曹春育,陳麗華,戴桂紅
母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm,BPDCN)是一種罕見的高度侵襲性淋巴造血系統(tǒng)腫瘤,它起源于漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞的前體[1],特征性地表達白細(xì)胞分化抗原4(CD4)、白細(xì)胞分化抗原56(CD56)和白細(xì)胞分化抗原123(CD123),不表達T/B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和髓系特異性標(biāo)記。該腫瘤在臨床特征、組織學(xué)形態(tài)及免疫表型上與其他多種淋巴造血系統(tǒng)惡性腫瘤有重疊,故診斷較困難。本研究通過分析和觀察2例BPDCN的臨床表現(xiàn)、組織學(xué)形態(tài)及免疫表型,并結(jié)合相關(guān)文獻復(fù)習(xí),探討其診斷與鑒別診斷要點。
1.1 臨床資料 2例BPDCN分別為泰州市人民醫(yī)院2020年住院病例及2019年會診病例,本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)倫理要求,病人簽署知情同意書。病例1,男性,76歲,病人因發(fā)現(xiàn)左側(cè)顴面部腫物1年余并逐漸增大,近期感生長速度加快就診,查體左側(cè)顴面部可見一腫塊,4.0 cm×4.0 cm,顏色暗紅,邊界不清,稍突出皮膚表面,無明顯破潰,質(zhì)地中等偏硬,與周圍組織粘連不明顯,按壓無疼痛,未及波動感,周圍皮膚無明顯紅腫(圖1A),臨床診斷為面部血管瘤行手術(shù)切除。病例2,男性,42歲,病人因發(fā)現(xiàn)左頸部包塊1月入院,查體左頸部觸及一淋巴結(jié),長徑2.0 cm,活動度可,無壓痛,表面皮膚無紅腫破潰,入院后行淋巴結(jié)活檢(圖1B)。
圖1 母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤(BPDCN)2例臨床皮損照片:1A為病例1左側(cè)顴面部4.0 cm×4.0 cm暗紅腫物,邊界不清,稍突出皮膚表面,無明顯破潰,質(zhì)地中等偏硬;1B為病例2皮下直徑2.0 cm結(jié)節(jié),切面實性,灰紅色,質(zhì)地嫩 圖2 母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤(BPDCN)2例皮損組織病理:2A為病例1腫瘤細(xì)胞彌漫分布于真皮內(nèi),腫瘤細(xì)胞與表皮之間無明顯分界,但未侵犯表皮(HE染色×40);2B為病例1腫瘤細(xì)胞浸潤皮下脂肪組織,可見“星空”現(xiàn)象(HE染色×40);2C為病例1腫瘤細(xì)胞圍繞皮脂腺,在膠原纖維束之間浸潤性生長(HE染色×200);2D為病例1腫瘤細(xì)胞中等大小,胞質(zhì)稀少,核圓形、卵圓形或略不規(guī)則,染色質(zhì)細(xì)膩,可見小核仁(HE染色×400);2E為病例2淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)消失,殘留個別淋巴濾泡,腫瘤細(xì)胞彌漫性一致浸潤,無明顯間質(zhì)反應(yīng)(HE染色×100);2F為病例2腫瘤細(xì)胞沿副皮質(zhì)區(qū)生長,包繞淋巴濾泡(HE染色×200);2G為病例2腫瘤細(xì)胞中等大小,胞質(zhì)稀少,細(xì)胞核大,卵圓形或不規(guī)則,可見一小核仁以及核分裂象(HE染色×400) 圖3 母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤(BPDCN)2例皮損組織免疫組織化學(xué):3A為病例1腫瘤細(xì)胞白細(xì)胞分化抗原(CD)123陽性(EnVision法×400);3B為病例1腫瘤細(xì)胞CD4陽性(EnVision法×400);3C為病例1腫瘤細(xì)胞CD56陽性(EnVision法×400);3D為病例1腫瘤細(xì)胞B細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2)陽性(EnVision法×400);3E為病例1腫瘤細(xì)胞CD2陽性(EnVision法×400);3F為病例1腫瘤細(xì)胞CD7陽性(EnVision法×400) ;3G為病例2腫瘤細(xì)胞CD123陽性(EnVision法×400);3H為病例2腫瘤細(xì)胞CD4陽性(EnVision法×400);3I為病例2腫瘤細(xì)胞CD56陽性(EnVision法×100);3J為病例2腫瘤細(xì)胞CD43陽性(EnVision法×400);3K為病例2腫瘤細(xì)胞CD38陽性(EnVision法×400)
1.2 方法 送檢組織經(jīng)10%中性福爾馬林固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,3 μm厚連續(xù)切片,分別進行蘇木精-伊紅(HE)染色、免疫組織化學(xué)和原位雜交。免疫組織化學(xué)染色采用EnVision二步法,所選一抗CD123、CD4、CD56、白細(xì)胞分化抗原43(CD43)、白細(xì)胞分化抗原33(CD33)、白細(xì)胞分化抗原20(CD20)、白細(xì)胞分化抗原79a(CD79a)、白細(xì)胞分化抗原10(CD10)、白細(xì)胞分化抗原2(CD2)、白細(xì)胞分化抗原3(CD3)、白細(xì)胞分化抗原5(CD5)、白細(xì)胞分化抗原7(CD7)、白細(xì)胞分化抗原8(CD8)、白細(xì)胞分化抗原30(CD30)、白細(xì)胞分化抗原38(CD38)、白細(xì)胞分化抗原21(CD21)、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)、白細(xì)胞分化抗原117(CD117)、髓過氧化物酶(MPO)、穿孔素、T淋巴細(xì)胞內(nèi)抗原1(TIA-1)、顆粒酶B、白細(xì)胞分化抗原68(CD68)、白細(xì)胞分化抗原163(CD163)、白細(xì)胞分化抗原1a(CD1a)購自福州邁新生物技術(shù)有限公司,細(xì)胞角蛋白20(CK20)、突觸素、嗜鉻素A、B細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2)基因、B細(xì)胞淋巴瘤-6(Bcl-6)基因、轉(zhuǎn)錄因子C-myc、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)、SRY相關(guān)高遷移率族盒蛋白-11(SOX-11)、S-100蛋白、肌酸激酶、上皮膜抗原(EMA)、間變性淋巴瘤激酶(ALK)、多發(fā)性骨髓瘤原癌基因-1(MUM-1)、白細(xì)胞共同抗原(LCA)、配對盒基因-5(PAX-5)、細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原67(Ki-67)以及EnVision試劑盒均購自丹麥 DAKO 公司。EB病毒編碼的小RNA(EBER)原位雜交試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)和原位雜交染色步驟按照試劑說明書進行,所有染色均設(shè)陽性對照和陰性對照。具體操作步驟按說明書進行。
2.1 大體檢查 病例1,送檢帶皮腫物1枚,大小4.0 cm×4.0 cm×1.2 cm,表面暗紅色,無破潰,剖面灰紅色、實性、質(zhì)嫩。病例2,送檢結(jié)節(jié)1枚,長徑2.0 cm,剖面灰紅色、實性、質(zhì)嫩。
2.2 鏡下觀察 病例1,皮膚腫物示表皮萎縮變薄,真皮(圖2A)及皮下膠原纖維間、脂肪組織內(nèi)(圖2B)見彌漫成片的腫瘤細(xì)胞浸潤,并包繞皮脂腺、汗腺及神經(jīng)生長(圖2C),部分區(qū)域皮膚附屬器破壞減少,無明顯壞死和嗜血管現(xiàn)象,腫瘤細(xì)胞緊鄰表皮,與表皮之間缺乏無細(xì)胞浸潤帶,真皮淺層見大量紅細(xì)胞外滲。腫瘤細(xì)胞呈中等大小,形態(tài)較一致,胞質(zhì)稀少,細(xì)胞核圓形、卵圓形或不規(guī)則,染色質(zhì)細(xì)膩或空淡,可見明顯的單個嗜酸性小核仁(圖2D),核分裂易見,細(xì)胞凋亡多見,出現(xiàn)巨噬細(xì)胞吞噬碎片的“星空”現(xiàn)象。病例2,淋巴結(jié)活檢示淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)破壞,局部殘留少量的淋巴濾泡(圖2E),瘤細(xì)胞呈彌漫性一致分布或沿副皮質(zhì)區(qū)生長,包繞淋巴濾泡(圖2F),腫瘤細(xì)胞間無背景細(xì)胞浸潤和纖維間質(zhì)反應(yīng),無血管增生。腫瘤細(xì)胞中等大小,介于中心母細(xì)胞和套細(xì)胞之間,胞質(zhì)稀少,細(xì)胞核卵圓形或輕度扭曲呈角,染色質(zhì)相對細(xì)膩,可見小核仁,核分裂易見(圖2G)。
2.3 免疫組織化學(xué)染色及原位雜交結(jié)果 病例1:腫瘤細(xì)胞CD123(圖3A)、CD4(圖3B)、CD56(圖3C)、Bcl-2(圖3D)、CD2(圖3E)、CD7(圖3F)、CD43、CD33、CD10、C-myc均陽性,TdT、CD117、MPO、CD20、CD79a、Bcl-6、CD3、CD5、CD8、穿孔素、TIA-1、顆粒酶B、cyclin D1、SOX-11、S-100、CD38、CK20、突觸素、嗜鉻素A、CD163、CD68、CD1a、CD30、ALK、肌酸激酶、EMA均陰性;Ki-67陽性率約60%;原位雜交檢測EBER陰性。病例2:腫瘤細(xì)胞CD123(圖3G)、CD4(圖3H)、CD56(圖3I)、CD43(圖3J)、CD38(圖3K)、MUM-1均陽性;LCA、CD20、CD79a、PAX-5、CD10、C-myc、CD3、CD5、CD8、CD21、CD138、TdT、MPO、肌酸激酶均陰性;Ki-67陽性指數(shù)約40%;原位雜交檢測EBER陰性。
2.4 病理診斷 2例均診斷為BPDCN。
2.5 隨訪 病例1病人術(shù)后2月,于原切口處皮下出現(xiàn)復(fù)發(fā)病灶,隨后至上級醫(yī)院就診。病例2病人確診后未進一步治療,后失訪。
BPDCN是一種罕見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,1994年由Adachi等[2]首次報道,由于其組織來源的不確定,根據(jù)其免疫表型曾被命名為無顆粒CD4+自然殺傷細(xì)胞白血病、母細(xì)胞性自然殺傷細(xì)胞白血病/淋巴瘤及無顆粒CD4+CD56+血液皮膚腫瘤。隨后,陸續(xù)有研究證實該腫瘤起源于漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞(PDC)前體,在2008年世界衛(wèi)生組織(WHO)造血與淋巴組織腫瘤分類中將其正式命名為BPDCN,歸類為急性髓系白血?。ˋML)和相關(guān)腫瘤。2016年WHO修訂分類中又將其作為一個單獨類型歸為髓系惡性腫瘤[1,3]。BPDCN的發(fā)病率極低,在血液惡性腫瘤中約占0.44%,在皮膚造血系統(tǒng)腫瘤中約占0.7%[4]。該腫瘤可發(fā)生于任何年齡,但主要發(fā)生于老年男性病人,可累及全身多個部位,最常見的發(fā)病部位為皮膚,皮損可單發(fā)或多發(fā),大小不等,形態(tài)多樣,可表現(xiàn)為瘀斑樣、斑塊或結(jié)節(jié)[5]。皮膚以外常見受累的部位包括淋巴結(jié)、脾臟,還有一些少見部位也有報道,如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼睛、鼻腔、扁桃體、肝肺、睪丸等,60%~90%的病例在診斷時發(fā)生骨髓和外周血受累的情況[6-8]。極少部分病人以急性白血病為首發(fā)特征,發(fā)病開始即累及全身[9]。本研究病人均為男性,病例1以皮膚受累為首發(fā)癥狀,表現(xiàn)為面部的暗紅色結(jié)節(jié),確診后病人行骨髓活檢及PET-CT全身檢查,未發(fā)現(xiàn)骨髓和其他部位受累;病例2以淋巴結(jié)受累為首發(fā)癥狀,確診時未發(fā)現(xiàn)皮膚病變及外周血受累。
BPDCN組織學(xué)特征是中等大小的腫瘤細(xì)胞呈彌漫性浸潤,細(xì)胞核單個,圓形、卵圓形或不規(guī)則,染色質(zhì)細(xì)膩,可見1個或多個嗜酸性小核仁,胞質(zhì)稀少,類似于母細(xì)形態(tài),核分裂象數(shù)量不等。發(fā)生于皮膚時,腫瘤細(xì)胞主要累及真皮層,也可侵及皮下脂肪組織,但不侵犯表皮,腫瘤細(xì)胞與表皮之間常見無細(xì)胞浸潤帶,少數(shù)病例也可缺乏,一般無腫瘤性壞死及血管壁侵犯。本研究病例1腫瘤細(xì)胞與表皮之間缺乏無細(xì)胞浸潤帶,有顯著的紅細(xì)胞外滲,核分裂象及凋亡多見,形成“星空”現(xiàn)象。累及淋巴結(jié)時,淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)破壞,可見殘留淋巴濾泡,腫瘤細(xì)胞在濾泡間區(qū)或髓質(zhì)區(qū)彌漫性浸潤,本研究病例2腫瘤細(xì)胞呈彌漫性或副皮質(zhì)區(qū)浸潤,淋巴結(jié)內(nèi)無背景細(xì)胞浸潤和纖維間質(zhì)反應(yīng)、無血管增生。累犯骨髓時可表現(xiàn)為微小的間質(zhì)浸潤或局部形成大片結(jié)節(jié),骨髓涂片中腫瘤細(xì)胞原始,缺乏顆粒,胞質(zhì)不規(guī)則呈偽足樣突起,形成“手鏡樣”形態(tài),細(xì)胞膜和偽足可見胞質(zhì)空泡。
BPDCN診斷主要依賴免疫組織化學(xué),腫瘤細(xì)胞特征性表達CD4、CD56和PDC相關(guān)標(biāo)記[CD123、白細(xì)胞分化抗原303(CD303)、CD2相關(guān)蛋白(CD2AP)、T細(xì)胞淋巴瘤1(TCL1)等],除了CD2、CD7(T細(xì)胞標(biāo)記)和CD33(髓系標(biāo)記)[6],一般不表達T細(xì)胞(CD3、CD5)、B細(xì)胞[白細(xì)胞分化抗原19(CD19)、CD20和CD79a]、自然殺傷細(xì)胞(顆粒酶B、穿孔素和TIA-1)和髓系(MPO、CD13和CD117)相關(guān)標(biāo)記。部分病例可表達TdT、CD10、Bcl-2、MUM-1、CD68、S-100[1,10]。EBER原位雜交檢測陰性。本研究2例免疫組織化學(xué)CD4、CD56、CD123和CD43均為陽性;例1表達CD33、CD10、Bcl-2及T細(xì)胞標(biāo)記CD2、CD7;例2表達CD38和MUM-1;2例TdT及其他T/B細(xì)胞標(biāo)記、細(xì)胞毒性標(biāo)記及髓系標(biāo)記均為陰性;2例原位雜交檢測EBER陰性。BPDCN病人無特異性的遺傳學(xué)改變,約一半以上病例會出現(xiàn)染色體異常,常發(fā)生改變的染色體包括5q、6q、13q、12p和9單體、15單體?;虮磉_譜分析發(fā)現(xiàn)BPDCN存在多種基因異常,包括抑癌基因的失活[視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白1(RB1)、腫瘤抑制基因P53(TP53)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子1B(CDKN1B)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)],癌基因的激活(KRAS基因、NRAS基因、HES6基因、RUNX2基因、FLT3基因),表觀遺傳調(diào)節(jié)因子的突變[DNA羥甲基化酶10-11轉(zhuǎn)位基因2(TET2)、DNA羥甲基化酶10-11轉(zhuǎn)位基因1(TET1)、DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)、異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)、異檸檬酸脫氫酶2(IDH2)]以及NF-κB通路[Bcl-2和干擾素調(diào)節(jié)因子4(IRF4)]的異常激活等,但這些改變對診斷該疾病并沒有特異性[11-12]。
BPDCN鑒別診斷包括:(1)髓系肉瘤(MS)或白血?。跘ML和慢性粒-單核細(xì)胞白血病(CMML)]。兩者臨床表現(xiàn)、細(xì)胞學(xué)形態(tài)和免疫表型上均有重疊,AML和CMML可表達TdT、CD4、CD56,AML中亦可表達CD123和TCL1,但髓系肉瘤(MS)或白血?。ˋML和CMML)同時表達髓系標(biāo)記MPO、CD117、CD34可排除。(2)Burkitt淋巴瘤。好發(fā)于兒童和年輕人,常發(fā)生于結(jié)外部位,最常累及頜骨,而BPDCN主要發(fā)生于老年病人,易累及皮膚。形態(tài)學(xué)上兩者均表現(xiàn)為單一的幼稚母細(xì)胞樣,均可出現(xiàn)“星空”現(xiàn)象,但前者瘤細(xì)胞核染色質(zhì)呈粗塊狀,后者染色質(zhì)相對細(xì)膩。免疫組織化學(xué)前者表達CD20、CD79a、Bcl-6陽性,不表達TdT、CD123、CD4、CD56、Bcl-2,Ki-67指數(shù)可高達90%~100%,可與BPDCN鑒別。(3)淋巴母細(xì)胞淋巴瘤(LBL)。BPDCN可發(fā)生于兒童病人,腫瘤細(xì)胞形態(tài)呈母細(xì)胞樣,可見“星空”現(xiàn)象,且可表達TdT和CD7,而少數(shù)LBL可表達CD4和CD56,故診斷時兩者需鑒別。LBL主要累及兒童及青年,T-LBL主要表現(xiàn)為縱隔腫塊,B-LBL主要累及淋巴結(jié),免疫組織化學(xué)TdT呈彌漫一致的強陽性,同時表達T細(xì)胞(CD2、CD3、CD5)或B細(xì)胞(CD20、CD79a、PAX-5)相關(guān)抗原,不表達CD123可鑒別。(4)套細(xì)胞淋巴瘤母細(xì)胞樣變異型。與BPDNC形態(tài)學(xué)有交叉,瘤細(xì)胞均表現(xiàn)為母細(xì)胞樣,形態(tài)一致,核圓形或有扭曲,染色質(zhì)細(xì)膩,核分裂象多見,可見“星空”現(xiàn)象,但前者免疫組織化學(xué)CD5、cyclin D1、SOX11陽性可鑒別之。(5)結(jié)外自然殺傷細(xì)胞/T細(xì)胞淋巴瘤(鼻型自然殺傷細(xì)胞/T細(xì)胞淋巴瘤)??杀磉_CD4或CD56,或兩者同時表達,但其腫瘤細(xì)胞呈多形性,不具有母細(xì)胞形態(tài),且具有明顯的壞死和嗜血管特征,免疫表型T細(xì)胞標(biāo)志[CD3、T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)、Zeta鏈相關(guān)蛋白激酶70(ZAP-70)]和細(xì)胞毒分子(穿孔素、TIA-1)陽性表達,原位雜交EBER陽性,有助于鑒別。(6)蕈樣霉菌病。組織學(xué)特征為真皮內(nèi)小到中等大小的腦回狀腫瘤細(xì)胞呈灶性、片狀或彌漫性浸潤,可累及皮下脂肪組織,可見親表皮現(xiàn)象及Pautrier微膿腫,免疫組織化學(xué)腫瘤細(xì)胞雖然可以表達CD4,但不表達CD56、CD123。(7)Langerhans細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥。免疫組織化學(xué)表達CD4、CD56及CD123,與BPDCN有重疊,但前者同時表達CD1a、Langerin、S-100,瘤細(xì)胞核更加不規(guī)則,具有豐富的嗜酸性胞質(zhì),腫瘤背景中通常出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞。(8)Merkel細(xì)胞癌。發(fā)生于皮膚,瘤細(xì)胞具有母細(xì)胞樣外觀,且免疫組織化學(xué)表達CD56,可能與BPDCN相似,但前者還表達神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記(嗜鉻素A、突觸素)和CK20(核周點狀陽性)。(9)小圓細(xì)胞性惡性黑色素瘤。腫瘤細(xì)胞形態(tài)一致,小圓形、胞質(zhì)稀少、胞核深染,圓形或卵圓形,可見核仁,形態(tài)類似淋巴母細(xì)胞,免疫組織化學(xué)MelanA、HMB45、S-100、SOX-10均陽性表達,可與BPDNC相鑒別。
BPDCN侵襲性強,進展較快,預(yù)后較差,中位生存時間約1年[5-6],目前對該病尚無統(tǒng)一的最佳治療方案,多數(shù)采用AML型、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)型或淋巴瘤型化療方案[6]并結(jié)合自體或異體干細(xì)胞移植(SCT)等鞏固治療。單純放療對BPDCN病人無效,但它可以增強化療的效果,特別是對皮膚有病變的病人[13]。BPDCN靶向治療的研究正在進行中,針對CD123的靶向藥物SL-401是第一個專門批準(zhǔn)用于治療成人及2歲兒童以上BPDCN的藥物[14],此外,CD123嵌合抗原受體(CAR)T細(xì)胞(CAR-T)[15]以及Bcl-2抑制劑venetoclax也已被用于治療化療耐藥的BPDCN病人[16],但具體療效仍需大量及長期的臨床試驗來驗證。
總之,由于BPDCN罕見,且組織學(xué)形態(tài)不特異,免疫表型不典型,與多種淋巴造血系統(tǒng)腫瘤有重疊,使BPDCN的診斷特別具有挑戰(zhàn)性,其正確診斷必須在排除其他相似腫瘤的基礎(chǔ)上,結(jié)合臨床表現(xiàn)、組織形態(tài)特征及免疫表型綜合分析,必要時尚需加做基因檢測協(xié)助診斷。