張婉婉，張子建，張旭，張潔茹，王偉然，王春英,

1.河北醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院 藥物分析教研室，河北 石家莊 050017

2.河北省中醫(yī)院 口腔科，河北 石家莊 050011

3.新疆科技學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，新疆 庫爾勒 841000

牙周炎是一種慢性多因素炎癥性疾病，與牙菌斑的堆積有關(guān)，其特征是牙齒支持器官的進行性破壞，包括對牙周韌帶和牙槽骨的破壞[1]，其臨床表現(xiàn)主要為牙齦炎癥、牙槽骨吸收、牙周袋形成及牙齒松動[2]。作為全世界第6 大最流行的疾病，嚴重的牙周炎影響著大約10%的人口，牙周炎還被證實與心血管疾病、高血壓、糖尿病、癌癥和炎癥性疾病在內(nèi)的全身性疾病等多種系統(tǒng)性疾病的風(fēng)險增加有關(guān)[3]。因此，其預(yù)防與治療工作非常重要。

齒痛消炎靈顆粒由防風(fēng)、牡丹皮、青皮、荊芥、青黛、地黃、白芷、甘草、細辛、石膏組成，具有疏風(fēng)清熱，涼血止痛的功效。用于脾胃積熱、風(fēng)熱上攻所致頭痛身熱、口干口臭、便秘燥結(jié)、牙齦腫痛；急性齒根尖周炎、智齒冠周炎、急性牙齦（周）炎、急性牙髓炎見上述證候者[4]。臨床上多與其他藥物聯(lián)合治療牙周炎，且療效確切，安全性好[5-7]。

隨著生物信息學(xué)的快速發(fā)展，新興的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以大數(shù)據(jù)庫為基礎(chǔ)，已成為從分子水平到途徑水平詳細描述復(fù)雜藥物系統(tǒng)作用機制的有用工具[8]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)契合了中醫(yī)整體哲學(xué)的核心思想，作為一種最先進的技術(shù)，該方法將研究范式從目前的一靶一藥模式更新為新的“網(wǎng)絡(luò)靶向多組分”模式。它通過提供詳細的化合物-靶點和靶點-通路網(wǎng)絡(luò)，有助于評價中藥的合理性和配伍。本研究擬從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度出發(fā)，預(yù)測齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的藥效成分和潛在靶點，并通過基因本體（GO）功能分析以及京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路分析得到與齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎相關(guān)的信號通路和代謝途徑，再通過分子對接技術(shù)驗證活性成分與核心靶點的結(jié)合能力。為深入研究齒痛消炎靈顆粒的作用機制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 齒痛消炎靈顆粒有效成分與靶點的收集

利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫[9]（TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）平臺檢索齒痛消炎靈顆粒中防風(fēng)、牡丹皮、青皮、荊芥、甘草、青黛、白芷、細辛、地黃、石膏10 味中藥的成分，由于地黃在TCMSP 中檢索不到，故利用ETCM 數(shù)據(jù)庫[10]（https//www.tcmip.cn/ETCM/index.php/Home/Index/）進行補充，石膏為礦物藥在數(shù)據(jù)庫中檢索不到，本研究暫不考慮。根據(jù)口服利用度（OB）≥30%且類藥性（DL）≥0.18 的藥動學(xué)（ADME）屬性值篩選活性成分及其作用的蛋白靶點，并根據(jù)已發(fā)表的文獻報道補充加入OB 值和DL 值相對較低，但在文獻報道中提到的有明確的藥理活性的5-O-甲基維斯阿米醇苷[11]、補骨脂素[12]、7-去甲基軟木花椒素[11]、花椒毒酚[13]、丹皮酚[14]、橙皮苷[15]、柚皮苷[16]、薄荷酮[17]、胡薄荷酮[18]、環(huán)辛醇[17]、色胺酮[19]、甲基丁香酚[20]及其靶點。篩選后統(tǒng)一在Uniprot 蛋白數(shù)據(jù)庫[21]（https://www.uniprot.org）將化合物作用的靶點進行規(guī)范。

1.2 牙周炎相關(guān)靶點的獲取

以“periodontitis”為關(guān)鍵詞，在GeneCards 數(shù)據(jù)庫（http://www.genecards.org/）、OMIM 數(shù)據(jù)庫（https://www.omim.org/）、TherapeuticTargetDatabase數(shù)據(jù)庫（TTD，http://db.idrblab.net/ttd/）、DrugBank數(shù)據(jù)庫（https://www.drugbank.ca/）、DisGeNET 數(shù)據(jù)庫（https://www.disgenet.org）中進行檢索及篩選靶點基因，得到與牙周炎相關(guān)的靶點，將搜集到的靶點合并并刪除重復(fù)值。運用Venny 2.1.0（http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）將齒痛消炎靈顆粒活性成分靶點與牙周炎疾病靶點取交集，得到齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的潛在靶點。

1.3 “中藥–活性成分–靶點”網(wǎng)絡(luò)及“化合物–靶點–疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將齒痛消炎靈顆粒的中藥、活性成分、靶點及中藥、化學(xué)成分與疾病共有靶點分別導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件，進行“中藥-成分-靶點”“化合物-靶點-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建，利用Network Analyzer計算網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù)，包括degree 值、介度中心性（BC）、接近中心性（CC）。

1.4 蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將共有靶點上傳至STRING 數(shù)據(jù)庫（https://string -db.org），設(shè)定Organism 為“Homo sapiens”，設(shè)置靶點關(guān)聯(lián)的置信度為0.40，以此構(gòu)建靶點之間的PPI 網(wǎng)絡(luò)，并將STRING 中得到的結(jié)果以TSV 格式下載并保存，導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件，利用其中的“Network Analyzer”功能進行網(wǎng)絡(luò)拓撲分析。

1.5 GO 分析與KEGG 通路富集分析

將藥物、疾病共同靶點導(dǎo)入Metascape 平臺，分別進行GO 生物功能分析和KEGG 通路富集分析，設(shè)置P＜0.01，將獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用微生信平臺（http://www.bioinformatics.com.cn）進行可視化，并將排行前20 位的條目繪制成GO 生物功能分析柱狀圖和KEGG 通路富集分析氣泡圖。

1.6 成分–靶點–通路網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

應(yīng)用Cytoscape 3.9.1 軟件構(gòu)建“藥物成分-靶點-信號通路”網(wǎng)絡(luò)，然后應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)分析儀Network Analyzer 功能獲得各成分、靶點的網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù)，獲得齒痛消炎靈顆粒發(fā)揮治療牙周炎作用的重要活性成分及核心靶點。

1.7 分子對接評估

選取PPI 網(wǎng)絡(luò)中degree 值排名前5 位的關(guān)鍵靶點和“中藥-活性成分-靶點”中degree 值前5 位的核心成分作為受體蛋白和配體小分子。在PDB 數(shù)據(jù)庫（http://www.rcsb.org/）中獲取受體蛋白的晶體結(jié)構(gòu)并下載其pdb 格式文件，從TCMSP 數(shù)據(jù)庫下載配體小分子的MOL2 結(jié)構(gòu)式，使用AutoDock Tools 1.5.6 對配體和受體進行分子對接，并使用Pymol 將分子對接結(jié)果可視化。

2 結(jié)果

2.1 齒痛消炎靈顆粒有效成分與靶點

共篩選到防風(fēng)化學(xué)成分22 個、牡丹皮化學(xué)成分7 個、青皮化學(xué)成分7 個、荊芥化學(xué)成分12 個、白芷化學(xué)成分20 個、青黛化學(xué)成分9 個、地黃化學(xué)成分9 個、甘草化學(xué)成分88 個、細辛化學(xué)成分9個，去重后共得到化學(xué)成分264 個，見表1（由于甘草成分較多，展示OB、DL 值較高的成分）。將中藥、活性成分、靶點關(guān)系導(dǎo)入至Cytoscape 3.9.1后得網(wǎng)絡(luò)圖，如圖1 所示，共包含667 個節(jié)點，2 759 條邊，每個中藥活性成分的平均靶點數(shù)目為10.45 個。利用網(wǎng)絡(luò)分析儀Network Analyzer 計算網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù)，化合物的平均degree 值為14.6，作用靶點較多的化合物有槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、柚皮素、豆甾醇、木犀草素等。

圖1 中藥–活性成分–靶點網(wǎng)絡(luò)圖Fig.1 Traditional Chinese medicine -active ingredients -target network diagram

表1 齒痛消炎靈顆粒活性成分Table 1 Active components of Chitong Xiaoyanling Granules

2.2 牙周炎相關(guān)靶點

以“periodontitis”為關(guān)鍵詞，通過GeneCards、TTD、OMIM、DisGeNET、DrugBank 數(shù)據(jù)庫進行檢索，合并去除重復(fù)值后收集到牙周炎相關(guān)靶點1 581個。運用Venny 2.1.0 將潛在活性成分的作用靶點與牙周炎疾病靶點合并后取交集，見圖2，最終獲得157 個齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的潛在靶點。

圖2 “藥物–疾病”共有靶點韋恩圖Fig.2 Venn diagram of the common target of “drugs -disease”

2.3 化合物–靶點–疾病網(wǎng)絡(luò)

將齒痛消炎靈顆?；钚猿煞?、157 個共有靶點等數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1，構(gòu)建化合物-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)，見圖3，共包含322 個節(jié)點，1 400 條邊，不同活性成分對應(yīng)不同作用靶點，體現(xiàn)齒痛消炎靈顆粒多成分、多靶點的特點。利用網(wǎng)絡(luò)分析儀Network Analyzer 計算網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù)，其中degree值較大的化合物為槲皮素、山柰酚、木犀草素、漢黃芩素、川陳皮素、柚皮素、β-谷甾醇等，預(yù)測其為齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的較為重要活性成分，見表2。

圖3 化合物–靶點–疾病網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 Network diagram of compound -target -disease

表2 齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的活性成分（前10 位）Table 2 Active components of Chitong Xiaoyanling Granules in treatment of periodontitis (top 10)

2.4 PPI 網(wǎng)絡(luò)

將藥物、疾病共有靶點錄入STRING 平臺構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，將上述結(jié)果以TSV 格式下載并保存，導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1，構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)模型，結(jié)果如圖4所示。該網(wǎng)絡(luò)共含有靶蛋白節(jié)點155 個，靶點蛋白間的相互作用關(guān)系連線3 163 條，平均degree 值40.8，選取degree 值、BC、CC 均大于中位數(shù)的節(jié)點作為核心靶點，包括腫瘤壞死因子（TNF）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-1β（IL-1β）、蛋白激酶B1（Akt1）、腫瘤蛋白p53（TP53）、血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（CASP3）、絲裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）、表皮生長因子受體（EGFR）、低氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1A）、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（PTGS2）等33 個核心靶點，見表3。

圖4 靶點PPI 網(wǎng)絡(luò)Fig.4 Network of PPI

表3 核心靶點及其拓撲學(xué)參數(shù)Table 3 Topological parameters of core targets

2.5 GO 功能富集和KEGG 通路富集

將藥物、疾病共同靶點導(dǎo)入Metascape 平臺，進行GO 生物功能分析和KEGG 通路富集分析，以P＜0.01 為篩選標準，獲得GO 生物功能條目2 137條，其中生物過程（BP）1 884 條，主要涉及對無機物的反應(yīng)（response to inorganic substance）、細胞對化學(xué)脅迫的反應(yīng)（cellular response to chemical stress）、對氧化應(yīng)激的反應(yīng)（response to oxidative stress）、對活性氧物種的反應(yīng)（response to reactive oxygen species）、細胞對氧化應(yīng)激的反應(yīng)（cellular response to oxidative stress）等；細胞組分（CC）93條，主要涉及膜筏（membrane raft）、膜微區(qū)（membrane microdomain ）、質(zhì)膜筏（plasma membrane raft）、局部黏連（focal adhesion）、細胞-基質(zhì)結(jié)（cell-substrate junction）等；分子功能（MF）160 條，主要涉及DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（DNAbinding transcription factor binding）、RNA 聚合酶II特異性DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、核受體結(jié)合（nuclear receptor binding）、染色質(zhì)結(jié)合（chromatin binding）、核雌激素受體結(jié)合（nuclear estrogen receptor binding）等，見圖5。

圖5 GO 富集分析Fig.5 GO enrichment analysis

KEGG 通路富集分析共獲得206 個信號通路，主要涉及癌癥信號通路（pathways in cancer）、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化通路（lipid and atherosclerosis）、乙型肝炎（hepatitis B）、IL-17 信號通路（IL-17 signaling pathway）、腫瘤壞死因子信號通路（TNF signaling pathway）等，見圖6。

圖6 KEGG 通路富集分析Fig.6 KEGG pathway enrichment analysis

2.6 “藥物成分–靶點–通路”網(wǎng)絡(luò)

應(yīng)用Cytoscape 3.9.1 軟件構(gòu)建“藥物成分-靶點-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，如圖7 所示，該網(wǎng)絡(luò)共有255個節(jié)點，1 350 條邊。網(wǎng)絡(luò)拓撲學(xué)分析結(jié)果顯示，槲皮素、木犀草素、漢黃芩素、山柰酚、柚皮素等為主要活性成分，見表4。主要靶點的網(wǎng)絡(luò)拓撲學(xué)分析結(jié)果顯示，degree 值最高靶點基因為PTGS2、雌激素受體α（ESR1）、雄激素受體（AR）、一氧化氮合酶2（NOS2）、糖原合酶激酶3B（GSK3B）、絲裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、雌激素受體2（ESR2）、視黃酸受體α（RXRA）等，見表5。

圖7 “藥物成分–靶點–通路”網(wǎng)絡(luò)圖Fig.7 “Drug composition -target -pathway” network diagram

表4 齒痛消炎靈顆?；钚猿煞志W(wǎng)絡(luò)拓撲學(xué)分析（degree 值前10 位）Table 4 Network topology analysis of main active components of Chitong Xiaoyanling Granules(top 10)

表5 靶點網(wǎng)絡(luò)拓撲學(xué)分析結(jié)果（degree 度值前10 位）Table 5 Results of topological analysis of target network(top 10)

2.7 分子對接結(jié)果

將PPI 網(wǎng)絡(luò)中degree 值排名前5 位的靶點與齒痛消炎靈顆粒中degree值靠前的活性成分進行分子對接，見表6。由表可見，分子對接結(jié)合能均＜-5 kJ/mol，對接結(jié)果具有較好的可靠性。選氫鍵數(shù)＞2的結(jié)合構(gòu)象的相互作用進行可視化展示，見圖8。

圖8 分子對接結(jié)果Fig.8 Molecular docking result

表6 分子對接結(jié)合能Table 6 Molecular docking binding energy

3 討論

本研究共篩選出齒痛消炎靈顆粒的264 個潛在成分、預(yù)測出457 個作用靶點，構(gòu)建了“中藥-活性成分-靶點”的網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)degree 值篩選出關(guān)鍵成分；構(gòu)建“化合物-靶點-疾病”網(wǎng)絡(luò)得出治療牙周炎的關(guān)鍵成分和靶點多與炎癥有關(guān)，揭示了齒痛消炎靈顆粒并不是通過單一成分、單一靶點治療牙周炎，而是通過多成分、多靶點的作用方式；治療牙周炎的潛在作用靶點富集得2 137 個GO 條目和206 條KEGG 通路中，包括與炎癥、免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等相關(guān)的條目和通路，如對氧化應(yīng)激的反應(yīng)、DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、局部粘連、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化通路、乙型肝炎、IL-17 信號通路、腫瘤壞死因子信號通路等。通過“藥物-靶點-通路”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建并通過其內(nèi)置工具分析齒痛消炎靈顆粒干預(yù)牙周炎靶點網(wǎng)絡(luò)拓撲學(xué)參數(shù)，得到核心成分及核心作用靶點，再次體現(xiàn)了齒痛消炎靈顆粒含的多種成分，可能通過多靶點干預(yù)牙周炎。最后，經(jīng)過分子對接證實了部分關(guān)鍵成分，可以很好地與部分關(guān)鍵靶點相結(jié)合。

經(jīng)分析得關(guān)鍵成分為槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、柚皮素、木犀草素。其中槲皮素是一種不含碳水化合物的類黃酮，是蔬菜和水果中含量最豐富的類黃酮，具有抗炎、抗菌、抗氧化、鎮(zhèn)痛的作用[22]，Cheng 等[23]通過評估槲皮素對大鼠實驗性牙周破壞的作用，證明槲皮素可以減少脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的破骨細胞形成以及結(jié)扎增強的牙周炎癥和骨質(zhì)流失，得出結(jié)論槲皮素可能對牙周破壞具有改善作用。山柰酚是一種存在于多種植物中的天然黃酮類化合物，具有廣泛的治療特性，如抗氧化、抗癌和抗炎。它的作用機制是誘導(dǎo)細胞凋亡、降低細胞活力、下調(diào)磷酸肌醇3-激酶（PI3K）/Akt 和人類T 細胞白血病/淋巴瘤病毒-I 信號通路，抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標志物的蛋白質(zhì)表達[24]。β-谷甾醇具有抗腫瘤、解熱、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、止痛、抗?jié)兊茸饔肹25]；Valerio 等[26]證實β-谷甾醇通過增強巨噬細胞蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）的活性進而減弱核因子-κB（NF-κB）和信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白1（STAT1）通路的活性，發(fā)揮抗炎作用；Choi等[27]證實β-谷甾醇通過減少NO 的生成，抑制巨噬細胞IL-6 活性，減少TNF-α、IL-1β 等炎性因子的分泌，產(chǎn)生抗炎作用；Liz 等[28]證實，β-谷甾醇通過促進細胞鈣的攝取，抑制髓過氧化物酶、腺苷脫氨酶的活性，抑制IL1β、TNF-α 的水平，發(fā)揮抗炎作用。柚皮素具有抗氧化、抗炎、生物利用度高、毒性小等特點，是一種有效的抗傷害性和抗炎性藥物，可用于疼痛管理治療[29]。木犀草素具有抗炎、抑菌、抗氧化、抗纖維化等廣泛藥理作用，可以降低多種促炎細胞因子、趨化因子的表達還可提高IL-10、IL-13 等抗炎因子表達，調(diào)節(jié)多種炎癥信號通路緩解炎癥反應(yīng)[30]。

本研究通過構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)并對其進行拓撲學(xué)分析，以degree 值、BC、CC 均大于中位數(shù)的節(jié)點作為核心靶點，推測TNF、IL-6、IL-1β、Akt1、TP53、VEGFA、CASP3、MAPK3、EGFR、HIF-1A、PTGS2等靶點在齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的生物過程中起關(guān)鍵作用。其中TNF 通過與IL-1β 和IL-6 協(xié)同誘導(dǎo)VEGF 產(chǎn)生而在血管生成中發(fā)揮作用[31]。TNF-α 主要是來自單核巨噬細胞，是重要的生物活性細胞因子，可加速自由基及興奮性氨基酸合成，提高血管通透性，促進炎性滲出，從而加重炎癥反應(yīng)[30]。IL-6 主要由T 細胞、單核細胞及內(nèi)皮細胞產(chǎn)生，對免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)、炎癥介質(zhì)網(wǎng)絡(luò)有關(guān)鍵作用，可促進患者TNF、IL-1 等的分泌[32]，IL-6 細胞因子家族包括IL-6、IL-11、IL-27、IL-31、制瘤素M（OSM）、白血病抑制因子（LIF）、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）、心肌營養(yǎng)素1（CT-1）和心肌營養(yǎng)素樣細胞因子1（CLCF1），在所有細胞因子家族中，它在引發(fā)與健康和疾病相關(guān)的反應(yīng)方面表現(xiàn)出最高程度的功能多效性和冗余性，IL-6 細胞因子家族的成員在健康和疾病中發(fā)揮著不可或缺的作用，它們通過調(diào)節(jié)各種代謝過程來影響免疫平衡和福祉的維持。在炎癥期間，IL-6 家族細胞因子通過直接作用于先天免疫細胞和間接通過激活駐留在炎癥部位的間質(zhì)組織細胞來調(diào)節(jié)先天免疫[33]。IL-1β 是有效的促炎因子[34]，可以促進T 細胞的Th17 分化，與IL-12 協(xié)同作用，誘導(dǎo)輔助性T 細胞1（Th1）合成IFNG[34]，通過與TNF 和IL-6 協(xié)同誘導(dǎo)VEGF 產(chǎn)生而在血管生成中發(fā)揮作用[33]。

共同靶點富集分析結(jié)果表明齒痛消炎靈顆粒在治療牙周炎的過程中，基因表達對無機物的反應(yīng)、細胞對化學(xué)脅迫的反應(yīng)、細胞對氧化應(yīng)激的反應(yīng)、膜筏、局部黏連、核受體結(jié)合等具有特異性。齒痛消炎靈顆粒治療牙周炎的大多數(shù)潛在靶點與癌癥通路、乙型肝炎、IL-17 信號通路、腫瘤壞死因子信號通路等密切相關(guān)。推測齒痛消炎靈顆粒不僅能夠治療牙周炎等一些炎癥疾病，還可以干預(yù)癌癥、腫瘤等疾病。

綜上所述，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接的方法，對齒痛消炎靈顆粒的多成分、多靶點與牙周炎靶點之間的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系進行全方位分析，推測齒痛消炎靈顆粒中槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、柚皮素、木犀草素為主要活性成分，可能通過TNF、IL-6、IL-1β、Akt1、TP53、VEGFA、CASP3、MAPK3、EGFR、HIF-1A、PTGS2 等關(guān)鍵靶點作用于癌癥信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化通路、乙型肝炎等主要信號通路來干預(yù)牙周炎疾病。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突