者。

入選標(biāo)準(zhǔn)：18～50 周歲男性和女性健康受試者，BMI 在19.0～26.0 kg/m2，男性受試者≥50.0 kg，女性受試者≥45.0 kg。

排除標(biāo)準(zhǔn)：3 個(gè)月內(nèi)參加過(guò)其他的藥物臨床試驗(yàn)者或接受外科手術(shù)；有藥片吞咽困難者；采血困難者；對(duì)阿普斯特、輔料中成分過(guò)敏者或過(guò)敏體質(zhì)；嗜煙嗜酒者；3 個(gè)月內(nèi)獻(xiàn)血或大量失血者；胃腸疾病史者；既往出現(xiàn)過(guò)心律失常狀況者；30 d 內(nèi)使用過(guò)與阿普斯特有相互作用的藥物；哺乳期或妊娠期女性；有藥物濫用史或藥物濫用篩查陽(yáng)性者；30 d內(nèi)使用過(guò)抑制或誘導(dǎo)肝臟對(duì)藥物代謝的藥物。

空腹試驗(yàn)組共篩選受試者64 例，成功入組32例?？崭乖囼?yàn)入組男性24 例，女性8 例，年齡為（25.94±4.66）歲，平均身高為（167.81±7.33）cm，平均體質(zhì)量為（62.42±6.36）kg，平均體質(zhì)量指數(shù)（BMI）為（22.15±1.62）kg/m2?？崭乖囼?yàn)過(guò)程中，2 例受試者脫落，另1 例受試者第2 周期數(shù)據(jù)被剔除（給藥后首個(gè)樣品為Cmax，且未采集給藥后5～15 min 的早期樣品）。餐后試驗(yàn)組共篩選79 例，成功入組32 例。餐后試驗(yàn)入組男性24 例，女性8 例，年齡為（20.78±2.52）歲，平均身高為（168.58±7.00）cm，平均體質(zhì)量為（63.37±7.92）kg，平均BMI 為（22.24±1.87）kg/m2。餐后試驗(yàn)過(guò)程中，1例受試者發(fā)生脫落，無(wú)受試者被剔除。空腹試驗(yàn)32例受試者均納入安全性分析集，31 例納入藥動(dòng)學(xué)參數(shù)集，30 例納入生物等效性分析集。餐后試驗(yàn)32例受試者全部納入安全性分析集、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)集和生物等效性分析集。

2 方法與結(jié)果

2.1 給藥和樣本采集

本研究采用單中心、隨機(jī)、開(kāi)放、兩制劑、兩序列、兩周期交叉的生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)。篩選期選擇合格的健康成年受試者隨機(jī)至T-R 組和R-T組，按順序交叉給藥。參照《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[10]的要求，設(shè)置清洗期7 d。篩選合格的受試者于試驗(yàn)前1 d 入住。服藥前1 h 至服藥后1 h 內(nèi)禁止飲水，給藥后禁食4 h，4 h 后進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)午餐，10 h 后進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)晚餐。

空腹試驗(yàn)受試者隔夜空腹至少10 h 以上，給藥當(dāng)天早上按隨機(jī)表服用受試制劑或參比制劑，每次1 片，30 mg/片，以240 mL 溫水送服。每個(gè)周期分別于給藥前0 h（給藥前1.0 h 內(nèi)）和給藥后20、40 min 以及1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0 h 采集上肢靜脈血約4 mL。

餐后試驗(yàn)受試者隔夜空腹至少10 h 后，在給藥前30 min 開(kāi)始進(jìn)食高脂餐，控制進(jìn)餐速度，要在30 min 內(nèi)吃完，藥物要在進(jìn)餐后且以開(kāi)始進(jìn)餐時(shí)間計(jì)的第30 分鐘服用，按隨機(jī)表服用受試制劑或參比制劑，1 片/次，30 mg/片，以240 mL 溫水送服。受試者于給藥前0 h（給藥前1.0 h 內(nèi)）和給藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0 h 采集上肢靜脈血，每次取血4 mL。

所得全血樣品在采血后1 h 內(nèi)放進(jìn)4 ℃低溫離心機(jī)（2～8 ℃，1 700×g）離心10 min，，然后分離血漿樣品。所有離心后血漿樣品分成兩份，至少取0.8 mL 血漿加入到檢測(cè)凍存管中，剩余血漿樣品放入到備份凍存管中，血漿樣品分裝在冰浴下進(jìn)行。血漿樣品需在采集后2 h 內(nèi)置于-20 ℃冰箱暫存，并在采血后24 h 內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至-80 ℃超低溫冰箱（-60～-90 ℃）進(jìn)行凍存，或在樣本離心操作完成2 h 內(nèi)將分裝后的血漿直接轉(zhuǎn)移至溫度-80 ℃超低溫冰箱（-60～-90 ℃）保存。

2.2 HPLC-MS/MS 法測(cè)定阿普斯特

2.2.1 色譜條件 Ultimate XB C18色譜柱（50.0 mm×2.1 mm，5 μm）；流動(dòng)相：含0.01%甲酸的水溶液（A）-乙腈（B）；梯度洗脫，0～0.10 min 35.0%B，0.10～1.20 min 35.0%～55.0% B，1.20～1.30 min 55.0%～90.0% B，1.30～2.00 min 90.0% B，2.00～2.10 min 90.0%～35.0% B；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣體積7.00 μL；柱溫35 ℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件 ESI 電噴霧離子源，正離子模式，MRM 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描，渦旋離子噴霧溫度600.00 ℃，電噴霧電壓5 500.00 V，氣簾氣30.00 psi（1 psi＝6 895 Pa），霧化氣50.00 psi，輔助氣50.00 psi，入口電壓：10.00 V，碰撞室出口電壓：10.00 V。阿普斯特m/z461.1→257.1，去簇電壓100.00 V，碰撞能量15 eV，阿普斯特-d5466.2→262.1，去簇電壓90.00 V，碰撞能量16.00 eV。

2.2.3 溶液的制備

（1）阿普斯特儲(chǔ)備液的制備：取一定量的阿普斯特2 份，置于透明玻璃瓶中，記錄質(zhì)量。根據(jù)其質(zhì)量分?jǐn)?shù)、水分、是否成鹽等信息計(jì)算該分析物的真實(shí)質(zhì)量，加入適量的甲醇-二甲基亞砜（95∶5），渦旋混合，配制0.500 mg/mL 的儲(chǔ)備液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液的制備：在透明玻璃瓶中加入一定量90%甲醇溶液，然后加入阿普斯特儲(chǔ)備液，渦旋混合，配制成最終質(zhì)量濃度分別為50、100、400、2 000、5 000、10 000、18 000、20 000 ng/mL 的工作液。

（3）內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的制備：根據(jù)阿普斯特-d5質(zhì)量分?jǐn)?shù)、水分、是否成鹽等信息，將1.04 mg 內(nèi)標(biāo)對(duì)照品加入0.997 mL 甲醇-二甲基亞砜（95∶5），渦旋混合，配制成阿普斯特-d5最終質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL 的儲(chǔ)備液。

（4）內(nèi)標(biāo)工作溶液的制備：在透明玻璃瓶中將內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液用90%甲醇溶液稀釋為5 000 ng/mL 的內(nèi)標(biāo)工作溶液，將5 000 ng/mL 內(nèi)標(biāo)工作溶液用90%甲醇溶液稀釋為100 ng/mL 內(nèi)標(biāo)工作溶液。

（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備：在透明聚丙烯離心管中加入適量的混合空白血漿（高脂效應(yīng)所在分析批使用混合空白正常血漿），然后加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液，渦旋混勻，制成質(zhì)量濃度分別為2.00、4.00、16.00、80.00、200.00、400.00、720.00、800.00 ng/mL 的校正標(biāo)樣。

（6）質(zhì)控工作溶液和質(zhì)控樣品溶液的制備：在透明玻璃瓶中加入一定量90%甲醇溶液，然后加入一定體積阿普斯特儲(chǔ)備液，渦旋混合，制成50、150、1 500、6 000、15 000、80 000 ng/mL 的質(zhì)控工作溶液。在透明聚丙烯離心管中加入適量的混合空白血漿，加入相應(yīng)質(zhì)量濃度工作溶液，渦旋混勻，得2.00（LLOQ QC）、6.00（LQC）、60.00（MQC2）、240.00（MQC）、600.00（HQC）、3 200.00（DQC）ng/mL的質(zhì)控樣品溶液。

2.2.4 血漿樣品處理 采用乙腈蛋白沉淀法。在一塊96 孔深孔板中分別往空白基質(zhì)樣品、零濃度樣品的孔位中加入50.0 μL 空白血漿，空白試劑樣品的孔位中加入同等體積的超純水，校正標(biāo)樣的孔位中加入同等體積的校正標(biāo)樣，質(zhì)控樣品的孔位中加入同等體積的質(zhì)控樣品，不加內(nèi)標(biāo)的定量上限樣品（ULOQ-no IS）樣品的孔位中加入同等體積的定量上限樣品（其中稀釋質(zhì)控樣品先用適量的混合空白血漿稀釋?zhuān)?；往空白基質(zhì)樣品[包括基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)樣品（MER）和回收率評(píng)價(jià)樣品（REC））、空白試劑樣品（包括基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)的純?nèi)芤簶悠罚∕EP）]和ULOQ-no IS 樣品的孔位中分別加入25.0 μL 90%甲醇溶液，往其他樣品的孔位中加入同等體積的內(nèi)標(biāo)工作溶液，渦旋混合3 min；以上操作全程需在濕冰上進(jìn)行。使用移液器/移液站給每個(gè)樣品加入400 μL乙腈，渦旋混合5 min；在4 ℃的高速冷凍離心機(jī)以1 700×g離心15 min；轉(zhuǎn)移100 μL 上清液至另一塊200 μL 含1%甲酸的50%甲醇溶液的96 孔深孔板中，REC、MEP、MER 樣品加入200 μL 低（LRS）、中（MRS）、高濃度（HRS）回收率樣品溶液，渦旋混合5 min。在進(jìn)樣分析前將樣品處理后的提取物保存在自動(dòng)進(jìn)樣器的溫度下或4 ℃的冰箱中。

2.2.5 選擇性試驗(yàn) 6 個(gè)不同來(lái)源的空白正常基質(zhì)、1 個(gè)來(lái)源的空白高脂基質(zhì)、1 個(gè)來(lái)源的空白溶血基質(zhì)對(duì)分析物和內(nèi)標(biāo)無(wú)明顯干擾，不影響定量分析。混合來(lái)源的空白基質(zhì)（MTX-BLK）對(duì)分析物和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)無(wú)明顯干擾，不影響定量分析?？瞻自噭┤芤海≧CT-BLK）對(duì)分析物和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)無(wú)明顯干擾，不影響定量分析。內(nèi)標(biāo)對(duì)分析物、分析物對(duì)內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)無(wú)明顯干擾，不影響定量分析。同位素內(nèi)標(biāo)短期室溫放置24 h 對(duì)分析物的檢測(cè)無(wú)明顯干擾，不影響定量分析。同位素內(nèi)標(biāo)在4 ℃儲(chǔ)存條件下放置38 d 對(duì)分析物的檢測(cè)無(wú)明顯干擾，不影響定量分析。見(jiàn)圖1。

圖1 HPLC-MS/MS 色譜圖Fig.1 HPLC-MS/MS chromatograms

2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和定量下限 對(duì)理論質(zhì)量濃度與響應(yīng)值進(jìn)行線性回歸，采用最小二乘法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線所有質(zhì)量濃度點(diǎn)進(jìn)行擬合，得方程Y＝0.025 6X－0.000 367（R2＝0.998 1）。阿普斯特的線性范圍為0.20～200.00 ng/mL，定量下限為0.200 ng/mL。

2.2.7 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn) 配制質(zhì)量濃度分別為2.00、6.00、60.00、240.00、600.00 ng/mL 的質(zhì)控樣品LLOQ QC、LQC、MQC2、MQC 和HQC，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明批內(nèi)、批間準(zhǔn)確度和精密度良好。

表1 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（，n=3）Table 1 Results of precision and accuracy tests (,n=3)

表1 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（，n=3）Table 1 Results of precision and accuracy tests (,n=3)

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 采用低濃度質(zhì)控樣品（6.00 ng/mL）和高濃度質(zhì)控樣品（600.00 ng/mL）分別測(cè)定穩(wěn)定性。血漿中分析物在濕冰放置24 h；處理過(guò)的樣品在自動(dòng)進(jìn)樣器4 ℃下存儲(chǔ)100 h；在-20、-80 ℃條件下經(jīng)過(guò)5 次凍融；血漿中分析物儲(chǔ)存在-20 ℃條件下26 d；在-80 ℃條件下59 d，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（，n=3）Table 2 Results of stability test (,n=3)

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（，n=3）Table 2 Results of stability test (,n=3)

2.2.9 提取回收率試驗(yàn) 用混合空白基質(zhì)配制6.00、240.00、600.00 ng/mL 3 個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品，混合空白基質(zhì)處理后加入與6.00、240.00、600.00 ng/mL 相同質(zhì)量濃度的分析物溶液，配制成回收率評(píng)價(jià)樣品，每一個(gè)質(zhì)量濃度平行操作6 份，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算提取回收率，結(jié)果平均提取回收率分別為101.6%、101.2%、101.6%，RSD 值分別為2.1%、2.5%、1.8%；內(nèi)標(biāo)平均提取回收率分別為108.9%、105.2%、107.7%，RSD 值分別為1.3%、1.5%、1.4%。

2.2.10 基質(zhì)效應(yīng) 6 個(gè)不同來(lái)源的空白正?；|(zhì)、1 個(gè)來(lái)源的空白高脂基質(zhì)、1 個(gè)來(lái)源的空白溶血基質(zhì)對(duì)分析物和內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng)接近，不影響分析物的定量分析。低（LQC）、高（HQC）質(zhì)量濃度的樣品經(jīng)內(nèi)標(biāo)歸一化的基質(zhì)因子的平均值分別為0.986、1.010，RSD 值分別為5.8%、1.4%。溶血效應(yīng)中LQC和HQC 的RSD 值分別為6.3%、3.3%，平均準(zhǔn)確度偏差為-5.4%、3.4%，無(wú)明顯溶血效應(yīng)，不影響定量分析。高脂效應(yīng)中LQC、HQC 的RSD 值分別為2.2%、2.3%，平均準(zhǔn)確度偏差為-3.8%、3.4%，無(wú)明顯高脂效應(yīng)，不影響定量分析。

2.2.11 殘留 批量樣品檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)分析物殘留率為0～3.0%，內(nèi)標(biāo)無(wú)殘留，分析物、內(nèi)標(biāo)殘留均可忽略。

2.2.12 稀釋可靠性 用空白基質(zhì)將DQC 樣品稀釋5 倍，平行操作6 份，RSD 值為2.2%，表明當(dāng)稀釋度不大于1∶5 時(shí)，用空白基質(zhì)稀釋樣品對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大。

2.3 藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析

血藥濃度數(shù)據(jù)采用Phoenix WinNonlin軟件（8.2版本）進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算，根據(jù)每個(gè)受試者的個(gè)體血藥濃度，采用非房室模型（NCA）計(jì)算阿普斯特的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，包括Cmax、AUC0-t、AUC0-∞、tmax、t1/2、λz、AUC_%Extrap。采用BES，將受試制劑和參比制劑Cmax、AUC0-t和AUC0-∞經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析（ANOVA）。方差分析模型中給藥順序、藥物、周期作為固定效應(yīng)，受試者（順序）作為隨機(jī)效應(yīng)。計(jì)算主要指標(biāo)的幾何均值比率（受試制劑/參比制劑）的90%置信區(qū)間，并進(jìn)行等效性比較，若Cmax、AUC0-t和AUC0-∞幾何均值比的90%置信區(qū)間落在80.00%～125.00%，則認(rèn)為兩種制劑生物等效。

空腹和餐后試驗(yàn)受試者口服受試制劑和參比制劑的血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。

圖2 空腹（A）和餐后（B）口服受試制劑和參比制劑后阿普斯特的平均血藥濃度-時(shí)間曲線Fig.2 Mean blood concentration-time curve of Apremilast Tablets after po administration of test and reference preparation under fasting (A) and fed (B) condition

受試者在空腹和餐后單次口服30 mg 阿普斯特片受試制劑和參比制劑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 阿普斯特片受試制劑和參比制劑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Table 3 Pharmacokinetic parameters of test and reference preparations of Apremilast Tablets

Cmax、AUC0-t和AUC0-∞在進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，采用交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果空腹和餐后阿普斯特的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞給藥順序間、給藥周期間、制劑間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，受試者（順序）間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 生物等效性評(píng)價(jià)

Cmax、AUC0-t和AUC0-∞在進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行雙向單側(cè)t檢驗(yàn)，計(jì)算受試制劑和參比制劑血漿中阿普斯特Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的幾何均值比的90%置信區(qū)間。當(dāng)受試制劑與參比制劑的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的幾何均值比的90%置信區(qū)間在80.00%～125.00%等效區(qū)間內(nèi)，即可判定兩種制劑的人體生物等效。阿普斯特片的生物等效性結(jié)果見(jiàn)表4?？崭乖囼?yàn)1 例受試者（K016）由于隱瞞高血壓病史，在篩選前兩周服用了降血壓藥物，不確定是否對(duì)后續(xù)血藥濃度是否產(chǎn)生影響，不納入生物等效性集（BES），但納入該例受試者第1 周期的數(shù)據(jù)后進(jìn)行敏感性分析，結(jié)果見(jiàn)表5。受試制劑和參比制劑的tmax進(jìn)行兩配對(duì)樣本的非參數(shù)Wilcoxon 符號(hào)秩和檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。

表4 健康受試者空腹和餐后單次口服阿普斯特片后血中阿普斯特的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)生物等效性評(píng)價(jià)（BES）Table 4 Bioequivalence evaluation of main pharmacokinetic parameters in blood of healthy subjects after a single oral administration of Apremilast Tablets under fasting condition and fed condition

表5 敏感性分析結(jié)果Table 5 Sensitivity analysis result

表6 阿普斯特tmax 非參數(shù)檢驗(yàn)Table 6 Non-parametric test of tmax of apremilast

生物等效性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示阿普斯特片空腹和餐后試驗(yàn)受試制劑與參比制劑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的幾何均值比的90%置信區(qū)間均落在80.00%～125.00%等效區(qū)間內(nèi)。敏感性分析基于空腹研究中BES，納入K016 第1 周期數(shù)據(jù)后，受試制劑和參比制劑的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的幾何均值比的 90%置信區(qū)間均在 80.00%～125.00%等效區(qū)間內(nèi)，故其等效性評(píng)價(jià)結(jié)果穩(wěn)定。tmax非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果顯示受試制劑和參比制劑的tmax差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。故認(rèn)為上述給藥順序的差異可能來(lái)源于系統(tǒng)誤差，是可以接受的。

綜上所述，空腹和餐后條件下阿普斯特片受試制劑和參比制劑在90%的置信區(qū)間上Cmax、AUC0-t和AUC0-∞等效，由此支持兩種制劑在空腹和餐后條件均具有生物等效性。

3 討論

阿普斯特片是一種治療銀屑病、白塞病相關(guān)性口腔潰瘍等的磷酸二酯酶4 小分子抑制劑[2]。參考《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[10]和《Draft Guidance on Apremilast》[11]，采用單中心、隨機(jī)、開(kāi)放、兩制劑、兩序列、兩周期交叉設(shè)計(jì)開(kāi)展阿普斯特片30 mg 的生物等效性研究，檢測(cè)分析人血漿中的阿普斯特。

本實(shí)驗(yàn)建立了一個(gè)靈敏、專(zhuān)屬、可靠的用于人血漿中阿普斯特濃度測(cè)定的HPLC-MS/MS 分析方法。該分析方法的線性范圍為2.00～800 ng/mL。對(duì)該分析方法的選擇性、基質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性、回收率、殘留、標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量下限等進(jìn)行了方法驗(yàn)證。結(jié)果表明，應(yīng)用HPLC-MS/MS 法測(cè)定人血漿中阿普斯特均符合要求，可用于阿普斯特的試驗(yàn)樣品分析。

空腹試驗(yàn)表明健康受試者單次口服阿普斯特片30 mg 受試制劑的血漿藥物濃度于給藥后3.5 h達(dá)到峰值，峰濃度為232 ng/mL。血藥濃度達(dá)峰后，快速消除，半衰期為6.64 h。結(jié)果與參比制劑報(bào)道的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)相比[5,8]，峰濃度約低31%左右（參比制劑文獻(xiàn)報(bào)道峰濃度339.86 ng/mL），達(dá)峰時(shí)間約延長(zhǎng)了1 h，推測(cè)可能是由于人種或納入人群（文獻(xiàn)中均納入為男性受試者）導(dǎo)致的差異。餐后試驗(yàn)受試制劑的血漿藥物濃度于給藥后3 h 達(dá)到峰值，峰濃度為371 ng/mL，半衰期為5.32 h。結(jié)果與參比制劑報(bào)道的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)相比[5,8]，峰濃度約高10%左右（參比制劑文獻(xiàn)報(bào)道的峰濃度為333.85 ng/mL），達(dá)峰時(shí)間相同，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)基本一致。餐后結(jié)果與空腹結(jié)果相比，峰濃度約增加30%左右，AUC 增加約29%左右，說(shuō)明與食物同時(shí)給藥可能輕微影響阿普斯特的吸收程度，與文獻(xiàn)報(bào)道[8]的食物影響略有差異，如文獻(xiàn)報(bào)道阿普斯特平均峰濃度Cmax無(wú)增加，且對(duì)AUC 的影響不具顯著性（增加約10%）。

綜上所述，阿普斯特片受試制劑和參比制劑在空腹和餐后狀態(tài)下單次服用后在健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)相似，吸收程度和吸收速度相當(dāng)，具有生物等效性。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突