文│亓悅（山東省濟(jì)南市萊蕪區(qū)牛泉鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心）

禽傳染性法氏囊?。↖n f e ct i o us bur sa l disease，IBD）最早于1962年在雞上被發(fā)現(xiàn)，以該病第一次有記錄的地理位置命名為“甘布羅病（Gumboro disease）”。該病毒高度穩(wěn)定，即使徹底清潔和消毒，仍在環(huán)境中持續(xù)存在。在自然條件下，禽通過口服途徑感染。病毒從腸道通過吞噬細(xì)胞（最可能是駐留的巨噬細(xì)胞）運(yùn)輸?shù)狡渌M織。盡管在感染的最初幾個(gè)小時(shí)內(nèi)可在肝和腎中檢測到病毒抗原，但最終的病毒復(fù)制主要發(fā)生在法氏囊中。雞是已知惟一易感染傳染性法氏囊病病毒并引起的臨床疾病和特征性病變的鳥類，火雞、鴨子和鴕鳥易感染傳染性法氏囊病病毒，但不易出現(xiàn)臨床疾病。

一、病毒分子生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制

病毒基因組由雙鏈RNA分子的兩個(gè)片段（A和B）組成，總長度為6kb，片段A長度為3.2kb。編碼五種病毒多肽，命名為VP1-5。大片段A編碼VP2-5；較小的片段B編碼VP1，其具有聚合酶和封端酶活性。VP2和VP3是病毒粒子的主要結(jié)構(gòu)蛋白，VP2被認(rèn)為能引起鳥類的保護(hù)性免疫。一直致力于以VP2為基礎(chǔ)研究疫苗，含有VP2的亞單位疫苗和含有VP2插入物或與其他病毒保護(hù)性抗原聯(lián)合的重組載體病毒活疫苗已經(jīng)被開發(fā)出來。這些疫苗大多能引起良好的抗傳染性法氏囊病病毒抗體反應(yīng)，但在對抗強(qiáng)毒性傳染性法氏囊病病毒的挑戰(zhàn)時(shí)，其保護(hù)水平往往不理想。病毒中和試驗(yàn)可將傳染性法氏囊病病毒分為兩種血清型。血清1型含有致病毒株，所有能在雞中引起疾病的病毒都屬于血清1型。而血清2型毒株主要從火雞和雞中分離出來，無致病性。

法氏囊中攜帶IgM+的B淋巴細(xì)胞是IBDV血清型1菌株的靶細(xì)胞，IgM+是病毒的靶點(diǎn)。仔雞孵化后3～6周，當(dāng)法氏囊發(fā)育到最大時(shí)，雞對傳染性法氏囊病病毒高度敏感。1～14日齡的鳥類較不易受感染，它們通常受到母源抗體的保護(hù)，6周以上的受感染鳥類很少出現(xiàn)臨床癥狀。該病的急性期持續(xù)約7～10天，感染導(dǎo)致淋巴和法氏囊被破壞，這是傳染性法氏囊病發(fā)病的主要特征。在法氏囊泡和其他外周淋巴器官如盲腸扁桃體和脾中可以檢測到大量的病毒。該病急性暴發(fā)時(shí)，死亡率在1%～50%之間。1986年，歐洲出現(xiàn)了“極毒”傳染性法氏囊病病毒毒株，導(dǎo)致產(chǎn)蛋仔雞群死亡率高達(dá)70%。在肉雞中，感染可能導(dǎo)致高達(dá)50%的發(fā)病率，但在3～6周齡的雞群中，死亡率很少超過3%。還觀察到商業(yè)產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量下降、蛋殼質(zhì)量和蛋的內(nèi)部品質(zhì)變差。盡管有時(shí)死亡率可能相當(dāng)高，但家禽養(yǎng)殖業(yè)的主要問題是傳染性法氏囊病病毒感染引起的免疫抑制，使禽群體生產(chǎn)表現(xiàn)不佳、繼發(fā)感染的發(fā)病率增加、飼料轉(zhuǎn)化率降低、經(jīng)濟(jì)回報(bào)低。在肉仔雞中，免疫抑制表現(xiàn)為在6～8周生長周期的最后3個(gè)階段，病毒性呼吸道感染的高流行率和氣囊炎、腸敗血癥引起的死亡率升高。仔雞可能對呼吸道疾病（如傳染性支氣管炎和新城疫）的減毒活疫苗產(chǎn)生抗藥性。

除引起死亡和生產(chǎn)損失外，傳染性法氏囊病病毒感染還具有免疫抑制作用，體液免疫和細(xì)胞免疫都受到損害。體液免疫的抑制歸因于病毒對免疫球蛋白產(chǎn)生細(xì)胞的破壞，也可能涉及其他機(jī)制，如改變的抗原呈遞和輔助T細(xì)胞功能。傳染性法氏囊病病毒感染對T細(xì)胞及其功能的影響還需要進(jìn)一步研究。傳染性法氏囊病病毒感染導(dǎo)致T細(xì)胞對有絲分裂原的體外增殖反應(yīng)的短暫抑制，這種抑制是由巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的，巨噬細(xì)胞在感染后的禽體內(nèi)被激活，并表現(xiàn)出許多細(xì)胞因子基因表達(dá)的顯著增強(qiáng)。在發(fā)病早期， T細(xì)胞限制了病毒在法氏囊內(nèi)的復(fù)制，但也通過釋放細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性效應(yīng)加重了法氏囊組織損傷和阻礙了組織恢復(fù)。盡管在病毒感染的急性期，胸腺經(jīng)歷了明顯的萎縮和胸腺細(xì)胞的廣泛凋亡，但沒有證據(jù)表明病毒在胸腺細(xì)胞中復(fù)制，胸腺的大體和微觀損傷很快被修復(fù)，胸腺在病毒感染的幾天內(nèi)恢復(fù)到正常狀態(tài)。

與急性疾病相關(guān)的臨床癥狀包括厭食癥、抑郁癥、羽毛脫落、腹瀉、虛脫和死亡。死亡率差異很大，從100%到可以忽略不計(jì)。病變包括法氏囊萎縮、脫水和胸肌肉色變暗，大腿、胸肌和法氏囊常有出血。黃色滲出液在發(fā)病后2～3天覆蓋法氏囊，法氏囊的尺寸和重量在3天時(shí)開始增加，能達(dá)到正常重量的兩倍（4天），之后尺寸開始減小，并恢復(fù)到正常重量（5天）。當(dāng)法氏囊恢復(fù)到正常大小時(shí)，滲出液消失，在第8天開始萎縮。

二、 檢測技術(shù)

對于傳染性法氏囊病病毒的野毒株和疫苗株的區(qū)分至關(guān)重要，可通過多種技術(shù)實(shí)現(xiàn)，包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、針對VP2區(qū)單核苷酸多態(tài)性的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和限制性片段長度多態(tài)性（其中分析了病毒基因型特異性限制性酶位點(diǎn)）結(jié)合RT-PCR的使用。此外，已成功開發(fā)和測試了泛病毒檢測芯片，用于病毒的血清/基因分型，并有可能在現(xiàn)場作為監(jiān)測工具使用。

三、疫苗進(jìn)展

疫苗包括減毒活疫苗、滅活疫苗和免疫復(fù)合疫苗（一種來自特定病原體感染的雞的高免疫血清和適應(yīng)胚胎的活病原體的混合物）。應(yīng)用途徑不同，蛋清給藥、飲用水添加和肌內(nèi)注射。通過在飲用水中加入疫苗以防止新孵出的雛禽感染，或在18周齡時(shí)對種禽口服活病毒疫苗，并在產(chǎn)卵前注射滅活疫苗油佐劑。如果雛雞的母源抗體水平低或不一致，則在1～2周齡時(shí)接種減毒活疫苗。

越來越多的人擔(dān)心，密集使用針對傳染性法氏囊病病毒的減毒活疫苗可能會(huì)導(dǎo)致這種病原體由于潛在的突變而使毒力返強(qiáng)。家禽業(yè)對接種疫苗的家禽暴發(fā)疾病的反應(yīng)是使用毒力更強(qiáng)的疫苗，傳染性法氏囊病病毒具有免疫抑制作用，因此疫苗可能對易感基因型或被母體抗體保護(hù)不良的雛禽有害。這些問題引起了對亞單位疫苗開發(fā)的興趣，其中一種或多種編碼特定病原體抗原的基因由重組DNA疫苗表達(dá)。

與傳統(tǒng)疫苗相比，構(gòu)建和純化質(zhì)粒DNA相對快速和容易。DNA疫苗接種為遞送保護(hù)性抗原提供了幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，DNA疫苗模擬自然病毒感染，因?yàn)樗鼈兙幋a的抗原保持了其天然結(jié)構(gòu)。可以單劑量接種多組分疫苗，沒有回歸野生型毒株的風(fēng)險(xiǎn)。雛禽可以在母體抗體干擾最小的情況下進(jìn)行免疫。DNA疫苗在高環(huán)境溫度下穩(wěn)定，無需維持冷鏈。表達(dá)VP2或VP4-2-3多蛋白（A段）的DNA疫苗已被用作質(zhì)粒DNA疫苗，產(chǎn)生了不同程度的保護(hù)，從部分保護(hù)到完全保護(hù)。相比之下，含有多蛋白基因的DNA疫苗通常比含有單個(gè)VP2基因的DNA更具保護(hù)性。幾種給藥途徑（肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、口服和眼藥水途徑）中，肌內(nèi)注射途徑是惟一提供保護(hù)和產(chǎn)生抗病毒抗體反應(yīng)的途徑。相反，有報(bào)道指出局部施用DNA疫苗可誘導(dǎo)IgA和IgM抗病毒抗體。然而，DNA疫苗是否總能克服母體抗體仍有待確定。

單獨(dú)使用DNA疫苗可以在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)T細(xì)胞反應(yīng)，一些策略被考慮用于改進(jìn)DNA疫苗，如細(xì)胞因子增強(qiáng)。預(yù)防性免疫后病原體的成功消除在很大程度上取決于宿主免疫系統(tǒng)識別何時(shí)需要激活以及如何最有效地做出反應(yīng)的能力，最好是對健康組織的損傷最小。免疫佐劑是控制適當(dāng)類型的抗原特異性免疫應(yīng)答的選擇性誘導(dǎo)的關(guān)鍵成分。因此，疫苗佐劑對于刺激宿主對缺乏免疫原性的抗原的免疫反應(yīng)至關(guān)重要。使用特異性細(xì)胞因子作為疫苗佐劑可增強(qiáng)免疫原性，而不會(huì)產(chǎn)生非特異性細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的副作用。它們可能通過直接向適應(yīng)性效應(yīng)T或B細(xì)胞提供信號或通過間接調(diào)節(jié)其他必需信號分子的產(chǎn)生而起作用。已使用的細(xì)胞因子包括粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GMCSF）、巨噬細(xì)胞（CSF、IL-1α/β和IFN-γ）、增強(qiáng)T細(xì)胞免疫應(yīng)答（IL-2、IL-12、IL-6、IFN-γ），增強(qiáng)B 細(xì)胞體液免疫應(yīng)答（G MCSF、IL-1α/β、IL-2、IL-6、IFN-γ、IFN-α和IFN-β）。

多種病毒已被用作IBDV的載體，例如雞痘病毒、馬立克氏病病毒、Semliki Forest病毒、桿狀病毒、禽腺病毒和火雞皰疹病毒等。重組雞痘病毒疫苗已用于非鳥類物種，雞痘IBD1（fpIBD1）疫苗能否接種成功取決于攻擊病毒的滴度，因?yàn)楦叩味鹊墓舨《灸軌蚩朔pIBD1誘導(dǎo)的保護(hù)作用，而低滴度的攻擊則不能。與傳統(tǒng)的減毒活疫苗和滅活活疫苗相比，重組疫苗已取得了成功，這取決于給藥途徑、疫苗滴度以及病毒的攻擊劑量，而沒有殘余毒性或誘發(fā)法氏囊病的風(fēng)險(xiǎn)。重組疫苗可以提供針對多種傳染源的保護(hù)（通過將其特異性免疫原性基因插入單個(gè)載體構(gòu)建的疫苗構(gòu)建體中），從而節(jié)省勞動(dòng)力成本、疫苗接種成本和對接種群體的應(yīng)激。