閆盼 劉曉妍 張騰 王姝琪 王晟東 宋明芬

研究表明，精神分裂癥（schizophrenia，SZ）患者體內(nèi)存在多種微小RNA（microRNA，miRNA）表達(dá)異常；而全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)的第一個與SZ 相關(guān)的miRNA 為miR-137[1]。miR-137 可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)育和腦功能的網(wǎng)絡(luò)，從而在SZ 的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[2]。最近研究發(fā)現(xiàn)，外周血miR-137 可能是SZ 診斷的潛在生物標(biāo)志物[3-4]。奧氮平是臨床上常用的非典型抗精神病藥物，能明顯緩解SZ 患者的陽性癥狀和陰性癥狀，同時改善患者的認(rèn)知功能[5]，但臨床實踐中藥物療效具有較大的個體差異[6]。目前尚缺乏關(guān)于miR-137 表達(dá)在抗精神病藥物治療中的價值研究，故本研究通過測定奧氮平治療前后SZ 患者血漿miR-137 表達(dá)水平，以初步探討血漿miR-137 表達(dá)水平對奧氮平治療SZ 療效的預(yù)測價值。

1 對象和方法

1.1 對象 選取杭州市第七人民醫(yī)院2021 年6 月至2022 年12 月收治的78 例SZ 患者為研究對象，其中男35 例，女43 例；年齡18～57（37.64±12.24）歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）滿足國際疾病分類第10 次修訂版中SZ 的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）處于SZ 急性發(fā)作期；（3）年齡18～60 歲；（4）漢族。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝腎功能異常；（2）存在其他精神疾??；（3）合并嚴(yán)重的軀體疾病。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查通過[批準(zhǔn)文號：（2022 年）倫審第（013）號]，所有患者或家屬知情同意。

1.2 方法

1.2.1 藥物治療 所有患者均予奧氮平（規(guī)格：5 mg/片，國藥準(zhǔn)字：H20203557，華海藥業(yè)有限公司）單一抗精神病藥物治療，起始劑量5 mg/d，1 周內(nèi)加至治療劑量，然后酌情調(diào)整給藥劑量，最大允許劑量20 mg/d，治療4 周后觀察療效。

1.2.2 療效評估 采用陽性與陰性癥狀量表（positive and negative symptom scale，PANSS）評估基線和治療4周末臨床療效，本研究以PANSS 減分率＜50%定義為無效，≥50%定義為有效[7]。PANSS 由陽性癥狀、陰性癥狀、一般精神病理癥狀等3 個分量表組成，評分越高表示精神分裂癥狀越嚴(yán)重。減分值=基線PANSS-治療后PANSS；減分率=（基線PANSS-治療后PANSS）/（基線PANSS-30）×100%。

1.2.3 血漿miR-137 表達(dá)水平檢測 采用qRT-PCR法。治療前及治療4 周后采集受試者肘靜脈血5 mL，2 000 r/min 離心10 min，收集血漿；使用miRNA 提取分離試劑盒抽提血漿總RNA。為減少RNA 抽提過程引起的濃度誤差，加入線蟲miR-39 作為外參[8]。將RNA 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，總體系20 μL，反應(yīng)條件：42 ℃60 min，95 ℃3 min。取cDNA 進(jìn)行qRT-PCR，總體系20 μL；反應(yīng)條件：預(yù)變性95 ℃15 min；94 ℃20 s，64 ℃30 s，72 ℃34 s，共5 個循環(huán)；94 ℃20 s，60 ℃34 s，共40 個循環(huán)；每個樣本設(shè)置3 個復(fù)孔。計算miR-137 與miR-39 的ΔCt，以2-ΔΔCt表示miR-137 表達(dá)水平。miR-137 表達(dá)水平下降差值=基線miR-137 表達(dá)水平-治療后miR-137 表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；組內(nèi)治療前后比較采用配對樣本t檢驗。奧氮平治療4 周后血漿miR-137 表達(dá)水平與PANSS 評分的相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)。繪制ROC 曲線分析血漿miR-137表達(dá)水平對奧氮平治療SZ 療效的預(yù)測效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 奧氮平治療前后PANSS 評分比較 78 例SZ 患者奧氮平治療后PANSS 總分及陽性癥狀、陰性癥狀、一般精神病理癥狀評分均明顯低于治療前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。奧氮平治療無效30 例，有效48 例。

表1 治療前后PANSS量表得分比較（n=78）

2.2 奧氮平治療無效組與有效組患者治療前后血漿miR-137 表達(dá)水平比較 奧氮平治療有效組患者治療后血漿miR-137表達(dá)水平較治療前明顯降低（P＜0.05），而奧氮平治療無效組患者治療前后血漿miR-137 表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 奧氮平治療無效組與有效組患者治療前后血漿miR-137表達(dá)水平比較

2.3 奧氮平治療4 周后血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值與PANSS 評分的相關(guān)性 奧氮平治療4 周后血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值與PANSS 總分、陽性癥狀評分及一般精神病理癥狀評分的減分值均呈正相關(guān)（r=0.495、0.493、0.373，均P＜0.05），與陰性癥狀評分減分值無相關(guān)性（r=0.209，P＞0.05），見圖1。

圖1 血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值與PANSS 評分相關(guān)性的散點圖

2.4 血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值對奧氮平治療SZ 療效的預(yù)測價值 血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值預(yù)測奧氮平治療SZ 療效的AUC 為0.875（95%CI：0.801～0.949），靈敏度為0.750，特異度為0.933，截斷值為0.332，見圖2。

圖2 血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值預(yù)測奧氮平治療SZ 療效的ROC 曲線

3 討論

研究表明，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中miRNA 表達(dá)水平較高，其在神經(jīng)細(xì)胞增殖、分化、凋亡及突觸可塑性方面起著關(guān)鍵作用[9-10]。近年來，越來越多學(xué)者關(guān)注miRNA在SZ 發(fā)病機(jī)制中的作用。在SZ 研究的早期階段，有學(xué)者通過測定SZ 患者死后腦組織中不同腦區(qū)的miRNA 表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，腦組織中miRNA 異常表達(dá)與SZ 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[11]。由于腦組織樣本較難獲取，故miRNA 檢測在臨床實踐存在較大的局限性，于是學(xué)者們對SZ 的病理生理和療效評估的研究方向轉(zhuǎn)變?yōu)榛谕庵苎膍iRNA[12-13]。

多項研究證實miR-137 與SZ 的發(fā)生密切相關(guān)。Wu 等[14]檢測了首發(fā)SZ 患者與健康對照者外周血miR-137 表達(dá)水平，結(jié)果顯示miR-137 在SZ 患者中表達(dá)上調(diào)，有望成為SZ 診斷的潛在生物標(biāo)志物。Ma 等[3]也證實SZ 患者外周血中miR-137 過表達(dá)。此外，研究證實miR-137 與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟密切相關(guān)，可通過級聯(lián)效應(yīng)調(diào)節(jié)多個神經(jīng)發(fā)育信號通路和靶基因表達(dá)[15]。Wright 等[16]通過功能富集分析得出miR-137 參與SZ 的可能調(diào)控信號通路，主要包括軸突導(dǎo)向、Ephrin 受體信號、長時程調(diào)節(jié)、細(xì)胞連接和蛋白激酶A 信號，這些通路參與突觸可塑性、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控、神經(jīng)遞質(zhì)傳遞等過程。Kwon 等[17]證實SZ 的易感基因如CSMD1、C10orf26、CACNA1C 和TCF-4 等是miR-137 的靶基因，這些靶基因大多涉及多巴胺通路調(diào)節(jié)異?；蚱渌盘栟D(zhuǎn)導(dǎo)異常。

多項研究表明，抗精神病藥物治療前后部分miRNA 表達(dá)水平發(fā)生明顯改變。Huang 等[18]報道抗精神病藥物治療后，患者外周血單個核細(xì)胞中miR-195 表達(dá)水平明顯降低，治療后miR-195 表達(dá)水平下降率與PANSS 總分以及一般精神病理癥狀評分的減分率呈正相關(guān)。Wei 等[19]發(fā)現(xiàn)SZ 患者血漿中miR-193a-3p、miR-130b 表達(dá)上調(diào)，經(jīng)抗精神病藥物治療1 年后，與未緩解患者相比，精神癥狀緩解的患者這2 個miRNA被抑制。Chen 等[20]發(fā)現(xiàn)SZ 患者經(jīng)抗精神病藥物治療后，其血清miR-21 表達(dá)明顯下調(diào)，且與陽性、攻擊性和一般精神病理癥狀的改善程度呈負(fù)相關(guān)。本研究首次探討奧氮平治療對SZ 患者血漿miR-137 表達(dá)水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療后有效組患者miR-137 表達(dá)水平明顯下降，而無效組治療前后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；此外，患者奧氮平治療4 周后血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值與PANSS 總分、陽性癥狀評分及一般精神病理癥狀評分的減分值均呈正相關(guān)。進(jìn)一步分析血漿miR-137 表達(dá)水平下降差值的預(yù)測效能，結(jié)果顯示其對奧氮平治療SZ 的療效具有較好的預(yù)測效能，AUC 為0.875（95%CI：0.801～0.949），靈敏度為0.750，特異度為0.933。筆者推測SZ 患者經(jīng)奧氮平治療后，miR-137 可能通過調(diào)控與SZ 發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的靶基因來影響抗精神病藥物的反應(yīng)，但具體機(jī)制有待后續(xù)探討明確。

綜上所述，血漿miR-137 表達(dá)水平在一定程度上能預(yù)測奧氮平治療SZ 的臨床療效。這為尋找抗精神病藥物潛在的治療靶點、構(gòu)建個體化給藥模式提供了參考。