丁然然，楊明霞，何承輝，馬美玲

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830054；2.烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830099；3.新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆 烏魯木齊 830004）

消渴健脾膠囊由蒼術(shù)、白術(shù)等13 味中藥組成，具有行氣和胃、燥濕健脾等功效，為烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)許公平主任的臨床經(jīng)驗(yàn)方，至今已有二十余年臨床應(yīng)用歷史，用于治療脾虛濕盛型2 型糖尿?。?-2］，可調(diào)節(jié)糖尿病患者炎性因子，減輕胰島素抵抗，改善形體肥胖、身體困倦、頭脹、脈沉等脾虛濕盛型證候，提高生活質(zhì)量［3-5］。為了滿足醫(yī)院臨床需要，本實(shí)驗(yàn)以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用傳統(tǒng)工藝配置中藥制劑實(shí)施備案管理公告（2018 年第19 號(hào)） 的要求，開(kāi)展消渴健脾膠囊臨床前藥學(xué)研究工作。另外，課題組前期曾將制備工藝更改為部分藥材水提取，部分藥材乙醇提取，部分藥材提取揮發(fā)油，但專家認(rèn)為消渴健脾膠囊原工藝已有多年臨床實(shí)踐支撐，療效顯著，安全可靠，建議維持原工藝，故本實(shí)驗(yàn)在原制備工藝基礎(chǔ)上進(jìn)行［6-7］。

查閱文獻(xiàn)［8-12］ 發(fā)現(xiàn)，消渴健脾膠囊中綠原酸、葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、落新婦苷、丹酚酸B、大豆苷元是主要降糖活性成分，并且含量較高，常作為質(zhì)量控制指標(biāo)。因此，本實(shí)驗(yàn)建立HPLC 法同時(shí)測(cè)定上述成分的含量，以期控制消渴健脾膠囊中茵陳、葛根、車前子、土茯苓、丹參質(zhì)量，并為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 1260、Agilent 1200 型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；KQ-500DE 型超聲波清洗機(jī)（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；WP-UP-IV-10 Water Purifier 型實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司）；DZF-6090 型真空干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥材、對(duì)照品 茯苓、梔子均購(gòu)自新疆眾安康中藥飲片有限公司（批號(hào)20200802、20200403）；木瓜、丹參、茵陳均購(gòu)自安徽濟(jì)善堂中藥科技有限公司（批號(hào)200801、200901、200501）；蒼術(shù)、大黃均購(gòu)自安徽人民中藥飲片有限公司（批號(hào)190701、190801）；萊菔子、厚樸均購(gòu)自新疆鴻德堂永盛藥業(yè)有限公司（批號(hào)200601、200901）；葛根、白術(shù)均購(gòu)自安徽家和中藥科技股份有限公司 （批號(hào)191104、200601）；車前子購(gòu)自毫州市華云中藥飲片有限公司（批號(hào)190601）；土茯苓購(gòu)自安國(guó)市祁澳中藥飲片有限公司（批號(hào)2007839113），經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)田樹(shù)革教授鑒定為正品。落新婦苷對(duì)照品購(gòu)自上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心（批號(hào)30-2017）；梔子苷對(duì)照品、梔子對(duì)照藥材、大黃酚對(duì)照品、大黃對(duì)照藥材、丹參對(duì)照藥材、葛根素對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院（批號(hào)120986-201610、120986-201510、110758-201507、120902-201311、121117-201608、110752-201813）；大豆苷、大豆苷元、毛蕊花糖苷、丹酚酸B 、綠原酸對(duì)照品均購(gòu)自四川省維克奇生物科技有限公司 （批號(hào)wkq21041310、wkq21120208、wkq20042004、wkq 21010705、wkq20081302）。

1.3 試劑與藥物 消渴健脾膠囊 （批號(hào)20210103，純度82%） 由烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供。甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為自制超純水。

2 制備工藝研究

2.1 落新婦苷含量測(cè)定 采用HPLC 法。

2.1.1 色譜條件 COSMOSIL packed Column 5C18-MS-Ⅱ色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相甲醇-0.1% 冰醋酸 （37 ∶ 63）；體積流量1.0 mL／min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)291 nm。理論塔板數(shù)按落新婦苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5 000［13］。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 落新婦苷HPLC 色譜圖Fig．1 HPLC chromatograms of astilbin

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 取落新婦苷對(duì)照品適量，甲醇溶解，搖勻，稀釋至刻度，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 按本品處方比例，稱取蒼術(shù)、茵陳、梔子、丹參、土茯苓、萊菔子、厚樸、木瓜適量，置于2 000 mL 量瓶中，加10 倍量水，置于調(diào)溫電熱套中加熱回流提取1 h，提取液過(guò)濾后置于2 000 mL 量瓶中，濾渣加8 倍量水提取45 min，提取液過(guò)濾后置于2 000 L量瓶中，合并提取液，加水定容至刻度，上清液用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 陰性樣品溶液制備 按本品處方比例，制成缺土茯苓的陰性樣品，按“2.1.3” 項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2 梔子苷含量測(cè)定 采用HPLC 法。

2.2.1 色譜條件 COSMOSIL packed Column 5C18-MS-Ⅱ色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈-水（13 ∶87）；體積流量1.0 mL／min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm。理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)，應(yīng)不低于1 500［14］。色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 梔子苷HPLC 色譜圖Fig．2 HPLC chromatograms of gardenoside

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 取梔子苷對(duì)照品適量，甲醇溶解，搖勻，稀釋至刻度，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取“2.1.3” 項(xiàng)下提取液適量，上清液用0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液制備 按本品處方比例，制成缺梔子的陰性樣品，按“2.1.3” 項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 水浸出物含量測(cè)定 精密吸取提取液50 mL，置于干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置于105 ℃烘箱中干燥3 h 至恒定質(zhì)量，取出，迅速置于干燥器中，冷卻，稱定質(zhì)量，計(jì)算含量。

2.4 單因素試驗(yàn) 以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為影響因素，梔子苷、落新婦苷、水浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，最大權(quán)重分別設(shè)定為40、40、20，計(jì)算綜合評(píng)分，公式為綜合評(píng)分＝（梔子苷含量／最大梔子苷含量） ×40+ （落新婦苷含量／最大落新婦苷含量） ×40+ （水浸出物含量／最大水浸出物含量） ×20。

2.4.1 加水量 按本品處方比例，稱取蒼術(shù)、茵陳、梔子、丹參、土茯苓、萊菔子、厚樸、木瓜適量，平行4 份，分別加入8、10、12、14 倍量水各回流提取2 次，每次1 h，提取液過(guò)濾后置于2 000 mL 量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，吸取適量，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，測(cè)定落新婦苷、梔子苷、水浸出物含量，結(jié)果見(jiàn)表1。由此可知，綜合評(píng)分隨著加水量增加呈升高趨勢(shì)，為8 倍量以上時(shí)大于90 分，故選擇8、10、12 倍量水進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表1 加水量單因素試驗(yàn)結(jié)果Tab．1 Results of single factor tests for water addition

2.4.2 提取時(shí)間 按本品處方比例，稱取蒼術(shù)、茵陳、梔子、丹參、土茯苓、萊菔子、厚樸、木瓜適量，平行4 份，加10 倍量水分別提取0.5、1、1.5、2 h 各2 次，提取液合并后置于2 000 mL 量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，取上清液，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，測(cè)定落新婦苷、梔子苷、水浸出物含量，結(jié)果見(jiàn)表2。由此可知，綜合評(píng)分隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)先升后降，表明時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)降低提取效率，故選擇0.5、1、1.5 h 進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表2 提取時(shí)間單因素試驗(yàn)結(jié)果Tab．2 Results of single factor tests for extraction time

2.4.3 提取次數(shù) 按本品處方比例，稱取蒼術(shù)、茵陳、梔子、丹參、土茯苓、萊菔子、厚樸、木瓜適量，平行4 份，置于圓底燒瓶中，分別編號(hào)1、2、3、4，其中1 號(hào)樣品加1 508 mL 水提取1 次，共2 h；2 號(hào)樣品加754 mL 水提取2 次，每次1 h；3 號(hào)樣品第1、2 次各加528 mL 水分別提取1、0.5 h，第3 次加452 mL 水提取0.5 h，提取液過(guò)濾后置于2 000 mL 量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，取上清液，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，測(cè)定落新婦苷、梔子苷、水浸出物含量，結(jié)果見(jiàn)表3。由此可知，提取2 次時(shí)綜合評(píng)分最高，故選擇1、2、3 次進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表3 提取次數(shù)單因素試驗(yàn)結(jié)果Tab．3 Results of single factor tests for extraction frequency

2.5 正交試驗(yàn) 按本品處方比例，稱取蒼術(shù)、茵陳、梔子、丹參、土茯苓、萊菔子、厚樸、木瓜共75.4 g，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以提取次數(shù)（A）、加水量（B）、提取時(shí)間（C） 為影響因素，梔子苷、落新婦苷、水浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)分別設(shè)定為0.4、0.4、0.2，采用L9（34） 正交表進(jìn)行設(shè)計(jì)，因素水平見(jiàn)表4。

表4 因素水平Tab．4 Factors and levels

按本品處方比例，稱取蒼術(shù)、茵陳、梔子、丹參、土茯苓、萊菔子、厚樸、木瓜適量，以表4 因素水平進(jìn)行提取，濾過(guò)，合并提取液，置于2 000 mL 量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，取上清液，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，測(cè)定落新婦苷、梔子苷、水浸出物含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab．5 Design and results of tests

對(duì)表5 數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表6。由此可知，各因素影響程度依次為提取時(shí)間＞提取次數(shù)＞加水量；提取時(shí)間對(duì)提取效果有顯著影響（P＜0.05），而提取次數(shù)、加水量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。為了降低成本、節(jié)省工時(shí)，并結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，最終確定最優(yōu)工藝為A2B2C2，即提取時(shí)間1.0 h，加水量10 倍，提取次數(shù)2 次。

表6 方差分析Tab．6 Analysis of variance

再按上述優(yōu)化工藝進(jìn)行3 批驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表7。由此可知，該工藝穩(wěn)定可行。

表7 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab．7 Results of verification tests （n＝3）

3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

3.1 定性鑒別 采用TLC 法。

3.1.1 梔子、葛根

3.1.1.1 供試品溶液制備 將本品內(nèi)容物研細(xì)，取約3 g，置于具塞錐形瓶中，30 mL 甲醇超聲提取45 min，濾過(guò)，水浴蒸干濾液，20 mL 水溶解殘?jiān)?，稀鹽酸調(diào)pH 至約為2，20 mL 乙醚振搖提取2次，除去乙醚液，水液加20 mL 二氯甲烷振搖提取2 次，除去二氯甲烷液，水液加20 mL 乙酸乙酯振搖提取2 次，合并水液，調(diào)pH 至中性，20 mL 乙酸乙酯提取2 次，水液再用水飽和正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，1 mL甲醇溶解殘?jiān)吹谩?/p>

3.1.1.2 對(duì)照品溶液制備 取梔子苷、葛根素對(duì)照品適量，甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg／mL 的溶液，即得。

3.1.1.3 陰性樣品溶液制備 根據(jù)本品處方比例，制成缺梔子、缺葛根的陰性樣品，按“3.1.1.1”項(xiàng)下方法制備，即得。

3.1.1.4 鑒別方法 對(duì)照品、供試品、陰性樣品溶液在硅膠G 薄層板上各點(diǎn)樣6 μL，以三氯甲烷-甲醇-水（14 ∶5 ∶0.5） 為展開(kāi)劑，在365 nm 紫外燈下檢視，或噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)加熱至斑點(diǎn)清晰，結(jié)果見(jiàn)圖3。由此可知，供試品在對(duì)照品同一位置處均顯示相同斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

圖3 葛根、梔子TLC 色譜圖Fig．3 TLC chromatograms of Puerariae lobatae Radix and Gardeniae Fructus

3.1.2 丹參、大黃

3.1.2.1 供試品溶液制備 將本品內(nèi)容物研細(xì)，取約3 g，置于具塞錐形瓶中，40 mL 甲醇溶解，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，20 mL 水溶解殘?jiān)?5 mL 乙醚提取，除去乙醚液，水液用鹽酸調(diào)pH 至約為2～3，25 mL 乙醚提取，除去乙醚液，水液用25 mL 乙酸乙酯提取2 次，合并乙酸乙酯液，30 mL 水洗滌，棄去水液，水浴蒸干，1 mL甲醇溶解殘?jiān)?，即得?/p>

3.1.2.2 對(duì)照藥材溶液制備 取丹參對(duì)照藥材0.5 g，20 mL 鹽酸回流提取45 min，濾過(guò)，25 mL乙酸乙酯振搖提取2 次，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，1 mL 甲醇溶解殘?jiān)?，即得相?yīng)溶液。再取大黃對(duì)照藥材0.5 g，20 mL 甲醇溶解，超聲提取30 min，取5 mL 濾液，水浴蒸干，20 mL 水+1 mL 鹽酸溶解殘?jiān)?，加熱回流提?0 min，冷卻至室溫，20 mL 乙醚提取2 次，合并提取液，水浴蒸干，2 mL 三氯甲烷溶解殘?jiān)?，即得相?yīng)溶液。

3.1.2.3 陰性樣品溶液制備 根據(jù)本品處方比例，制成缺丹參、缺大黃的陰性樣品，按“3.1.2.1”項(xiàng)下方法制備，即得。

3.1.2.4 鑒別方法 供試品、對(duì)照藥材、陰性樣品溶液在硅膠G 薄層板上各點(diǎn)樣3～5 μL，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8 ∶5 ∶3） 為展開(kāi)劑，置于氨蒸氣中放置15 min，在365 nm 紫外燈下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖4。由此可知，供試品在對(duì)照藥材同一位置處顯示相同斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

圖4 大黃、丹參TLC 色譜圖Fig．4 TLC chromatogram of Rhei Radix et Rhizoma and Salviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma

3.2 含量測(cè)定 采用HPLC 法。

3.2.1 色譜條件 Symmetry C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相甲醇-0.1%磷酸，梯度洗脫，程序［15］見(jiàn)表8；體積流量0.8 mL／min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm；進(jìn)樣量10 μL。

表8 梯度洗脫程序Tab．8 Gradient elution programs

3.2.2 對(duì)照品溶液制備 取綠原酸、葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、落新婦苷、丹酚酸B、大豆苷元對(duì)照品適量，置于5 mL 棕色量瓶中，甲醇超聲溶解定容，搖勻，即得（各成分質(zhì)量濃度分別為0.331、2.392、0.770、1.084、0.208、1.322、0.148 mg／mL）。

3.2.3 供試品溶液制備 將本品內(nèi)容物研細(xì)，取約1 g，置于50 mL 具塞錐形瓶中，20 mL 75%甲醇溶解，稱定質(zhì)量，超聲（250 W、40 kHz） 提取45 min，冷卻至室溫，75% 甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

3.2.4 陰性樣品溶液制備 根據(jù)本品處方比例，制成缺茵陳、葛根、土茯苓、車前子、丹參的陰性樣品，按“3.2.3” 項(xiàng)下方法制備，即得。

3.2.5 方法學(xué)考察

3.2.5.1 專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品、供試品、陰性樣品溶液適量，在“3.2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖5。由此可知，各成分色譜峰均可明顯分離（分離度＞1.5），理論塔板數(shù)均符合2020年版《中國(guó)藥典》 單味藥材含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，陰性無(wú)干擾，表明該方法專屬性良好。

圖5 各成分HPLC 色譜圖Fig．5 HPLC chromatograms of various constituents

3.2.5.2 線性關(guān)系考察 精密吸取“3.2.2” 項(xiàng)下對(duì)照品溶液100、250、500、750、1 000 μL，置于5 mL 棕色量瓶中，75%甲醇定容，得系列質(zhì)量濃度，在“3.2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y） 進(jìn)行回歸，并分別以信噪比3 ∶1、10 ∶1 為檢測(cè)下限、定量下限，結(jié)果見(jiàn)表9，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表9 各成分線性關(guān)系Tab．9 Linear relationships of various constituents

3.2.5.3 精密度試驗(yàn) 取同一份對(duì)照品溶液，在“3.1.2” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定6 次，測(cè)得綠原酸、葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、落新婦苷、丹酚酸B、大豆苷元峰面積RSD 分別為0.51%、1.70%、0.07%、0.50%、0.57%、0.73%、0.55%，表明儀器精密度良好。

3.2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，室溫下于0、2、4、6、8、12 h 在“3.2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得綠原酸、葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、落新婦苷、丹酚酸B、大豆苷元峰面積RSD 分別為1.45%、1.15%、1.14%、1.77%、1.82%、1.53%、0.80%，表明溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批本品，按“3.2.3” 項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，在“3.2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得綠原酸、葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、落新婦苷、丹酚酸B、大豆苷元峰面積RSD 分別為1.44%、1.73%、2.00%、2.03%、1.72%、1.75%、1.01%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.2.5.6 加樣回收率試驗(yàn) 取各成分含量已知的本品粉末6 份，加入對(duì)照品適量，按“3.2.3” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“3.2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果，綠原酸、葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、落新婦苷、丹酚酸B、大豆苷元平均加樣回收率分別為98.0%、96.9%、97.7%、100.5%、99.3%、99.5%、98.4%，RSD分別為1.52%、1.21%、0.82%、2.62%、1.17%、1.76%、1.49%。

3.2.5.7 樣品含量測(cè)定 取3 批中試樣品（批號(hào)20201101、20201202、20210103），每批3 份，按“3.2.3” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“3.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 各成分含量測(cè)定結(jié)果Tab．10 Results of content determination of various constituents

4 討論

4.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)選擇 君藥蒼術(shù)指標(biāo)成分蒼術(shù)素為揮發(fā)性化合物，難溶于水，含量較低，故選擇臣藥梔子、土茯苓中的主要成分。2020 年版《中國(guó)藥典》 一部規(guī)定，梔子中梔子苷含量不得低于1.8%，土茯苓中落新婦苷含量不得低于0.45%，兩者不僅是主要降糖活性成分，而且含量較高，易溶于水，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，測(cè)定方法成熟，同時(shí)水浸出物含量能側(cè)面反應(yīng)蒼術(shù)等8 味藥材提取率。結(jié)合文獻(xiàn)［16-18］，本實(shí)驗(yàn)以梔子苷、落新婦苷、水浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

4.2 TLC 鑒別方法和藥材選擇 本實(shí)驗(yàn)鑒別梔子、葛根時(shí)，參照2020 年版《中國(guó)藥典》 中牛黃凈腦片制劑項(xiàng)下方法；鑒別大黃、丹參時(shí)，以對(duì)照藥材定性，供試品溶液中與大黃對(duì)應(yīng)的點(diǎn)為大黃酚，而與丹參對(duì)應(yīng)的點(diǎn)尚不明確，有待進(jìn)一步探索。同時(shí)，梔子、葛根選擇同一處理方法、展開(kāi)系統(tǒng)及不同顯色方法進(jìn)行鑒別，而大黃、丹參選擇同一處理方法、展開(kāi)條件、顯色方法進(jìn)行鑒別，既可簡(jiǎn)化操作步驟，又能節(jié)能減排。另外，白術(shù)、茯苓、車前子、木瓜、茵陳均有陰性干擾，經(jīng)檢測(cè)方法篩選、展開(kāi)系統(tǒng)調(diào)整后仍無(wú)法排除；厚樸雖然無(wú)陰性干擾，但目標(biāo)斑點(diǎn)模糊，不易辨認(rèn)，故本實(shí)驗(yàn)未對(duì)上述6 味藥材進(jìn)行鑒別。

4.3 含量測(cè)定指標(biāo)選擇 預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，君藥蒼術(shù)指標(biāo)成分蒼術(shù)素易揮發(fā)，在提取、樣品處理過(guò)程中含量太低而檢測(cè)不到；白術(shù)內(nèi)酯類成分是白術(shù)發(fā)揮降糖作用的有效成分，但其化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定［19-21］，容易發(fā)生轉(zhuǎn)化，并且對(duì)照品價(jià)格較高。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇臣藥及其他藥材有效成分進(jìn)行測(cè)定。

4.4 流動(dòng)相選擇 本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)［22-24］ 并經(jīng)反復(fù)摸索，確定甲醇-0.1%磷酸作為流動(dòng)相，并且采用梯度洗脫，此時(shí)各成分分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均符合要求。

4.5 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 各成分吸收波長(zhǎng)分布在238、250、327 nm 處，其中238 nm 處吸收峰峰值較高，但出峰數(shù)量較少；327 nm 處色譜峰峰值較低；250 nm 處色譜峰數(shù)量較少。經(jīng)反復(fù)摸索，最終選擇294 nm 作為中間值，在保證色譜峰數(shù)量的同時(shí)峰值也不會(huì)太低。

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)所建立的消渴健脾膠囊制備工藝符合要求，可投入生產(chǎn)，并且其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)合理可靠，可為后續(xù)相關(guān)研究提供一定參考。