張鴻雁 陳盈營(yíng) 周雁微 林麗靜 劉鍇棟

關(guān)鍵詞：火龍果；串珠鐮刀菌；鏈霉菌；拮抗作用

火龍果又稱仙蜜果、紅龍果、情人果，屬仙人掌科（Cactaceae）量天尺屬（Hylocereus）或蛇鞭柱屬（Seleniereus），原產(chǎn)于熱帶中美洲地區(qū)，20 世紀(jì)90 年代初引入我國(guó)臺(tái)灣后被馴化試種，后陸續(xù)在海南、廣西、廣東、福建等地推廣種植?；瘕埞粌H有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，還具有抗腫瘤、抗氧化、調(diào)節(jié)激素及解毒等功效。隨著火龍果種植面積的不斷擴(kuò)大，銷售儲(chǔ)藏量的增加，儲(chǔ)藏病害種類也越來(lái)越多，發(fā)病程度也越來(lái)越重。李敏等[1] 發(fā)現(xiàn)膠孢炭疽菌（ Colletotrichum gloeosporioides）、MEETUM 等[2]發(fā)現(xiàn)亞洲炭疽菌（C.aenigma）和暹羅炭疽菌（C. siamense）、LI 等[3]發(fā)現(xiàn)平頭炭疽菌（C. truncatum）均可引起火龍果炭疽病。姚昇華等[4] 發(fā)現(xiàn)仙人掌平臍蠕孢（Bipolaris cactivora），鄭樊等[5]發(fā)現(xiàn)雙間柱頂孢（Scytalidium dimidiatum）是火龍果果腐病的主要病原菌，GUO 等[6]發(fā)現(xiàn)桃吉爾霉（Gilbertellapersicaria）亦可引起火龍果果腐病。王會(huì)會(huì)等[7]發(fā)現(xiàn)引起火龍果潰瘍病的病原菌是新暗色柱節(jié)孢（Neoscytalidium dimidiatum）。

火龍果軟腐病是火龍果儲(chǔ)藏時(shí)期的主要病害。發(fā)病部位變褐軟腐，甚至全部腐敗，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[8]。崔志婧等[9]發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌（F.oxysporum）是上海進(jìn)口火龍果軟腐病最主要的病原真菌。林珊宇等[10]發(fā)現(xiàn)木賊鐮刀菌（F. equiseti）亦能引起火龍果軟腐病。但未見串珠鐮刀菌（F.verticillioides）引起火龍果軟腐病的報(bào)道。對(duì)火龍果軟腐病病原菌的分離鑒定可對(duì)火龍果儲(chǔ)藏病害的防治提供理論依據(jù)。

針對(duì)火龍果果實(shí)病害防治，目前有采用化學(xué)防治[11]、生物防治[12]和天然產(chǎn)物防治[13]等方法，但仍以化學(xué)防治為主。因化學(xué)農(nóng)藥具有高效、快速、方便的特點(diǎn)，人們?cè)诜乐尾『^程中高頻使用化學(xué)農(nóng)藥，從而使病原菌的抗藥性增加，防治效果減弱，環(huán)境微生態(tài)失衡。另外，化學(xué)農(nóng)藥在田間及水果表面不能完全降解而導(dǎo)致的農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染等問題也日益嚴(yán)重，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們對(duì)食品質(zhì)量安全越來(lái)越重視，化學(xué)農(nóng)藥的問題也越來(lái)越受到關(guān)注。人們期待一種綠色、安全、環(huán)保的防治方法。而生物防治就是一種有效、安全的病害防治途徑，也是未來(lái)病蟲害防治的發(fā)展趨勢(shì)。

水果儲(chǔ)藏期病害的生防菌有多種，包括細(xì)菌[14]、放線菌[15]、霉菌[16]和酵母菌[17]等，但火龍果果實(shí)病害生物防治的研究較少。曾金興等[18]利用解淀粉芽孢桿菌10075 拮抗2 株火龍果致腐菌，防腐效果高于30%。張振華等[19]從11 個(gè)不同生境分離出15 株具有拮抗活性的細(xì)菌，其中有2 株溫室防效接近50%。陳迪等[20]發(fā)現(xiàn)7 株木霉菌對(duì)3 種火龍果病原菌均有一定的抑制作用。而未見利用放線菌防治火龍果儲(chǔ)藏期病害的相關(guān)報(bào)道。本研究從發(fā)生軟腐病的火龍果病果中分離純化病原菌，利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)進(jìn)行鑒定，以鏈霉菌為生物拮抗菌，研究其發(fā)酵濾液對(duì)火龍果軟腐病的防治效果，以期為防止火龍果儲(chǔ)藏期軟腐病病害發(fā)生，提高儲(chǔ)藏保鮮效果提供一定的理論基礎(chǔ)和防控途經(jīng)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試火龍果 采自廣東省湛江市麻章區(qū)金綠寶生態(tài)農(nóng)場(chǎng)。選取新鮮健康、無(wú)機(jī)械損傷、大小和成熟度一致的新鮮紅寶石火龍果，進(jìn)行常規(guī)儲(chǔ)存。儲(chǔ)存期間挑選典型軟腐病發(fā)病火龍果進(jìn)行試驗(yàn)。

1.1.2 培養(yǎng)基 病原菌分離、純化、活化和保存采用馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。拮抗菌為本實(shí)驗(yàn)室保藏的拮抗放線菌， 皆為鏈霉菌屬（ Streptomyces spp. ） ， 標(biāo)記為L(zhǎng)WL1827 、LWL1828、LWL1829 等共26 株。拮抗菌的活化、平板涂布和發(fā)酵液制備采用高氏一號(hào)培養(yǎng)基。

1.1.3 主要試劑和設(shè)備 dNTP 和LA Taq TM 聚合酶[寶生物工程（北京）有限公司]，ITS 和EF1-α引物（上海派森諾生物科技股份有限公司），Axyprep DNA 凝膠回收試劑盒[愛思進(jìn)生物技術(shù)（杭州）有限公司]，Neofuge 13R 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（上海力申科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 病原菌的分離鑒定 （1）病原菌菌株的獲得。采用組織分離法，切取發(fā)病火龍果病健交界處3 mm×3 mm 的組織塊，利用75%酒精和1%次氯酸鈉溶液消毒，無(wú)菌水清洗，無(wú)菌濾紙吸干水分，置于PDA 培養(yǎng)基，28 ℃黑暗培養(yǎng)5～7 d。用竹簽挑取邊緣菌絲，劃線純化，經(jīng)3 次繼代培養(yǎng)后，接種于PDA 斜面培養(yǎng)基，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）病原菌致病性測(cè)定。采用無(wú)傷接種和針刺接種法。將健康火龍果清洗干凈，75%酒精表面消毒。針刺接種：用滅菌竹簽刺穿火龍果表面大約直徑5 mm、深度5 mm 的傷口，將5 mm 病原菌瓊脂塊接種至傷口部位，置于無(wú)菌袋中，28 ℃培養(yǎng)。接種PDA 瓊脂塊為對(duì)照，重復(fù)3 次。不刺傷為無(wú)傷接種。定期觀察接種處是否有病害發(fā)生，觀察并記錄病害發(fā)生時(shí)間及癥狀。對(duì)發(fā)病火龍果進(jìn)行組織分離，根據(jù)柯赫法則確定是否為致病菌。

（3）病原菌形態(tài)特征觀察。于PDA 培養(yǎng)基上觀察病原菌菌落特征，如菌落形態(tài)、顏色、生長(zhǎng)速度、菌絲形態(tài)等。插片法顯微鏡觀察病原菌的顯微特征，菌絲形態(tài)，大、小分生孢子產(chǎn)生情況及形態(tài)，厚垣孢子的有無(wú)和產(chǎn)生方式，產(chǎn)孢細(xì)胞類型等。參照《真菌鑒定手冊(cè)》[21]進(jìn)行鑒定。

（4）病原菌的分子鑒定。病原真菌rDNA-ITS及EF1-α 序列測(cè)定及系統(tǒng)發(fā)育分析，依照試劑盒說明書進(jìn)行病原菌DNA 提取，分別用ITS 引物（ITS1： 5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'， ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3' ） 和EF1-α引物（ EFl-728F： 5'-CATCGAGAAGTTCGAGAAGG-3'， EF1-986R： 5'-TACTTGAAGGAACCCTTACC-3'）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，產(chǎn)物回收。委托上海派森諾生物科技有限公司進(jìn)行序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果在NCBI 的GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST 同源序列比對(duì)，選取同源性較高及形態(tài)相近的菌株序列， 經(jīng)拼接后， 用MEGA7.0 中的鄰接法（neighbor-joining， NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，使用bootstraps 進(jìn)行自檢，1000 次重復(fù)以檢驗(yàn)進(jìn)化樹置信度。通過親緣關(guān)系分析確定病原菌的分類地位。

1.2.2 拮抗菌的拮抗防病作用 （1）平板抑菌試驗(yàn)。采用瓊脂塊法，用滅菌竹簽從斜面試管中取少量放線菌，均勻涂布于高氏1 號(hào)培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)7 d。用直徑5 mm 的無(wú)菌打孔器打成菌餅，轉(zhuǎn)接至涂布病原菌的平皿上，菌面朝下，重復(fù)3次，25 ℃培養(yǎng)3～5 d，觀察，采用十字交叉法測(cè)定抑菌圈直徑及抑菌圈透明度。

無(wú)菌發(fā)酵濾液的制備。將供試放線菌接種到液體培養(yǎng)基中，28 ℃、150 r/min 振蕩培養(yǎng)9 d。發(fā)酵液4000×g 離心5 min 后，用0.22 μm 滅菌微孔濾膜過濾除菌，得無(wú)菌濾液。

抑菌率測(cè)定。采用生長(zhǎng)速率法。將濾液配制成1∶1、1∶5、1∶10、1∶50、1∶100（V/V）不同濃度上清液與PDA 培養(yǎng)基混合倒平板，以不加無(wú)菌濾液的PDA 培養(yǎng)基為對(duì)照。用5 mm 無(wú)菌打孔器取病原菌菌餅，置于PDA 平板中央，重復(fù)3 次，25 ℃培養(yǎng)7 d，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑菌率。確定最佳拮抗菌及濾液濃度，用于后續(xù)試驗(yàn)。抑制率=（對(duì)照菌落直徑–處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100%。

（2）火龍果接種試驗(yàn)。選取健康火龍果，經(jīng)75%酒精和無(wú)菌水各擦拭3 次。選取對(duì)峙試驗(yàn)拮抗效果較好的拮抗菌株制備不同濃度的無(wú)菌發(fā)酵濾液，噴涂火龍果、晾干。將病原菌孢子懸浮液（孢子濃度為1.0×107 個(gè)/mL）噴涂火龍果，以空白培養(yǎng)基和清水為對(duì)照，3 次重復(fù)。處理火龍果室溫3～11 d，每隔2 d 觀察，計(jì)算病情指數(shù)（diseaseindex， DI）和防效（control efficacy， CE）。病情指數(shù)=（發(fā)病級(jí)別×該級(jí)別發(fā)病數(shù)）/（調(diào)查總個(gè)數(shù)×最高病級(jí)別）×100。防效=（對(duì)照病情指數(shù)?處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100%。

判定標(biāo)準(zhǔn)[22]：無(wú)褐變?yōu)? 級(jí)；褐變面積小于20%為1 級(jí)；褐變面積在20%～50%之間為2 級(jí)；褐變面積在50%～75%之間為3 級(jí)；褐變面積大于75%為4 級(jí)；整果褐變?yōu)? 級(jí)。

火龍果經(jīng)無(wú)菌濾液處理后，參考曹建康等[23]的方法對(duì)果實(shí)中多酚氧化酶（PPO）、過氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性進(jìn)行測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2019 軟件記錄、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并進(jìn)行基礎(chǔ)分析，采用SPSS 19.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Duncans 多重比較進(jìn)行顯著性分析（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌鑒定

從火龍果軟腐病發(fā)病組織中分離獲得病原菌，得到純培養(yǎng)物標(biāo)記為ZYW18。

2.1.1 病原菌的形態(tài)學(xué)分析 將病原菌ZYW18接種于PDA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)觀察菌落形態(tài)。發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)至第3 天，菌落直徑達(dá)到30 mm；第5 天菌落直徑達(dá)50 mm；第7 天菌落直徑達(dá)80 mm，菌落圓形，氣生菌絲初期為白色，疏松，棉絮狀，邊緣具有卷毛狀，逐漸變?yōu)闇\黃色。菌落背面米黃色（圖1A）。大型分生孢子罕見，鐮刀狀，中等偏窄，兩端稍尖，略微向內(nèi)彎曲，多數(shù)單隔膜，大小1.5～3.0 μm×20.0～30.0 μm。小型分生孢子呈鏈狀排列，橢圓形或圓錐形，大小為5.0～12.0 μm×1.5～2.5 μm（圖1B）。根據(jù)病原菌菌落形態(tài)和分生孢子特征，初步鑒定為鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

2.1.2 致病性測(cè)定 將病原菌ZYW18 回接于健康火龍果上，經(jīng)無(wú)傷和針刺接種進(jìn)行致病性測(cè)定（圖1C）。發(fā)現(xiàn)2 種接種方法均出現(xiàn)癥狀。病原菌接種5 d 后病斑直徑達(dá)到32.5 mm，果肉褐變，表層覆蓋一層白色菌絲，后期菌絲范圍逐漸擴(kuò)大，果肉開始出現(xiàn)軟爛，侵染部位組織軟化褐變明顯。癥狀與自然發(fā)病火龍果相符。從回接后的發(fā)病部位病健交界處取得組織塊，分離得到病原菌與接種病原菌一致。證明接種的病原菌是引起火龍果軟腐病的致病菌。

2.1.3 病原菌的系統(tǒng)發(fā)育分析 病原菌菌株ZYW18 的ITS 和EF1-α PCR 產(chǎn)物測(cè)序后，分別獲得長(zhǎng)度為540、590 bp 的擴(kuò)增片段，產(chǎn)物純化后測(cè)序，將rDNA-ITS 和EF1-α 基因序列提交到GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)（登錄號(hào)分別為ON012775 和ON087601），經(jīng)數(shù)據(jù)比對(duì)分析后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2）。ITS 序列聚類結(jié)果顯示，ZYW18 與F. verticillioides LAPEMI10.2015（ITS 和EF1-α 登錄號(hào)分別為KR052812 和MG195125.1）相似度達(dá)99%～100%，遺傳距離最小，聚為一類，支持率為99%。結(jié)合形態(tài)特征和分子鑒定結(jié)果，表明引起火龍果軟腐病的病原菌為串珠鐮刀菌（F. verticillioides）。

2.2 拮抗性鏈霉菌對(duì)病原菌的拮抗作用及防效

2.2.1 拮抗作用 在PDA 平板涂布接種病原菌ZYW18，接種拮抗組織塊，篩選拮抗菌株（圖3，表1）。由表1 可知，26 株拮抗性鏈霉菌中，抑菌效果較明顯的有5 株。其中抑菌圈直徑較大，抑菌效果較明顯的菌株為L(zhǎng)WL1827，抑菌圈直徑為（18.32±2.13）mm，且抑菌圈透明，抑制徹底，與其他菌株相比差異顯著；其次為L(zhǎng)WL1828，抑菌圈直徑為（12.55±1.56）mm 。LWL1829 和LWL1818 抑菌不徹底，抑菌圈不透明。

5 株菌不同濃度的無(wú)菌發(fā)酵濾液對(duì)病原菌ZYW18 的抑菌作用見表1。由表1 可知，抑菌率最高的為L(zhǎng)WL1827，1∶5、1∶10、1∶50（V/V）不同濃度無(wú)菌發(fā)酵濾液的抑菌率分別為91.23%±3.11%、87.21%±3.22%、和80.22%±2.03%，與其他菌相應(yīng)濃度相比差異顯著；其次為L(zhǎng)WL1828，其濃度為1∶10 的抑菌率最高，為45.03%±1.98%；其他3 株菌抑菌效果相當(dāng)，抑菌率相對(duì)較小。抑菌效果最弱的是LWL1829。

由圖3 和表1 的拮抗試驗(yàn)可知，對(duì)病原菌ZYW18 的拮抗效果最佳的為鏈霉菌LWL1827（Streptomyces sp. LWL1827），選取1∶5、1∶10、1∶50（V/V）不同濃度進(jìn)行火龍果接種試驗(yàn)。

2.2.2 防治效果 噴涂菌株LWL1827 的發(fā)酵濾液后，常溫儲(chǔ)藏3、5、7、9、11 d。不同濃度和不同時(shí)間的火龍果病情指數(shù)（DI）和防治效果（CE）均有差異（表2）。不同儲(chǔ)藏時(shí)間的培養(yǎng)基對(duì)照和清水對(duì)照的病情指數(shù)相當(dāng)，差異不顯著。由表2 可知，儲(chǔ)藏3 d，處理和對(duì)照火龍果均未發(fā)病；儲(chǔ)藏5 d，培養(yǎng)基對(duì)照和清水對(duì)照火龍果的病情指數(shù)分別為26.30±1.95 和23.70±4.23，顯著高于LWL1827 發(fā)酵濾液處理的病情指數(shù)，濃度為1∶10 的防治效果較好，為53.59%±4.21%；儲(chǔ)藏7 d 和9 d 的病情指數(shù)也顯著低于培養(yǎng)基對(duì)照和清水對(duì)照；儲(chǔ)藏11 d，培養(yǎng)基對(duì)照和清水對(duì)照火龍果病情指數(shù)已分別高達(dá)85.11±5.36 和82.55±6.43，濾液處理的病情指數(shù)均低于50.00%，濃度為1∶50的防治效果最高為51.54%±3.06%，其次是濃度為1∶10 的防治效果43.06%±2.88%?？梢?，隨著儲(chǔ)藏時(shí)間延長(zhǎng)，拮抗菌株發(fā)酵濾液處理的火龍果病情指數(shù)均顯著降低。同時(shí)，不同稀釋度發(fā)酵濾液的防病效果亦有所下降，其中濃度為1∶10 的防治效果下降幅度較小。

2.2.3 拮抗菌株對(duì)火龍果抗性酶活性的影響 火龍果經(jīng)濃度為1∶10 的拮抗菌株LWL1827 發(fā)酵液處理不同時(shí)間后，火龍果果實(shí)的抗性酶活性變化見表3。由表3 可知，3 種抗性酶PPO、POD和PAL活性均呈先逐漸上升，后逐漸下降的趨勢(shì)，與對(duì)照相比差異顯著。第7 天3 種酶活性均達(dá)峰值，PPO、POD 和PAL 活性分別為（1.90±0.15）、（3.88±0.55）、（1.48±0.43）U/g。由表中還可看出，菌株LWL1827 發(fā)酵濾液處理后火龍果3 種抗性酶活性均高于對(duì)照。對(duì)于PPO，儲(chǔ)藏9 d 和11 d的酶活性分別是對(duì)照的2.31 倍、2.28 倍；對(duì)于POD，儲(chǔ)藏7 d 的酶活性是對(duì)照的2.34 倍；對(duì)于PAL，儲(chǔ)藏3、5、7、9、11 d 的酶活性分別為對(duì)照的1.85 倍、2.20 倍、2.43 倍、2.79 倍、2.80 倍?？梢钥闯觯瑸V液處理后抗性酶活性的下降變緩。

3 討論

軟腐病作為火龍果儲(chǔ)藏期重要病害，是火龍果采后腐爛的主要原因，嚴(yán)重影響火龍果的儲(chǔ)運(yùn)品質(zhì)，縮短貨架期，造成較大經(jīng)濟(jì)損失?；瘕埞浉〔≡蔫b定，以及該病害的生物防治對(duì)于火龍果儲(chǔ)運(yùn)和綠色保鮮具有重要意義。

鐮刀菌（Fusarium spp.）是真菌中的一個(gè)龐大的家族，普遍存在于土壤及動(dòng)、植物有機(jī)體內(nèi)，世界各地均有分布，是危害最嚴(yán)重的植物病原真菌[24]。一種鐮刀菌往往可侵染不同種的植物，同種植物某種病害也會(huì)由于植物產(chǎn)地和來(lái)源不同，環(huán)境的差異，由不同鐮刀菌侵染，或者不同優(yōu)勢(shì)種的鐮刀菌復(fù)合侵染。本研究由火龍果軟腐病患病組織中獲得病原菌為串珠鐮刀菌（F. verticillioides）， 不同于文獻(xiàn)中尖孢鐮刀菌（ F. oxysporum）[9]和木賊鐮刀菌（F. equiseti）[10]，其原因可能是產(chǎn)地和來(lái)源不同，侵染的鐮刀菌或優(yōu)勢(shì)種不同所致。

串珠鐮刀菌是赤霉屬的重要植物病原真菌，可侵染農(nóng)作物、果樹、蔬菜、花卉等100 多種植物，引起根腐、莖腐、果腐等多種癥狀，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[25]。串珠鐮刀菌還可產(chǎn)生多種毒素，污染食品、飼料，危害人和動(dòng)物健康和安全[26]。已有串珠鐮刀菌侵染蘋果[27]、西瓜[28]、香蕉[29]等的報(bào)道，而未見侵染火龍果的相關(guān)報(bào)道。本研究通過形態(tài)學(xué)鑒定和分子鑒定，將火龍果軟腐病病原菌ZYW18 確定為串珠鐮刀菌（F. verticillioides），為首次報(bào)道。菌株ZYW18 在PDA培養(yǎng)基常溫培養(yǎng)7 d ， 菌落直徑即可以達(dá)到80 mm，嚴(yán)重縮短火龍果的保鮮期。

在植物病害生防菌的研究和應(yīng)用中，放線菌因其資源豐富，拮抗活性次級(jí)代謝產(chǎn)物種類繁多，使其具有巨大的開發(fā)潛力。鏈霉菌屬（Streptomyces spp.）為放線菌科中最大的一個(gè)屬，在土壤、植物根際、根內(nèi)均有分布，是天然活性物質(zhì)的重要來(lái)源。鏈霉菌能夠產(chǎn)生多種抗生素和酶類，對(duì)病原菌具有拮抗作用[30-32]。另外，鏈霉菌還可以提高植物體內(nèi)抗性酶的活性，降低丙二醛含量，提升脯氨酸和可溶性蛋白質(zhì)含量，提高植物對(duì)外界環(huán)境的抗性[33]。張凱等[34]研究發(fā)現(xiàn)栗褐鏈霉菌（S. badius）對(duì)芒果炭疽病病原菌膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）具有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)染病果實(shí)有良好的防效。傅雁輝等[35]發(fā)現(xiàn)鏈霉菌JD121 能增強(qiáng)柑橘抗病性，降低腐爛率，提高保鮮效果。而尚無(wú)利用放線菌，尤其是利用鏈霉菌對(duì)火龍果軟腐病進(jìn)行生物防治的相關(guān)報(bào)道。本研究篩選得到鏈霉菌LWL1827，經(jīng)平板抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌株拮抗效果較好。將LWL1827發(fā)酵濾液經(jīng)不同濃度稀釋后處理火龍果，發(fā)現(xiàn)濃度為1∶10 的發(fā)酵濾液能降低火龍果軟腐病的病情指數(shù)，提高防治效果。同時(shí)，濃度為1∶10 的發(fā)酵濾液可以提高火龍果抗性酶活性，從而提高其抗病能力。本研究表明菌株LWL1827 及其發(fā)酵液產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)可以抑制病原菌的生長(zhǎng)，同時(shí)可以提高火龍果抗性酶活力，使火龍果軟腐病病斑的發(fā)展得到控制，提高了火龍果對(duì)病原菌的抵抗能力，降低了病情指數(shù)，提高了防效。因此，可將濃度為1∶10 的LWL1827 發(fā)酵濾液噴涂于火龍果果實(shí)表面，作為火龍果儲(chǔ)藏期間軟腐病的防治措施。但因火龍果主要用于食用，拮抗菌LWL1827 及代謝產(chǎn)物的毒理學(xué)、生物安全性有待進(jìn)一步研究。平板抑菌試驗(yàn)可以直觀地反映病原菌與拮抗菌的相互作用，表現(xiàn)拮抗菌抑菌能力的強(qiáng)弱，作為初步篩選的依據(jù)，但其忽視了拮抗菌-病原菌-植物三者的相互作用。通過火龍果接種試驗(yàn)可以更全面地體現(xiàn)三者互作，更準(zhǔn)確地檢驗(yàn)拮抗菌的拮抗能力。本研究利用拮抗菌發(fā)酵液對(duì)病情指數(shù)、防效和抗性酶活性的影響，體現(xiàn)了拮抗菌作用于病原菌和火龍果果實(shí)，對(duì)二者均產(chǎn)生作用。但拮抗菌、病原菌與火龍果間的互作機(jī)理有待進(jìn)一步研究。