張甘純 ，劉 文 ，宋信莉 ，劉興德 ，舒萬(wàn)芬 ，秦 琴 ，王洪鑫 （.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025）

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是一種常見(jiàn)而復(fù)雜的炎癥性疾病，由肺內(nèi)外各種致病因素引起。其特征是急性、進(jìn)行性呼吸窘迫和持續(xù)低氧血癥，病死率高達(dá)40%[1]。機(jī)械通氣和激素給藥是目前較為有效的ALI治療方案[2]，但仍缺乏副作用較小的有效治療藥物。ALI屬于中醫(yī)“爆喘”“喘脫”范疇[3]，治療上主要涉及清熱解毒、活血化瘀、益氣扶正等中藥及方劑[4]。芍藥甘草湯（Shaoyao gancao decoction，SGD）源于張仲景之《傷寒雜病論》，2018年作為第一批經(jīng)典名方收錄在《古代經(jīng)典名方目錄》中。該方由芍藥和炙甘草2味藥材組成。方中白芍性微寒，能夠養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗；甘草性平，能夠補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、緩急止痛。現(xiàn)代研究和臨床實(shí)踐也證實(shí)，SGD具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛、止咳、平喘、調(diào)節(jié)免疫等作用，對(duì)多種炎癥性疾病有顯著的治療作用[5]。選用SGD治療ALI具有中醫(yī)理論與現(xiàn)代研究基礎(chǔ)。

肺腸軸理論與中醫(yī)基礎(chǔ)理論“肺與大腸相表里”揭示了肺臟與胃腸道的關(guān)聯(lián)性，二者胚胎起源相同、結(jié)構(gòu)相似[6]?，F(xiàn)代研究亦證實(shí)肺和腸道在生理和病理?xiàng)l件下相互影響。如近年研究表明，腸道微生物能夠影響肺功能，參與多種肺系疾病，包括支氣管哮喘、肺癌、ALI和慢性阻塞性肺疾病等[7]。而肺部疾病也可表現(xiàn)出腸道菌群改變的特征，如采用糞菌移植治療手段可顯著降低Toll樣受體4/核因子κB 信號(hào)通路活性和氧化應(yīng)激水平，從而改善脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的ALI[8]?？梢?jiàn)，機(jī)體腸道菌群的改變對(duì)于肺部疾病的發(fā)生、發(fā)展和治療都起著重要作用。本研究擬探討SGD 對(duì)ALI 大鼠腸道菌群的影響，從而闡明其防治ALI 的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療ALI提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器為FlexStation3 型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Devices公司）、AE/240型十萬(wàn)分之一電子天平[梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司]、KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、H1650R型冷凍高速離心機(jī)（湘潭湘儀儀器有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

白芍（批號(hào)220101）、炙甘草（批號(hào)210601）飲片均購(gòu)自貴州一品藥業(yè)連鎖有限公司，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院孫慶文教授鑒定白芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根，炙甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根和根莖的炮制加工品。地塞米松（dexamethasone，DEX）原料藥（批號(hào)C13694947，純度≥98%）購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司；LPS（批號(hào)527N031）購(gòu)自上海索萊寶生物科技有限公司；白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（批號(hào)分別為ZC-36391、ZC-36404、ZC-37624）購(gòu)自上海茁彩生物科技有限公司。

1.3 動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為SPF 級(jí)雄性大鼠，共60 只，體重（200±20） g，由北京華阜康生物科技有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2019-0008。大鼠飼養(yǎng)于通風(fēng)良好、室溫18～25 ℃、相對(duì)濕度50%～70%的動(dòng)物房中，飼養(yǎng)期間確保大鼠能夠自由進(jìn)食與飲水。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得了貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號(hào)20210133）。

2 方法

2.1 SGD的制備

SGD由白芍和炙甘草按1∶1（m/m）配伍組成。稱(chēng)取白芍、炙甘草各55 g，加入600 mL水[9]，浸泡30 min，用電陶爐以武火（1 200 W）煮沸后再以文火（600 W）煎煮至300 mL，濾液減壓濃縮，得到按生藥量計(jì)為2.0 g/mL 的SGD藥液，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 大鼠分組、給藥及ALI模型建立

將60只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組（CON組，生理鹽水）、模型組（MOD 組，生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組（DEX 組，5 mg/kg 地塞米松）[10]和芍藥甘草湯低、中、高劑量組（SGD-L、SGD-M、SGD-H 組，給藥劑量以生藥量計(jì)分別為5.8、11.6、23.2 g/kg，分別為臨床等效劑量的0.5、1、2倍[9]），每組10只。各組大鼠每天灌胃1次，灌胃體積均為10 mL/kg，連續(xù)7 d。末次給藥30 min后，CON組大鼠氣道滴注等體積的生理鹽水，其余各組大鼠氣道滴注LPS（5 mg/kg）建立ALI模型[10]。

2.3 樣本采集

造模12 h 后，麻醉大鼠，經(jīng)氣管注射冰磷酸鹽緩沖液5 mL灌洗左肺，30 s后緩慢回抽，重復(fù)2次，收集肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid，BALF）并置于離心管中，在4 ℃下以3 000 r/min離心15 min，取上清液置于－80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。隨后取右肺上葉用于病理形態(tài)學(xué)觀察，右肺下葉則用于計(jì)算肺組織濕/干重比。取糞便置于－80 ℃冰箱中凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察

取右肺上葉組織用5%多聚甲醛固定、梯度乙醇脫水、常規(guī)石蠟包埋、切片（厚度4 μm）后，以蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，然后在光學(xué)顯微鏡下對(duì)肺組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察。

2.5 肺組織濕/干重比計(jì)算

取右肺下葉用生理鹽水清洗后吸干水分，稱(chēng)重，得濕重。然后將肺組織置于干燥箱中，70 ℃干燥48 h，稱(chēng)重，得干重。計(jì)算肺組織濕/干重比，即肺組織濕重/肺組織干重×100%。

2.6 BALF中炎癥因子水平檢測(cè)

取“2.3”項(xiàng)下BALF，采用ELISA 法檢測(cè)大鼠BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β水平，具體操作根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.7 腸道菌群檢測(cè)

以CON組、MOD組和藥效最優(yōu)的SGD劑量組大鼠的糞便為檢測(cè)樣本（每組隨機(jī)選擇6只大鼠的樣本進(jìn)行檢測(cè)），委托杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司進(jìn)行16S rRNA 測(cè)序和生物信息學(xué)分析。對(duì)糞便樣本進(jìn)行DNA提取后，采用引物341F（5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′）和805R（5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′）對(duì)可變區(qū)（V3～V4）擴(kuò)增，之后在lllumina MiSeq平臺(tái)測(cè)序，按照相似度97%聚類(lèi)，獲得操作分類(lèi)單元（operational taxonomic units，OTUs）。對(duì)所獲OTUs進(jìn)行分類(lèi)學(xué)注釋并生成不同分類(lèi)水平下的物種豐度，利用Mothur軟件計(jì)算樣品的Observed-species、Shannon、Simpson、Chao1 和Goods-coverage指數(shù)，分析單個(gè)樣品內(nèi)部的物種多樣性，即Alpha多樣性；基于weighted UniFrac算法中的主坐標(biāo)分析（principal co-ordinates analysis，PCoA）和非度量多維標(biāo)度分析（non-metric multidimensional scaling，NMDS）比較不同樣品在物種多樣性方面的相似程度，即Beta 多樣性；最后，通過(guò)線(xiàn)性判別分析進(jìn)行效應(yīng)大小[linear discriminant analysis（LDA） effect size，LEfSe]分析并尋找差異菌群（以L(fǎng)DA score log10＞4為標(biāo)準(zhǔn)）。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。為了確定在ALI 進(jìn)展中起作用的關(guān)鍵菌群，將MOD 組和SGD-L 組的差異菌屬與炎癥因子進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。

3 結(jié)果

3.1 大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化觀察結(jié)果

CON 組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)明顯水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)或纖維結(jié)締組織增生，肺泡上皮細(xì)胞形態(tài)較為正常，未見(jiàn)明顯變性、壞死，間質(zhì)未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維組織增生；MOD組大鼠肺組織可見(jiàn)肺泡隔增厚，肺泡輕微水腫伴大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，且以淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主，血管周?chē)g質(zhì)性水腫，說(shuō)明ALI 模型復(fù)制成功；與MOD組比較，各給藥組大鼠的肺組織病變程度均明顯減輕，具體表現(xiàn)為肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少、肺泡隔增厚和肺泡水腫情況有所改善。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察的顯微圖（HE染色，×200）

3.2 大鼠肺組織濕/干重比計(jì)算結(jié)果

與CON組比較，MOD組大鼠肺組織濕/干重比顯著升高（P＜0.01）；與MOD 組比較，各給藥組大鼠的肺組織濕/干重比均顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大肺組織濕/干重比和BALF 中IL-1β、IL-6、TNF-α水平測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）

表1 各組大肺組織濕/干重比和BALF 中IL-1β、IL-6、TNF-α水平測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）

a：與CON組比較，P＜0.01；b：與MOD比較，P＜0.01；c：與MOD組比較，P＜0.05。

TNF-α/（pg/mL）22.19±5.27 90.27±6.80a 42.66±5.03b 54.04±5.65b 59.44±16.67b 67.50±10.50b組別CON組MOD組DEX組SGD-L組SGD-M組SGD-H組肺組織濕/干重比/%6.80±0.59 8.23±0.62a 7.31±0.64b 7.40±0.68b 7.53±0.63c 7.58±0.60c IL-1β/（pg/mL）12.62±0.77 33.07±3.12a 23.34±2.29b 22.19±3.63b 24.57±3.17b 28.22±3.65b IL-6/（pg/mL）33.41±9.58 137.33±12.39a 69.03±7.89b 86.49±9.67b 99.19±12.49b 104.24±14.12b

3.3 大鼠BALF中炎癥因子水平測(cè)定結(jié)果

與CON 組比較，MOD 組大鼠BALF 中IL-1β、IL-6、TNF-α水平顯著升高（P＜0.01）。與MOD組比較，各給藥組大鼠BALF 中上述炎癥因子水平均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.4 大鼠腸道菌群分析結(jié)果

3.4.1 Alpha多樣性分析結(jié)果

如表2 所示，各組樣本的Goods-coverage 指數(shù)均大于0.98，表明測(cè)序結(jié)果良好，能夠反映各樣本的微生物群落情況[11]。與CON 組比較，MOD 組的Observedspecies、Shannon、Simpson、Chao1 指數(shù)均顯著降低（P＜0.01），說(shuō)明ALI 大鼠腸道內(nèi)菌群的豐富度和多樣性降低。與MOD 組比較，SGD-L 組上述4 項(xiàng)指數(shù)均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），表明SGD能夠增加ALI大鼠腸道內(nèi)菌群的豐富度和多樣性，恢復(fù)其菌群結(jié)構(gòu)。

表2 各組大鼠腸道菌群的Alpha 多樣性分析結(jié)果（n＝6）

3.4.2 Beta多樣性分析結(jié)果

在PCoA 圖和NMDS 圖中，各組樣本內(nèi)部均能夠顯著聚類(lèi)，表明各組樣本內(nèi)部腸道菌群趨于一致。CON組和MOD 組的菌群結(jié)構(gòu)組成差異顯著（P＜0.05），表明ALI大鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了紊亂；SGD-L組的腸道菌群結(jié)構(gòu)偏離了MOD 組，并趨向CON 組，表明經(jīng)SGD干預(yù)后，ALI大鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)向正常狀態(tài)回調(diào)。結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 各組大鼠腸道菌群的Beta多樣性分析結(jié)果

3.4.3 腸道菌群結(jié)構(gòu)分析結(jié)果

如圖3所示，在門(mén)水平下與CON組比較，MOD組大鼠糞便中擬桿菌門(mén)（Bacteroidota）和變形菌門(mén)（Proteobacteria）的相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.01），厚壁菌門(mén)（Firmicutes）的相對(duì)豐度顯著降低（P＜0.01）；與MOD 組比較，SGD-L組大鼠糞便中擬桿菌門(mén)和變形菌門(mén)的相對(duì)豐度顯著降低（P＜0.01），厚壁菌門(mén)的相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.01）。

圖3 各組大鼠糞便中門(mén)水平菌群物種的相對(duì)豐度結(jié)果

如圖4所示，在屬水平下與CON組比較，MOD組大鼠糞便中乳桿菌屬（Lactobacillus）、大腸埃氏菌屬-志賀氏菌屬（Escherichia-Shigella）和鏈球菌屬（Streptococcus）的相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01），梭狀芽孢桿菌屬（Clostridia_UCG-014）、毛螺菌屬（Lachnospira ceae_NK4A136_group）、厚壁菌屬（Firmicutes）的相對(duì)豐度顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）；與MOD 組比較，SGD-L 組大鼠糞便中乳桿菌屬、大腸埃氏菌屬-志賀氏菌屬和鏈球菌屬的相對(duì)豐度顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01），梭狀芽孢桿菌屬、毛螺菌屬、瘤胃球菌屬（Ruminococcus）、杜氏桿菌屬（Dubosiella）、阿克曼菌屬（Akkermansia）的相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01）。上述結(jié)果表明，SGD 能夠逆轉(zhuǎn)ALI 大鼠的腸道菌群紊亂，并使其恢復(fù)到與正常情況相似的菌群結(jié)構(gòu)。

圖4 各組大鼠糞便中屬水平菌群物種的相對(duì)豐度

3.4.4 菌群差異分析結(jié)果

CON 組與MOD 組、MOD 組與SGD-L 組大鼠的腸道菌群組成和結(jié)構(gòu)均存在顯著差異。相比于CON 組，MOD 組的差異菌屬為乳桿菌屬、鏈球菌屬和大腸埃氏菌屬-志賀氏菌屬；相比于MOD 組，SGD-L 組的差異菌屬為厚壁菌屬、毛螺菌屬、瘤胃球菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、杜氏桿菌屬、阿克曼菌屬。這些菌群可能作為ALI的生物標(biāo)志物和SGD改善ALI的腸道指標(biāo)。結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 3組大鼠糞便中的差異菌屬分析結(jié)果

3.4.5 腸道菌群與炎癥因子的相關(guān)性分析結(jié)果

乳桿菌屬、鏈球菌屬、大腸埃氏菌屬-志賀氏菌屬的相對(duì)豐度與炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α 的水平呈顯著正相關(guān)（P＜0.05或P＜0.01）；毛螺菌屬、杜氏桿菌屬、厚壁菌屬的相對(duì)豐度與上述炎癥因子的水平呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 差異菌屬與炎癥因子的相關(guān)性熱圖

4 討論

LPS 誘導(dǎo)的ALI 模型被認(rèn)為是一種重復(fù)性好、與臨床病理變化相似度高的動(dòng)物模型[12]。不同的LPS誘導(dǎo)方式與臨床ALI 的嚴(yán)重程度有一定的相關(guān)性。如氣管內(nèi)注射或鼻腔滴注LPS可直接誘導(dǎo)肺中性粒細(xì)胞募集，上調(diào)肺ALI炎癥因子，模擬ALI炎癥的初始癥狀。而腹腔內(nèi)注射LPS 可誘發(fā)全身膿毒性ALI，模擬更嚴(yán)重的臨床階段[13]。本研究采用氣道滴注LPS復(fù)制ALI模型，MOD組大鼠肺組織病理切片可見(jiàn)肺泡隔增厚、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺間質(zhì)水腫等病理變化，說(shuō)明模型構(gòu)建成功。ALI的特點(diǎn)之一是漿液涌入肺泡腔，導(dǎo)致肺泡水腫[14]。為了量化肺水腫的程度，本研究檢測(cè)了肺組織濕/干重比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)SGD 預(yù)處理后可降低肺組織濕/干重比，表明SGD 可減緩肺水腫的發(fā)展。

維護(hù)機(jī)體內(nèi)炎癥環(huán)境的平衡及阻斷級(jí)聯(lián)放大的失控性炎癥反應(yīng)是防治ALI的重要策略[15]。IL-1β、IL-6和TNF-α 是ALI 發(fā)病過(guò)程中重要的炎癥因子[16]，TNF-α 和IL-1β不僅放大了炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引起炎癥性損傷，還招募了中性粒細(xì)胞進(jìn)入肺部，并表現(xiàn)出髓過(guò)氧化物酶活性增加，從而加重了肺損傷[17]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-6水平是預(yù)測(cè)ALI 患者發(fā)病率和死亡率的重要指標(biāo)[18]。因此，抑制上述炎癥因子的表達(dá)可以起到減輕ALI 的作用。為了檢測(cè)SGD 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALI 大鼠的抗炎作用，筆者采用ELISA 法檢測(cè)了大鼠BALF 中炎癥因子水平。結(jié)果顯示，SGD 明顯抑制了模型大鼠BALF 中IL-1β、IL-6 和TNF-α的產(chǎn)生，有效緩解了ALI的炎癥反應(yīng)。

腸道菌群在ALI的發(fā)生發(fā)展和治療中起關(guān)鍵作用。人體腸道菌群在門(mén)水平下主要由厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)組成，其同樣也是大鼠腸道中最豐富的2個(gè)菌門(mén)。厚壁菌門(mén)的相對(duì)豐度降低與擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度升高常被認(rèn)為是菌群失調(diào)的標(biāo)志[19]。厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)主要參與宿主體內(nèi)脂肪和膽汁酸代謝的調(diào)節(jié)，維持能量平衡，其中前者能夠幫助身體吸收和儲(chǔ)存能量，而后者則相反[20]。也有研究表明，厚壁菌門(mén)與IL-17 信號(hào)通路和補(bǔ)體信號(hào)通路密切相關(guān)，可能在免疫和炎癥的調(diào)節(jié)中起重要作用[21]。變形菌門(mén)是腸道的4 個(gè)主要菌門(mén)（厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、變形菌門(mén)、放線(xiàn)菌門(mén)）中隨時(shí)間變化最不穩(wěn)定的菌門(mén)，其相對(duì)豐度被視為反映腸道菌群紊亂的標(biāo)志之一及潛在的疾病診斷指標(biāo)。變形菌門(mén)能夠有效利用炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的硝酸鹽作為電子受體，進(jìn)行厭氧呼吸。因此在炎癥環(huán)境中，變形菌門(mén)比依賴(lài)發(fā)酵生長(zhǎng)的厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)更具增殖優(yōu)勢(shì)，其過(guò)度生長(zhǎng)可進(jìn)一步加重局部炎癥反應(yīng)[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，MOD組大鼠糞便中厚壁菌門(mén)的相對(duì)豐度降低，擬桿菌門(mén)和變形菌門(mén)的相對(duì)豐度升高；經(jīng)SGD 干預(yù)后，逆轉(zhuǎn)了這種趨勢(shì)，使SGD-L組大鼠恢復(fù)到了與CON組相似的菌群結(jié)構(gòu)。

宿主體內(nèi)許多促炎因子的產(chǎn)生都是由腸道微生物群誘導(dǎo)的，如鏈球菌及其細(xì)胞壁成分已被證明可誘導(dǎo)TNF-α 和IL-1β 分泌，鏈球菌及其家族的多個(gè)成員與肺功能下降有關(guān)[23]；乳桿菌能在人淋巴細(xì)胞中誘導(dǎo)IL-6和TNF-α 分泌[24]；過(guò)度生長(zhǎng)的大腸埃希菌可以促進(jìn)趨化因子配體5及CXC趨化因子配體1的表達(dá)，從而加重炎癥損傷的程度[22]。而部分益生菌（如瘤胃球菌屬、杜氏桿菌屬、毛螺菌屬）可以抑制炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，以抑制炎癥發(fā)生[25]。本研究中，菌群與炎癥因子的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，差異菌屬與炎癥因子具有顯著的相關(guān)性。這提示SGD可能通過(guò)恢復(fù)菌群結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)有害菌與有益菌比例發(fā)揮抗炎作用。如阿克曼菌是一種黏液降解菌，對(duì)維持腸黏膜的完整性起到了重要作用。而腸道屏障的損壞可能導(dǎo)致微生物轉(zhuǎn)運(yùn)到血液中，并使炎癥反應(yīng)持續(xù)，從而加劇肺損傷[26]。這提示SGD可能通過(guò)維持腸道穩(wěn)態(tài)，發(fā)揮抗ALI作用。

綜上所述，SGD 可能通過(guò)改善肺組織損傷、減輕炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)菌群結(jié)構(gòu)來(lái)發(fā)揮改善ALI的作用。然而在本研究中，藥效學(xué)結(jié)果出現(xiàn)劑量和效應(yīng)“倒掛”的現(xiàn)象，這可能是中藥提取物產(chǎn)生的雙向調(diào)節(jié)作用，具體原因有待進(jìn)一步分析。此外，本研究并未對(duì)在腸道菌群研究中確定的差異菌屬進(jìn)行單獨(dú)驗(yàn)證，后續(xù)可開(kāi)展驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)對(duì)本研究結(jié)果加以證實(shí)。