覃柳瑩，梁麗金，胡 懿，甘力帆，黃 森，徐 杰，張志鵬

基于UPLC指紋圖譜和網(wǎng)絡(luò)藥理學的當歸炮制前后差異質(zhì)量標志物研究

覃柳瑩，梁麗金，胡 懿，甘力帆，黃 森，徐 杰，張志鵬*

廣東一方制藥有限公司 廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點實驗室，廣東 佛山 528244

篩選當歸炮制前后差異特征成分，建立當歸炮制前后差異質(zhì)量標志物（quality markers，Q-Marker）的定量分析方法，為當歸和當歸炭的質(zhì)量評價提供依據(jù)。采用UPLC法分別構(gòu)建當歸和當歸炭的指紋圖譜，運用化學模式識別技術(shù)篩選當歸炭炮制前后的主要差異成分，結(jié)合中藥Q-Marker“五原則”和網(wǎng)絡(luò)藥理學分析篩選潛在的差異Q-Marker，并進行定量分析。15批當歸UPLC指紋圖譜共標定19個共有峰，當歸炭UPLC指紋圖譜共標定10個共有峰，指認7個成分。采用主成分分析（principal component analysis，PCA）可明顯區(qū)分當歸和當歸炭；偏最小二乘法-判別分析（partial least squares method-discriminant analysis，PLS-DA）辨識出影響當歸與當歸炭差異的10個主要色譜峰，按VIP值大小排序依次為峰23、22、10、16、7、3、2、1、4、11。結(jié)合中藥Q-Marker“五原則”和網(wǎng)絡(luò)藥理學分析，篩選出色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯、5-羥甲基糠醛為當歸炭炮制前后差異的Q-Marker。Q-Marker定量結(jié)果表明，當歸炒炭后色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯含量均明顯下降；同時產(chǎn)生了新成分5-羥甲基糠醛，其質(zhì)量分數(shù)在0.720 6～3.989 0 mg/g。建立的UPLC指紋圖譜可有效地對當歸和當歸炭進行區(qū)分，結(jié)合中藥Q-Marker“五原則”和網(wǎng)絡(luò)藥理學分析當歸和當歸炭的主要差異成分群，可為當歸和當歸炭的Q-Marker研究和質(zhì)量評價提供參考。

當歸；當歸炭；UPLC；指紋圖譜；化學模式識別；網(wǎng)絡(luò)藥理學；質(zhì)量標志物；主成分分析；偏最小二乘法-判別分析；色氨酸；綠原酸；阿魏酸；洋川芎內(nèi)酯I；洋川芎內(nèi)酯H；藁本內(nèi)酯；5-羥甲基糠醛

當歸（ASR）為傘形科植物當歸(Oliv.) Diels的干燥根，味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效，主要用于婦科血虛、血瘀等證候諸疾的治療，素有“婦科要藥”之稱[1]。當歸的炮制品廣泛應(yīng)用于臨床各科，故亦有“藥王”之稱。見諸歷代文獻的當歸炮制方法達25種之多，較常用的有酒制、炒制、制炭等[2]。其中當歸制炭始見于明朝，常用于治療婦科崩漏之癥，有收斂止血之效[3]。

中藥發(fā)揮藥效作用的基礎(chǔ)是多種有效成分的合理、有機的組合，其模式是多途徑作用于機體內(nèi)與疾病相關(guān)的多靶點，發(fā)揮對機體的整體調(diào)節(jié)作用[4]。因此，當歸與當歸炭（ASRC）的功效不同可理解為內(nèi)在化學成分存在差異。中藥指紋圖譜是從中藥物質(zhì)群出發(fā)，以反映中藥化學成分的整體情況，具有整體性、特異性和選擇性的特點，是探究中藥質(zhì)量物質(zhì)基礎(chǔ)的有效技術(shù)手段[5]。網(wǎng)絡(luò)藥理學是通過揭示中藥化合物的作用和治療機制來研究藥物、靶點和疾病之間的關(guān)系，闡明中藥對疾病的作用機制[6]。中藥質(zhì)量標志物（quality markers，Q-Marker）是由劉昌孝院士提出的針對中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的新理念，聚焦中藥質(zhì)量屬性的本質(zhì)特征進行質(zhì)量控制[7]。結(jié)合中藥指紋圖譜與網(wǎng)絡(luò)藥理學篩選當歸炮制前后差異的Q-Marker，可初步揭示當歸和當歸炭的主要差異成分以及發(fā)揮藥效的專屬性物質(zhì)基礎(chǔ)。因此，本研究擬建立當歸和當歸炭的UPLC指紋圖譜，采用化學模式識別技術(shù)結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學，篩選當歸和當歸炭的主要差異Q-Marker，并進行定量分析，以期為當歸和當歸炭的Q-Marker研究及質(zhì)量評價提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters Acquity型超高效液相色譜系統(tǒng)，美國Waters公司；ME204E型萬分之一分析天平、XP26型百萬分之一天平，瑞士梅特勒-托利多公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Milli-Q型超純水系統(tǒng)，默克股份有限公司。

1.2 對照品與試劑

對照品色氨酸（批號140686-201904，質(zhì)量分數(shù)99.9%）、綠原酸（批號110753-202119，質(zhì)量分數(shù)96.3%）、阿魏酸（批號110773-201915，質(zhì)量分數(shù)99.4%）、洋川芎內(nèi)酯I（批號112071-202101，質(zhì)量分數(shù)99.2%）、5-羥甲基糠醛（批號111626-202215，質(zhì)量分數(shù)99.5%）均購自中國食品藥品檢定研究院；對照品洋川芎內(nèi)酯H（批號DSTDY018201，質(zhì)量分數(shù)99.6%）購自成都樂美天醫(yī)藥科技有限公司；對照品藁本內(nèi)酯（批號20092403，質(zhì)量分數(shù)98.77%）購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司。

甲醇，分析純，西隴科學股份有限公司；甲醇、乙腈，色譜純，默克股份有限公司；甲酸，色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司；水為超純水。

1.3 藥材

15批當歸藥材（DG01～DG15）分別由隴西縣馮了性藥材飲片有限公司（DG01～DG09）、哈爾濱福順堂藥材有限公司（DG10）、甘肅中平倉儲服務(wù)有限公司（DG11～DG13）、安徽省永香中藥飲片有限公司（DG14～DG15）提供，產(chǎn)地均為甘肅。經(jīng)廣東一方制藥有限公司孫冬梅主任中藥師鑒定，15批當歸藥材均為傘形科當歸屬植物當歸(Oliv.) Diels的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 當歸炭飲片的制備

取15批當歸藥材（DG01～DG15），分別按照《中國藥典》2020年版一部當歸飲片炮制項下方法，除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切薄片，低溫干燥，即得凈當歸片；按照《中國藥典》2020年版炮制通則項下炒炭法制備，分別取上述凈當歸片，置熱鍋內(nèi)，用武火炒至表面焦黑色、內(nèi)部焦褐色或至規(guī)定程度時，噴淋清水少許，熄滅火星，取出，晾干，即得當歸炭（DGT01～DGT15）。

2.2 供試品溶液的制備

取當歸、當歸炭粉末（過三號篩）約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W、頻率40 kHz）30 min，再稱定質(zhì)量，加甲醇補足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液，即得當歸、當歸炭供試品溶液。

2.3 混合對照品溶液的制備

精密稱定色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯、5-羥甲基糠醛對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為48.45、17.43、32.50、20.04、16.73、372.07、85.67 μg/mL的混合對照品母液，備用。

2.4 色譜條件

采用Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～12 min，5%～23%乙腈；12～13 min，23%～43%乙腈；13～18 min，43%～44%乙腈；18～20 min，44%～46%乙腈；20～22 min，46%～47%乙腈；22～23 min，47%～58%乙腈；23～29 min，58%～59%乙腈；29～30 min，59%～80%乙腈；30～34 min，80%乙腈；體積流量為0.3 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測波長為270 nm；進樣量為1 μL。

2.5 指紋圖譜方法學考察

2.5.1 精密度試驗 取當歸樣品（DG12）及當歸炭樣品（DGT12）的供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，連續(xù)進樣測定6次，以洋川芎內(nèi)酯I為參照峰，計算各主要色譜峰相對保留時間的RSD均小于0.28%，相對峰面積的RSD均小于2.85%，表明儀器精密度良好，符合指紋圖譜測定要求。

2.5.2 重復性試驗 取當歸樣品（DG12）及當歸炭樣品（DGT12）各6份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件進樣測定，以洋川芎內(nèi)酯I為參照峰，計算各主要色譜峰相對保留時間的RSD均小于0.35%，相對峰面積的RSD均小于3.93%，表明方法的重復性良好，符合指紋圖譜測定要求。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗 取當歸樣品（DG12）及當歸炭樣品（DGT12）供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，分別于2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h進樣測定，以洋川芎內(nèi)酯I為參照峰計算各主要色譜峰相對保留時間的RSD均小于1.20%，相對峰面積的RSD均小于4.14%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，符合指紋圖譜測定要求。

2.6 指紋圖譜建立及化學模式識別

2.6.1 當歸及當歸炭指紋圖譜建立 取15批當歸和15批當歸炭，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。分別導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012年版）進行圖譜分析，設(shè)定DG12和DGT12樣品圖譜作為參照圖譜，時間窗寬度為0.1 min，采用中位數(shù)法結(jié)合多點校正，進行色譜峰匹配，生成當歸對照圖譜和當歸炭對照圖譜。15批當歸指紋圖譜共標定19個共有峰，15批當歸炭指紋圖譜共標定10個共有峰，經(jīng)混合對照品比對，指認其中7個色譜峰，依次為5-羥甲基糠醛（峰1）、色氨酸（峰3）、綠原酸（峰5）、阿魏酸（峰7）、洋川芎內(nèi)酯I（峰8）、洋川芎內(nèi)酯H（峰9）、藁本內(nèi)酯（峰14）。15批當歸和15批當歸炭指紋圖譜疊加圖及其對照指紋圖譜見圖1，混合對照品圖譜見圖2。

2.6.2 相似度分析 將“2.6.1”項下采集的當歸、當歸炭UPLC指紋圖譜分別導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》進行全譜峰匹配，生成對照指紋圖譜（DG-R、DGT-R），并計算各樣品（DG01～DG15、DGT01～DGT15）與對照指紋圖譜（DG-R、DGT-R）的相似度，結(jié)果見表1。15批當歸樣品與當歸對照圖譜相似度在0.959～0.999，與當歸炭對照圖譜相似度在0.206～0.213；15批當歸炭樣品與當歸炭對照圖譜相似度在0.836～0.999，與當歸對照圖譜相似度在0.080～0.679。結(jié)果表明，炮制前后的當歸和當歸炭相似度區(qū)間無交集，指紋圖譜差異明顯，建立的當歸和當歸炭UPLC指紋圖譜可分別用于當歸和當歸炭的整體控制。

2.6.3 主成分分析（principal component analysis，PCA） 比較當歸炒炭炮制前后指紋圖譜各色譜峰峰面積的變化情況，發(fā)現(xiàn)相較于當歸，當歸炭樣品中峰3～21峰面積均明顯下降，且新生成峰1、2、22、23。

將30批當歸和當歸炭指紋圖譜各色譜峰的峰面積（未檢測到的峰面積以0計）作為變量，導入SIMCA軟件，采用非監(jiān)督模式識別方法PCA觀察樣品的自然聚集，得分圖矩陣見圖3。結(jié)果顯示30批樣品在主成分空間的分布上可明顯分為2大類，其中15批當歸樣品分為一類，15批當歸炭樣品分為另一類，表明當歸和當歸炭指紋圖譜各成分差異較大，通過指紋圖譜各色譜峰峰面積可對兩者進行初步分類。

圖1 15批當歸(DG01～DG15)和當歸炭(DGT01～DGT15)的指紋圖譜疊加圖及其對照指紋圖譜(DG-R、DGT-R)

2.6.4 偏最小二乘法-判別分析（partial least squares method-discriminant analysis，PLS-DA） 基于“2.6.3”項下PCA結(jié)果，將30批當歸、當歸炭的峰面積數(shù)據(jù)導入SIMCA軟件進行PLS-DA，對30批樣品按已知的類別進行主觀分類，結(jié)果見圖4。

PLS-DA模型中的擬合參數(shù)R2＝0.96，模型預(yù)測參數(shù)2＝0.934，均大于0.5，表明所建模型預(yù)測能力較強。

PLS-DA模型中23個色譜峰VIP值見圖5，其中VIP值越大，表明該變量對于分類貢獻越大，即為區(qū)分生當歸和當歸炭的差異性標志物。以VIP值大于1作為指標對生當歸和當歸炭的差異性標志物進行篩選，提取了10個重要的特征峰，重要程度依次為峰23＞峰22＞峰10＞峰16＞峰7＞峰3＞峰2＞峰1＞峰4＞峰11，其中1、3、7號峰分別為5-羥甲基糠醛、色氨酸、阿魏酸。

1-5-羥甲基糠醛 3-色氨酸 5-綠原酸 7-阿魏酸 8-洋川芎內(nèi)酯I 9-洋川芎內(nèi)酯H 14-藁本內(nèi)酯

表1 當歸與當歸炭樣品相似度評價結(jié)果

Table 1 Similarity results of ASR and ASRC

當歸相似度當歸炭相似度 DG-RDGT-RDGT-RDG-R DG010.9980.212DGT010.8360.679 DG020.9970.209DGT020.9940.301 DG030.9980.210DGT030.9910.080 DG040.9980.209DGT040.9910.080 DG050.9970.208DGT050.9920.086 DG060.9920.211DGT060.9970.136 DG070.9990.210DGT070.8900.620 DG080.9990.210DGT080.9920.086 DG090.9970.209DGT090.9970.131 DG100.9590.210DGT100.9990.175 DG110.9920.206DGT110.9940.107 DG120.9940.213DGT120.9960.291 DG130.9990.211DGT130.9950.114 DG140.9990.211DGT140.9870.355 DG150.9970.211DGT150.9990.165

2.7 當歸炭炮制前后差異成分篩選及網(wǎng)絡(luò)藥理學分析

通過化學模式識別技術(shù)的量化分析，由PLS-DA初步分析篩選出指紋圖譜中峰23、22、10、16、7、3、2、1、4、11為當歸和當歸炭的主要差異特征峰，根據(jù)Q-Marker的“五原則”要求[8-9]，基于質(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、成分可測性的特點，篩選出的10個主要差異特征峰中，峰1（5-羥甲基糠醛）、3（色氨酸）、7（阿魏酸）為已指認的成分，其中阿魏酸為藥典中當歸的質(zhì)量控制成分，5-羥甲基糠醛是當歸炭炮制后產(chǎn)生的主要特征性成分，這3個成分可作為當歸炭炮制前后的質(zhì)量控制特征指標。當歸中化學成分眾多，結(jié)合二者的指紋圖譜分析，峰5（綠原酸）、8（洋川芎內(nèi)酯I）、9（洋川芎內(nèi)酯H）、14（藁本內(nèi)酯）在各批次當歸中峰面積較大且穩(wěn)定，是當歸的主要活性成分，且在當歸炭炮制后峰面積顯著下降。為擴充差異Q-Marker的選擇，篩選5-羥甲基糠醛、色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯共7個差異成分進行網(wǎng)絡(luò)藥理學分析。

圖3 PCA得分圖

圖4 PLS-DA得分圖

圖5 當歸和當歸炭PLS-DA模型中23個色譜峰的VIP值

2.7.1 候選差異化合物靶點預(yù)測 檢索中藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫（TCMSP，http://tcmspw.com/tcmsp.php）、swisstargetprediction數(shù)據(jù)庫（http://swisstargetpredi ction.ch/）中5-羥甲基糠醛、色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯7個化合物的作用靶點，swisstargetprediction數(shù)據(jù)庫選擇probability＞0.1進行篩選；并通過uniprot數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.org/）將預(yù)測出的靶點蛋白名轉(zhuǎn)換為對應(yīng)的基因名。其中洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯H 2個成分均未檢索到靶點蛋白，考慮到洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯H與藁本內(nèi)酯均屬于苯酞類成分，可互相轉(zhuǎn)化，藁本內(nèi)酯的預(yù)測結(jié)果一定程度上也可以反映洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯H的相關(guān)作用靶點，故將其余相關(guān)靶點蛋白整理合并，最終得到與5個化合物相關(guān)的63個靶點蛋白。

2.7.2 蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將篩選得到的63個靶點導入STRING（http://string-db. org）數(shù)據(jù)庫構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，選擇物種為“Homo sapiens”，蛋白交互評分值“high confidence＞0.4”，隱藏無聯(lián)系的節(jié)點，得到59個靶蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò)。以TSV格式導入Cytoscape 3.7.2軟件進行可視化及拓撲分析，結(jié)果見圖6。篩選出度（degree）參數(shù)≥2倍中位數(shù)，介數(shù)中心性（betweenness centrality）和接近中心性（closeness centrality）均大于中位數(shù)的共9個靶點作為核心靶點，分別為溶質(zhì)運載家族6成員4（solute carrier family 6 member 4，SLC6A4）、SLC6A3、單胺氧化酶A（monoamine oxidase A，MAOA）、5-羥色胺受體2C（5-hydroxytryptamine receptor 2C，HTR2C）、MAOB、SLC6A2、前列腺素-內(nèi)過氧化物合成酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2，PTGS2）、γ-氨基丁酸A型受體亞基α2（γ-aminobutyric acid type A receptor subunit α2，GABRA2）、谷氨酸離子型受體AMPA型亞基2（glutamate ionotropic receptor AMPA type subunit 2，GRIA2）（度值分別是18、15、15、15、14、14、12、12、12）。

圖6 靶點PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.7.3 基因本體論（gene ontology，GO）功能富集和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集 利用David數(shù)據(jù)庫（https://david.ncifcrf.gov/）對篩選的9個核心靶點進行GO功能富集和KEGG通路分析。GO功能分析和KEGG通路分析均選取“＜0.05”具有統(tǒng)計學意義。

GO功能富集共得到42個條目，其中生物過程（biological process，BP）占17條，細胞組成（cell composition，CC）占13條，分子功能（molecular function，MF）占12條，結(jié)果見圖7。BP主要包括對外源物質(zhì)刺激反應(yīng)的調(diào)節(jié)、神經(jīng)遞質(zhì)的運輸、代謝、生物合成等；CC主要包括神經(jīng)細胞（軸突、樹突等）組成、質(zhì)膜的組成部分等；MF主要包括調(diào)節(jié)單胺跨膜轉(zhuǎn)運體活性、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)運體活性、與血清素結(jié)合等。

圖7 核心靶點GO功能富集分析

KEGG富集共得到16條通路，結(jié)果見圖8。富集的通路主要涉及血清素突觸（serotonergic synapse）通路、多巴胺能突觸（dopaminergic synapse）通路、突觸小泡周期通路（synaptic vesicle cycle）等。表明這9個核心靶點可能主要通過調(diào)節(jié)這些通路起到干預(yù)治療疾病的作用。

2.7.4 差異成分-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 根據(jù)篩選得到的5個差異成分、9個核心靶點和16條通路，導入Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建當歸炭炮制前后主要差異成分的“差異成分-靶點-通路”可視化網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果見圖9。當歸炭炮制前后差異成分通過調(diào)控不同的蛋白靶點，作用于多條通路發(fā)揮作用。當歸的主要作用為補血調(diào)經(jīng)、活血止痛，臨床對血虛血瘀引起的月經(jīng)不調(diào)、虛寒腹痛等癥狀具有顯著治療效果。而炮制成當歸炭后，呈現(xiàn)止血作用。結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學分析，血清素能突觸和多巴胺能突觸通路均能影響疼痛的產(chǎn)生，在5個差異成分中，與藁本內(nèi)酯、阿魏酸連接度最高，提示兩者可能是當歸的主要活性成分并存在較高的協(xié)同作用，可同時作用于SLC6A3、MAOA、MAOB、SLC6A2、PTGS2這5個關(guān)鍵靶點，其中SLC6A3、SLC6A2為多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白，MAOA與MAOB與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的代謝有關(guān)，其作用機制可能與通過調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、5-羥色胺、多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)元反應(yīng)發(fā)揮神經(jīng)保護作用，并影響疼痛的產(chǎn)生相關(guān)。

圖8 KEGG通路富集分析結(jié)果

圖9 “差異成分-靶點-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

PTGS又稱環(huán)氧化酶（cyclooxygenase，COX），是生物體內(nèi)前列腺素（prostaglandin，PG）合成起始步驟的關(guān)鍵酶，可調(diào)控機體內(nèi)前列腺素的水平，能夠通過不同途徑參與炎癥反應(yīng)[10-11]。相關(guān)研究表明，COX-2表達過高會催化合成前列腺素，刺激子宮肌層持續(xù)收縮，導致子宮血流減少，引起痛經(jīng)[12]。提示PTGS2可能是當歸活血化瘀、調(diào)經(jīng)止痛的關(guān)鍵靶點。當歸炒炭后新生成的主要成分為5-羥甲基糠醛，文獻研究證實，5-羥甲基糠醛具有抗氧化、抗組織缺血、神經(jīng)保護等多種藥理活性[13]。其潛在靶點結(jié)果顯示，5-羥甲基糠醛能夠作用于GABRA2、GRIA2和PTGS2關(guān)鍵靶點，影響逆行內(nèi)源性大麻素信號傳導、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、多巴胺能突觸等多條通路發(fā)揮作用。

現(xiàn)代藥理學研究表明，綠原酸、阿魏酸能夠抑制血小板激活，達到抗血小板聚集的作用[14-15]。楊英來等對當歸補血、活血作用的譜效關(guān)系研究結(jié)果也表明阿魏酸與補血、活血活性關(guān)聯(lián)度最大[16]。以洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯為代表的苯酞類成分在當歸中含量較高，也是當歸揮發(fā)油重要組成部分，這些成分對血管具有一定的舒張作用，能夠改善血液流態(tài)和紅細胞聚集狀態(tài)，加快血流流速[17]。有研究報道，當歸油可通過升高子宮組織中NO含量和降低Ca2+水平顯著減少痛經(jīng)模型小鼠的扭體次數(shù)，可能是當歸調(diào)經(jīng)止痛的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[18]。

綜上，當歸炭炮制前后藥理作用的改變通過多成分、多靶點、多途徑發(fā)揮作用，推測當歸炭活血作用的減弱可能與炮制后阿魏酸、藁本內(nèi)酯等成分峰面積大幅下降有關(guān)，網(wǎng)絡(luò)藥理學的預(yù)測結(jié)果與已有文獻報道較為一致，說明該研究方法具有一定的準確性和可取性。這些有效成分可通過作用于多靶點，干預(yù)多條通路發(fā)揮藥效作用，進一步說明指紋圖譜所選的指標成分具有合理性。基于Q-Marker的五原則，為實現(xiàn)良好的質(zhì)量傳遞和溯源，初步預(yù)測色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯、5-羥甲基糠醛7個成分為當歸炭炮制前后潛在的差異Q-Marker，并對其進行含量測定研究。

2.8 當歸炭炮制前后差異Q-Marker含量測定

2.8.1 線性關(guān)系考察 分別取“2.3”項下配制的混合對照品母液5.00、2.00、1.00、0.40、0.25、0.10 mL于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，得色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯、5-羥甲基糠醛的質(zhì)量濃度分別為24.23、8.72、16.25、10.02、8.37、186.04、42.84 μg/mL，9.69、3.49、6.50、4.01、3.35、74.41、17.13 μg/mL，4.85、1.74、3.25、2.00、1.67、37.21、8.57 μg/mL，1.94、0.70、1.30、0.80、0.67、14.88、3.43 μg/mL，1.21、0.44、0.81、0.50、0.42、9.30、2.14 μg/mL，0.48、0.17、0.33、0.20、0.17、3.72、0.86 μg/mL的系列混合對照品溶液。

取對照品母液及上述不同質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，按照“2.4”項下色譜條件進樣測定，以對照品質(zhì)量濃度作為橫坐標（），峰面積作為縱坐標（），繪制標準曲線，計算回歸方程，結(jié)果分別為色氨酸＝4 798.4＋294.19，2＝1.000 0，線性范圍0.48～48.45 μg/mL；綠原酸＝3 426.6＋415.52，2＝0.999 5，線性范圍0.17～17.43 μg/mL；阿魏酸＝5 930.6＋920.4，2＝0.999 6，線性范圍0.33～32.50 μg/mL；洋川芎內(nèi)酯I＝13 694.0＋858.03，2＝0.999 9，線性范圍0.20～20.04 μg/mL；洋川芎內(nèi)酯H＝16 416.0＋652.97，2＝0.999 9，線性范圍0.17～16.73 μg/mL；藁本內(nèi)酯＝937.08－1 390.4，2＝0.999 5，線性范圍3.72～372.07 μg/mL；5-羥甲基糠醛＝14 756.0＋5 636.0，2＝0.999 7，線性范圍0.86～85.67 μg/mL。結(jié)果顯示，各成分在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.8.2 精密度試驗 取當歸樣品（DG12）的供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，重復進樣6次，計算色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯峰面積的RSD分別為2.26%、1.33%、1.45%、0.87%、1.03%、1.33%。另取當歸炭樣品（DGT12）的供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，重復進樣6次，計算5-羥甲基糠醛峰面積的RSD為0.46%，表明儀器精密度良好。

2.8.3 重復性試驗 取當歸樣品（DG12）6份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，計算色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯質(zhì)量分數(shù)的RSD分別為1.82%、2.81%、1.21%、1.05%、1.32%、2.42%。另取當歸炭樣品（DGT12）6份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件進樣測定，計算5-羥甲基糠醛質(zhì)量分數(shù)的RSD為2.81%，表明方法重復性良好。

2.8.4 穩(wěn)定性試驗 取當歸樣品（DG12）供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，分別于2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h進樣測定，計算色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯峰面積的RSD分別為2.50%、2.73%、1.50%、1.51%、1.24%、1.32%。另取當歸炭樣品（DGT12）供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件，分別于2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h進樣測定，計算5-羥甲基糠醛峰面積的RSD為2.63%，表明樣品穩(wěn)定性良好。

2.8.5 加樣回收率試驗 精密稱定已測定的當歸樣品（DG12）6份，每份約0.1 g，按1∶1加入適量對照品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液。按“2.4”項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯的平均加樣回收率分別為99.71%、100.09%、102.08%、103.49%、101.76%、102.04%，RSD分別為2.63%、2.21%、2.78%、0.99%、0.92%、0.68%。另取當歸炭樣品（DGT12）6份，每份約 0.1 g，按1∶1加入適量對照品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液。按“2.4”項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果5-羥甲基糠醛平均加樣回收率為103.15%，RSD為2.16%，滿足測定要求。

2.8.6 樣品含量測定 取當歸和當歸炭各15批，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件進樣測定，計算各成分含量，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，各批次當歸中阿魏酸質(zhì)量分數(shù)均大于0.05%，符合《中國藥典》2020年版標準，所選批次當歸質(zhì)量較均勻。色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯6個成分在大部分批次當歸中質(zhì)量分數(shù)均大于0.01%，各批次當歸炒炭后的色氨酸、綠原酸、阿魏酸、藁本內(nèi)酯的下降比例均超過50%，除DG01和DG05批次炒炭后洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯H含量差異不大，其余批次炒炭后洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯H含量均明顯下降，各批次當歸炒炭后產(chǎn)生了新成分5-羥甲基糠醛，質(zhì)量分數(shù)在0.720 6～3.989 0 mg/g。

表2 30批當歸和當歸炭樣品中各成分的質(zhì)量分數(shù)(n = 2)

Table2 Mass fractions of target compounds in 30 batches of ASR and ASRC(n = 2)

編號質(zhì)量分數(shù)/(mg?g?1) 色氨酸綠原酸阿魏酸洋川芎內(nèi)酯I洋川芎內(nèi)酯H藁本內(nèi)酯5-羥甲基糠醛 DG010.380 70.171 20.529 00.755 70.117 534.993 2? DG020.528 30.275 20.705 10.621 60.114 734.303 9? DG030.148 10.143 10.662 80.714 20.127 338.663 6? DG040.148 50.252 80.745 00.759 60.125 353.650 2? DG050.412 40.193 60.736 40.549 50.099 131.626 3? DG060.243 10.189 00.691 71.273 90.227 635.009 1? DG070.330 20.103 80.596 10.696 60.142 335.886 8? DG080.114 20.318 20.502 20.918 00.161 139.448 3? DG090.120 00.382 80.661 40.663 30.120 850.658 9? DG100.220 30.181 40.577 11.133 70.236 128.356 2? DG110.431 50.178 90.915 60.624 60.130 059.421 6? DG120.143 90.214 90.638 21.023 00.173 435.792 6? DG130.195 20.182 20.735 50.978 20.176 443.377 1? DG140.148 70.218 00.597 31.227 00.258 862.164 7? DG150.183 60.344 00.566 60.713 60.127 233.469 8? DGT010.000 00.081 10.000 00.554 20.083 613.852 80.720 6 DGT020.010 40.065 90.000 00.148 40.019 08.083 61.717 3 DGT030.000 00.000 00.000 00.138 90.024 05.671 33.989 0 DGT040.000 00.000 00.000 00.083 30.014 04.650 12.804 1 DGT050.000 00.081 10.000 00.554 20.083 613.852 80.720 6 DGT060.000 00.000 00.000 00.179 20.030 15.573 42.893 1 DGT070.000 00.000 00.000 00.083 30.014 04.650 11.185 7 DGT080.000 00.000 00.000 00.159 80.027 94.552 33.811 6 DGT090.000 00.000 00.000 00.120 10.019 14.966 62.138 3 DGT100.000 00.000 00.000 00.180 30.030 15.713 52.294 8 DGT110.000 00.033 70.000 00.117 00.018 13.990 81.910 1 DGT120.026 90.060 10.080 00.362 10.058 49.815 42.205 2 DGT130.000 00.000 00.019 60.145 50.025 65.643 43.271 9 DGT140.000 00.071 10.000 00.368 70.061 320.166 13.460 5 DGT150.000 00.000 00.000 00.078 30.014 24.200 21.336 1

“?”表示未檢出

“?” means not detected

3 討論

3.1 供試品溶液制備及色譜條件考察

本研究比較了不同提取溶劑、提取時間、提取方式和溶劑體積對當歸各色譜峰的影響。使用甲醇作為提取溶劑時，各色譜峰分離度較好，峰面積較大，故選擇甲醇作為提取溶劑。比較了回流和超聲提取法對當歸的提取情況，結(jié)果顯示，超聲提取時峰5即阿魏酸峰面積略低于回流提取。但有文獻研究表明，當歸中的阿魏酸松柏酯受熱時易分解為游離的阿魏酸和松伯醇[19]。因此，考慮溫度對成分含量的影響，選擇超聲提取法。同時對流動相梯度變化、體積流量、柱溫、檢測波長等參數(shù)進行優(yōu)化，最終確定的色譜條件能較全面分離當歸和當歸炭的化學成分，同時達到相關(guān)成分含量測定要求。

3.2 炭藥炮制機制及當歸炭炮制前后的成分變化

當歸為“婦科圣藥”，是活血補血的要藥，在醫(yī)家用藥中素有“十方九歸”之稱，可見其用藥之廣。由于成分復雜，功效多變，臨床中常通過炮制改變其藥性，以發(fā)揮不同的藥效。中藥炭藥的主要炮制機制分為2大類：一是基于藥性的炮制前后變化，二是基于活性物質(zhì)的炮制前后變化。炮制對四氣五味、升降浮沉、有毒無毒等藥性均有一定影響，炭藥在性味上多表現(xiàn)為“澀”，澀附于酸，具有收斂固澀的作用，而制炭后原藥材的性狀、性味、功能與主治均有一定程度的改變，而這必然與炮制前后藥材內(nèi)在的物質(zhì)基礎(chǔ)變化密不可分[20]。傳統(tǒng)炮制理論認為當歸甘溫，取其潤性，補血又潤腸；當歸炭則緩其辛烈之性而專于止血[21]。當歸和當歸炭相比較，當歸的揮發(fā)油氣味明顯，而炒炭后味澀、氣焦香，在性味上均發(fā)生了改變。當歸和當歸炭指紋圖譜中各色譜峰及指標成分含量也具有顯著的差異，當歸炒炭后各色譜峰均有不同程度的降低，色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯等活性成分含量經(jīng)炮制后均下降，新生成了5-羥甲基糠醛。其中綠原酸、阿魏酸等有機酸類成分性質(zhì)不穩(wěn)定，易受高溫的影響造成自身分解[22-23]。以洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯為代表的苯酞類成分則是當歸揮發(fā)油中的重要組成部分，經(jīng)高溫炮制后，當歸的組織結(jié)構(gòu)被破壞，揮發(fā)油逸散導致含量降低[24]。結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學預(yù)測結(jié)果，以阿魏酸和藁本內(nèi)酯為代表的有機酸類和苯酞類成分是當歸活血止痛的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，炒炭后藥理作用的改變與其炮制后的活性成分損失有關(guān)，符合炮制理論中炒炭以緩和藥性的特點。

此外，當歸炒炭后色氨酸含量下降與產(chǎn)生的5-羥甲基糠醛可能與當歸中的氨基酸類成分及當歸多糖經(jīng)高溫加熱后發(fā)生美拉德反應(yīng)有關(guān)[25]。已有研究證明5-羥甲基糠醛具有多種藥理活性，但在一定劑量下產(chǎn)生的明顯毒性也不容忽視。江海燕等[26]采用質(zhì)譜成像技術(shù)從組學水平可視化5-羥甲基糠醛給藥后腎臟組織代謝的時空變化，發(fā)現(xiàn)5-羥甲基糠醛早期毒性主要通過氧化應(yīng)激、能量代謝紊亂、嘌呤代謝障礙和氨基酸代謝失衡導致腎毒性?？紤]到5-羥甲基糠醛的潛在毒性，《中國藥典》2020年版中的部分品種標準也對其進行了控制，限度大多規(guī)定不高于葡萄糖含量的0.02%[27]。結(jié)合當歸炭含量測定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)當歸炒炭后5-羥甲基糠醛含量大幅度上升，因此，為避免潛在毒性，同時便于藥物安全監(jiān)控，對其中的5-羥甲基糠醛含量檢測十分必要。

3.3 基于指紋圖譜的當歸炭炮制前后差異Q-Marker

本研究通過建立UPLC指紋圖譜可較為直觀地反映當歸炭炮制前后的整體化學信息，但對于當歸中的揮發(fā)油和多糖類成分測定考慮不夠全面，其單一成分類Q-Marker的篩選還需要結(jié)合氣相及紫外測定等實驗進行進一步的研究。對通過指紋圖譜篩選出的7個主要差異成分進行了網(wǎng)絡(luò)藥理學分析，其中洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯H未找到相關(guān)靶點，結(jié)合文獻研究及當歸炭炮制前后指紋圖譜中峰面積情況，這2個成分在當歸中含量較高，且炮制前后含量差異較大，屬于苯酞類成分，是當歸揮發(fā)油的重要組成部分，具有潛在的藥理活性[28]。因此，結(jié)合中藥Q-Marker“五原則”中質(zhì)量傳遞與溯源及可測性要求，亦將其篩選為差異Q-Marker，同時對篩選的7個差異Q-Marker進行定量分析，當歸炒炭前后各成分含量差異顯著，提示當歸和當歸炭功效差異的物質(zhì)基礎(chǔ)。當歸中的化學成分復雜，其藥效的發(fā)揮也是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果，炒炭前后功效的差異通過多成分、多靶點、多通路發(fā)揮作用，通過建立的UPLC指紋圖譜及多指標成分含量測定，為揭示當歸炭炮制前后化學成分變化提供了實驗依據(jù)，也為當歸和當歸炭的Q-Marker研究和質(zhì)量評價提供了參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 向璐, 張巧艷, 趙琦明, 等. 黃芪-當歸化學成分、藥理作用及臨床應(yīng)用的研究進展 [J]. 中草藥, 2022, 53(7): 2196-2213.

[2] 王祝舉, 唐力英, 宋秉生, 等. 當歸炮制歷史沿革研究 [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2010, 16(3): 135-138.

[3] 王康宇, 陶雪慧, 劉小康, 等. 當歸道地產(chǎn)區(qū)及歷代炮制方法考證 [J]. 吉林中醫(yī)藥, 2021, 41(10): 1371-1374.

[4] 杜冠華, 王月華, 張冉, 等. 多成分多靶點是對中藥作用機制的表面認識 [J]. 世界科學技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2009, 11(4): 480-484.

[5] 李強, 杜思邈, 張忠亮, 等. 中藥指紋圖譜技術(shù)進展及未來發(fā)展方向展望 [J]. 中草藥, 2013, 44(22): 3095-3104.

[6] 牛明, 張斯琴, 張博, 等. 《網(wǎng)絡(luò)藥理學評價方法指南》解讀 [J]. 中草藥, 2021, 52(14): 4119-4129.

[7] 劉昌孝, 陳士林, 肖小河, 等. 中藥質(zhì)量標志物(Q-Marker): 中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的新概念 [J]. 中草藥, 2016, 47(9): 1443-1457.

[8] 張鐵軍, 白鋼, 陳常青, 等. 基于“五原則”的復方中藥質(zhì)量標志物(Q-marker)研究路徑 [J]. 中草藥, 2018, 49(1): 1-13.

[9] 劉昌孝. 中藥質(zhì)量標志物（Q-Marker）研究發(fā)展的5年回顧 [J]. 中草藥, 2021, 52(9): 2511-2518.

[10] 王訓翠, 儲明星, 陳宏權(quán). 前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2基因的研究進展 [J]. 生命科學, 2004, 16(1): 31-34.

[11] Hsu P S, Lin C M, Chang J F,. Participation of NADPH oxidase-related reactive oxygen species in leptin-promoted pulmonary inflammation: Regulation of cPLA2α and COX-2 expression [J]., 2019, 20(5): 1078.

[12] 趙敏珍, 應(yīng)延風. 環(huán)氧化酶和痛經(jīng)相關(guān)性研究進展 [J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2008, 17(23): 3712-3713.

[13] 李恩燦, 賀玖明, 靳洪濤, 等. 5-羥甲基糠醛的藥理和毒理研究進展 [J]. 中國藥物警戒, 2018, 15(4): 210-215.

[14] 樊宏偉, 肖大偉, 余黎, 等. 金銀花及其有機酸類化合物的體外抗血小板聚集作用 [J]. 中國醫(yī)院藥學雜志, 2006, 26(2): 145-147.

[15] 伍珊娜, 劉振杰, 章從恩, 等. 基于譜效關(guān)系的燈盞細辛體外抗血小板聚集活性成分研究 [J]. 中草藥, 2017, 48(24): 5179-5185.

[16] 楊英來, 崔方, 胡芳, 等. 當歸補血、活血作用的譜效關(guān)系研究 [J]. 中國中藥雜志, 2013, 38(22): 3923-3927.

[17] 李曦, 張麗宏, 王曉曉, 等. 當歸化學成分及藥理作用研究進展 [J]. 中藥材, 2013, 36(6): 1023-1028.

[18] 王小榮, 邱明豐, 謝國祥, 等. 當歸油對痛經(jīng)小鼠子宮組織中一氧化氮和鈣離子的影響 [J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2006, 17(5): 723-724.

[19] 李韶菁, 張迎春, 蘇培瑜, 等. 阿魏酸松柏酯的研究進展 [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2011, 17(3): 229-231.

[20] 趙玉升, 屈會化, 趙琰. 炭藥納米類成分的藥理作用研究進展 [J]. 中草藥, 2022, 53(3): 921-929.

[21] 鐘立甲. 基于代謝組學的生當歸、當歸炭、酒當歸活血化瘀作用機制研究[D]. 蘭州: 甘肅農(nóng)業(yè)大學, 2016.

[22] 郭滿滿, 肖卓炳, 于華忠, 等. 熱重法研究綠原酸的熱穩(wěn)定性、分解動力學及貯存期 [J]. 藥物評價研究, 2011, 34(5): 348-352.

[23] 徐自升, 蔡寶昌, 張弦. 中藥川芎中阿魏酸穩(wěn)定性的研究 [J]. 現(xiàn)代中藥研究與實踐, 2004, 18(2): 25-27.

[24] 張來賓, 呂潔麗, 陳紅麗, 等. 當歸中苯酞類成分及其藥理作用研究進展 [J]. 中國中藥雜志, 2016, 41(2): 167-176.

[25] 錢曉東, 周桂芬, 呂圭源. 不同產(chǎn)地當歸炮制前后多糖與新產(chǎn)生成分5-羥甲基糠醛和5-羥基麥芽酚含量變化規(guī)律性研究 [J]. 中華中醫(yī)藥學刊, 2014, 32(6): 1320-1323.

[26] 江海燕, 高杉杉, 李婕, 等. 基于質(zhì)譜成像技術(shù)探究5-羥甲基糠醛腎毒性作用機制 [J]. 中國藥物警戒, 2022, 19(2): 142-147.

[27] 祝清芬, 魏霞, 王維劍, 等. 基于雜質(zhì)遺傳毒性談藥物中5-羥甲基糠醛的質(zhì)量控制 [J]. 藥物分析雜志, 2018, 38(3): 485-489.

[28] 徐蘭蘭, 車仙花, 李寧, 等. 洋川芎內(nèi)酯類化合物藥理作用研究進展 [J]. 現(xiàn)代中藥研究與實踐, 2022, 36(2): 98-102.

Differential quality markers ofbefore and after processing based on UPLC fingerprinting and network pharmacology

QIN Liu-ying, LIANG Li-jin, HU Yi, GAN Li-fan, HUANG Sen, XU Jie,ZHANG Zhi-peng

Guangdong Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Formula Granule Enterprises, Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Foshan 528244, China

To screen the characteristic components of Danggui (, ASR) before and after processing, and establish a quantitative analysis method for the differential quality markers (Q-Marker) of ASR before and after processing, so as to provide a basis for the quality evaluation of ASR and Dangguitan (, ASRC).The fingerprints of ASR and ASRC were constructed separately by UPLC, and the chemical pattern recognition technique was applied to screen the main differential components of ASRC before and after processing, combined with the “five principles” of Q-Marker and network pharmacological analysis to screen the potential differential Q-Marker and quantitative analysis was conducted.A total of 19 common peaks were identified in 15 batches of ASR UPLC fingerprint profiles, 10 common peaks were identified in ASRC UPLC fingerprint profiles, and seven components were identified. Principal component analysis (PCA) was used to clearly distinguish ASR from ASRC; Ten major peaks affecting the difference between ASR and ASRC was identified by partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA), which were ranked in order of VIP value as peaks 23, 22, 10, 16, 7, 3, 2, 1, 4, 11. Combined with the “five principles” of Q-Marker and network pharmacological analysis, tryptophan, chlorogenic acid, ferulic acid, senkyunolide I, senkyunolide H, ligustilide and 5-hydroxymethylfurfural were screened as differential Q-Markers of ASRC before and after processing. The quantitative results of Q-Marker showed that the contents of tryptophan, chlorogenic acid, ferulic acid, senkyunolide I, senkyunolide H and ligustilide were all decreased significantly after ASR was fried into charcoal; Meanwhile, a new component 5-hydroxymethylfurfural was produced, with mass fractions ranging from 0.720 6—3.989 0 mg/g.The fingerprints established can effectively differentiate ASR and ASRC, and combined the “five principles” of Q-Marker and network pharmacology to analyze the main differential component groups of ASR and ASRC, which can provide reference for the Q-Marker research and quality evaluation of ASR and ASRC.

;; UPLC; fingerprint; chemical pattern recognition; network pharmacology; quality marker; principal component analysis; partial least squares-discriminant analysis; tryptophan; chlorogenic acid; ferulic acid; senkyunolide I; senkyunolide H; ligustilide; 5-hydroxymethylfurfural

R283.6

A

0253 - 2670(2023)18 - 5892 - 12

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.18.007

2023-03-29

中華人民共和國工業(yè)和信息化部2022年產(chǎn)業(yè)技術(shù)基礎(chǔ)公共服務(wù)平臺（2022-230-221）；佛山市核心技術(shù)攻關(guān)項目（1920001000378）

覃柳瑩（1996—），女，壯族，碩士，主要從事中藥飲片及配方顆粒質(zhì)量標準研究。Tel: (0757)85128604 E-mail: qlytcm@163.com

張志鵬（1990—），男，漢族，碩士，主要從事中藥飲片及配方顆粒質(zhì)量標準研究。Tel: (0757)85128604 E-mail: zhangzp0909@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]