李紅亞,呂園園,張叢敏,文雪花,崔海敏

(保定市第一中心醫(yī)院 1.新生兒科;2.兒科;3.藥劑科,河北 保定 071000)

近年來隨著科技水平和醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展,早產(chǎn)兒的生存率顯著提高,但據(jù)統(tǒng)計(jì)早產(chǎn)兒患肺部疾病率呈上升趨勢[1],新生兒呼吸窘迫綜合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)、支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)、肺動脈高壓(persistent pulmonary hypertension of the newborn,PPHN)等肺部疾病在早產(chǎn)兒中的發(fā)生率也逐漸升高,因此探究其發(fā)病機(jī)制是防治早產(chǎn)兒肺部疾病的重要途徑。多項(xiàng)研究認(rèn)為早產(chǎn)兒肺部疾病的發(fā)生與微小RNA(miRNA)密切相關(guān)[2-4],降鈣素原(procalcitonin,PCT)、淀粉樣蛋白A(serum amyloid A,SAA)和C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)是臨床上肺部疾病重要的檢測指標(biāo),在臨床相關(guān)疾病的診斷中具有重要意義[5]。本研究將通過分析新生兒血清miR-328-5p、PCT、SAA、CRP水平與早產(chǎn)兒肺部疾病相關(guān)性,為臨床上制定防治早產(chǎn)兒肺部疾病新策略提供參考思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2021年1月入住保定市第一中心醫(yī)院的157例早產(chǎn)兒作為研究對象,其中無肺部疾病的新生兒38例(對照組),有肺部疾病的新生兒119例,并將患有肺部疾病的新生兒分為NRDS組(39例)、BPD組(40例)、PPHN組(40例)。納入標(biāo)準(zhǔn):出生后出現(xiàn)肺部疾病相關(guān)癥狀,符合《實(shí)用新生兒學(xué)》第4版有關(guān)肺部疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];胎齡<37周的患兒;早期胸片檢查提示存在支氣管充氣特征、白肺等狀況。排除標(biāo)準(zhǔn):具有重癥先心病的早產(chǎn)兒(如大型房缺室缺、持續(xù)肺動脈高壓、法洛四聯(lián)癥等)；合并肝、腦、腎等疾病的早產(chǎn)兒；合并遺傳代謝疾病、其他器官畸形、重癥感染等的新生兒。本研究經(jīng)保定市第一中心醫(yī)院倫理委員會的審核和批準(zhǔn)，并獲得研究對象監(jiān)護(hù)人自愿簽署的知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 血清樣本的收集

除收集各組研究對象的臨床資料(包括性別、出生體重等)外,在受試者出生后6h內(nèi),進(jìn)行機(jī)械通氣之前,采集外周血3mL放入抗凝管中,離心后(3 500r/min,15min,半徑10cm)收集上清,保存至-80℃條件下待測。

1.2.2 血清miR-382-5p水平檢測

實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測血清miR-382-5p表達(dá)水平,取血清樣本200μL,提取RNA后檢測質(zhì)量和濃度,然后使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司)將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為模板DNA(cDNA),之后以U6為內(nèi)參,將提取的cDNA進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增(95℃ 10min,95℃ 20s,55℃ 20s,72℃ 30s,40個循環(huán)),然后將目的基因的CT值加入外參基因(cel-miR-39)進(jìn)行歸一化處理,采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-382-5p的相對表達(dá)水平。

1.2.3 血清PCT、SAA、CRP水平檢測

取上清液,嚴(yán)格按照相關(guān)試劑盒操作說明書進(jìn)行檢測。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒檢測CRP水平,采用上傳發(fā)光法定量檢測PCT水平,采用免疫熒光層析法檢測SAA水平,其中CRP和SAA檢測試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司,PCT試劑盒購自上海化邦生物科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

比較各組血清miR-382-5p表達(dá)及PCT、SAA、CRP水平,分析miR-382-5p與PCT、SAA、CRP水平的相關(guān)性,分析miR-382-5p表達(dá)水平與患肺部疾病早產(chǎn)兒臨床特征的關(guān)系,分析miR-382-5p、PCT、SAA和CRP對早產(chǎn)兒肺部疾病的診斷價值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 研究對象一般資料比較

與對照組比較,NRDS、BPD、PPHN組患兒的出生體重顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=57.771,P<0.05),其他資料見表1。

表1 研究對象一般資料比較

2.2 各組患兒血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP水平比較

與對照組比較,NRDS、BPD、PPHN組患兒血清miR-382-5p表達(dá)水平均顯著降低,而PCT、SAA和CRP水平均顯著上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為216.047、83.917、183.164、124.093,P<0.05);NRDS、BPD、PPHN組患兒血清各指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表2。

表2 各組患兒血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP水平比較

2.3 miR-382-5p表達(dá)水平與PCT、SAA和CRP指標(biāo)的相關(guān)性分析

Pearson法分析NRDS、BPD、PPHN組患兒血清中miR-382-5p表達(dá)水平與PCT、SAA和CRP水平的相關(guān)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),miR-382-5p表達(dá)水平與PCT、SAA和CRP水平均呈負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r值介于-0.583～-0.450之間,P<0.05),見圖1。

圖1 Pearson法分析miR-382-5p分別與NRDS(A)、BPD(B)、PPHN組(C)患兒血清PCT、SAA和CRP指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.4 miR-382-5p表達(dá)水平與患肺部疾病早產(chǎn)兒臨床特征的關(guān)系

出生體重<1 400g的患肺部疾病早產(chǎn)兒血清中miR-382-5p表達(dá)水平低于出生體重≥1 400g的早產(chǎn)兒,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.173,P<0.05);而性別、胎齡、分娩方式和母胎是否患有胎膜早破miR-382-5p水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表3。

表3 miR-382-5p表達(dá)水平與患肺部疾病早產(chǎn)兒臨床特征的關(guān)系

2.5 Logistic回歸分析血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP指標(biāo)與早產(chǎn)兒患肺部疾病的關(guān)系

Logistic回歸分析結(jié)果顯示低表達(dá)miR-382-5p,PCT、SAA、CRP高水平及低出生體重均是早產(chǎn)兒患肺部疾病的獨(dú)立危險因素(OR值分別為4.301、1.243、7.247、3.421、3.469,P<0.05),見表4。

表4 Logistic回歸分析血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP與早產(chǎn)兒患肺部疾病的關(guān)系

2.6 血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP對早產(chǎn)兒肺部疾病的診斷價值

血清miR-382-5p的曲線下面積為0.858,敏感度和特異度分別為90.42%和85.63%,最佳截?cái)嘀禐?.72,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.221,P<0.05);PCT曲線下面積為0.889,敏感度和特異度分別為93.36%和89.12%,最佳截?cái)嘀禐?.45μg/mL;SAA曲線下面積為0.945,敏感度和特異度分別為96.71%和90.34%,最佳截?cái)嘀禐?0.12mg/L;CRP曲線下面積為0.890,敏感度和特異度分別為94.63%和92.17%,最佳截?cái)嘀禐?2.13mg/L,見圖2。

圖2 miR-382-5p、PCT、SAA和CRP診斷早產(chǎn)兒肺部疾病的ROC曲線

3 討論

隨著科學(xué)的進(jìn)步,越來越多的研究證實(shí)miRNA與早產(chǎn)兒肺部疾病具有相關(guān)性,miRNA的表達(dá)可作為早產(chǎn)兒肺部疾病的預(yù)后標(biāo)志物[4,7]。miRNA與早產(chǎn)兒肺部疾病關(guān)系的研究對早產(chǎn)兒肺部疾病的早期預(yù)防和及時診斷都具有重要的意義。

3.1 患兒血清中miR-382-5p、PCT、SAA、CRP與疾病的關(guān)系

在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)NRDS、BPD、PPHN組患兒血清中miR-382-5p表達(dá)水平顯著低于對照組早產(chǎn)兒,提示miR-382-5p的表達(dá)失調(diào)可能與早產(chǎn)兒肺部疾病相關(guān)。同時還發(fā)現(xiàn)NRDS、BPD、PPHN組患兒血清中PCT、SAA和CRP水平均顯著增加,且相關(guān)性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)NRDS、BPD、PPHN組患兒血清miR-382-5p表達(dá)水平與PCT、SAA和CRP水平均呈顯著負(fù)相關(guān)。PCT、SAA和CRP是臨床中的重要檢測指標(biāo),其中PCT是由甲狀腺C細(xì)胞分泌的降鈣素前體物質(zhì),在機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定性較好,但當(dāng)機(jī)體產(chǎn)生炎癥時,血清PCT水平顯著上升,SAA、CRP與PCT類似,可以用于新生兒肺部疾病的診斷[8-9]。我們的結(jié)果提示,miR-382-5p的表達(dá)失調(diào)參與調(diào)控新生兒肺部相關(guān)疾病的發(fā)生,可能與提高PCT、SAA和CRP水平有關(guān),分析其原因可能是miR-382-5p的表達(dá)靶向調(diào)控了血清PCT、SAA、CRP水平異常,誘發(fā)了肺部炎癥進(jìn)而導(dǎo)致新生兒肺部疾病的發(fā)生[10]。

3.2 患兒體重與血清中miR-382-5p、PCT、SAA、CRP之間的關(guān)系

本研究還發(fā)現(xiàn)出生體重<1 400g的患肺部疾病早產(chǎn)兒血清中miR-382-5p表達(dá)水平低于出生體重≥1 400g的早產(chǎn)兒,提示血清miR-382-5p表達(dá)與出生體重相關(guān)。已有研究表明早產(chǎn)兒的出生體重越小,肺部疾病的發(fā)生率就越高,我們的結(jié)果與其相一致[11-12]。進(jìn)一步使用Logistic回歸分析早產(chǎn)兒肺部疾病的獨(dú)立因素,發(fā)現(xiàn)miR-382-5p、PCT、SAA、CRP及出生體重是早產(chǎn)兒肺部疾病的獨(dú)立影響因素,此外ROC分析結(jié)果顯示miR-382-5p對早產(chǎn)兒肺部疾病診斷的特異度和敏感度較好,說明血清miR-382-5p可作為輔助早產(chǎn)兒肺部疾病診斷的標(biāo)志物。

綜上,miR-382-5p在患肺部疾病的早產(chǎn)兒血清中低表達(dá),PCT、SAA、CRP高表達(dá),均與早產(chǎn)兒肺部疾病相關(guān),可作為輔助早產(chǎn)兒肺部疾病診斷的臨床標(biāo)志物。