周韶輝 解宜興 毛盼 王丞 王曉清 周先文 魏營(yíng)

文章編號(hào)：1006-3188（2023）04-017-04

摘要：本研究旨在研究復(fù)合益生菌對(duì)幼鯢生長(zhǎng)及免疫指標(biāo)的影響。隨機(jī)選取體質(zhì)健康、體重100g/尾左右的2齡幼鯢，分別添加占基礎(chǔ)餌料重量0.20%、0.40%、0.60%的配比復(fù)合益生菌進(jìn)行拌料投喂試驗(yàn)，并設(shè)置空白對(duì)照組，每組設(shè)置三個(gè)重復(fù)組，共12組，試驗(yàn)期180d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定各組大鯢的生長(zhǎng)及攝食指標(biāo)、血液生理生化指標(biāo)及血清抗氧化酶及非特異性免疫指標(biāo)，結(jié)果顯示三個(gè)試驗(yàn)組大鯢終末體重、平均增重率、特定生長(zhǎng)率均顯著高于對(duì)照組，指標(biāo)數(shù)據(jù)說明以復(fù)合益生菌拌料投喂有利于大鯢的生長(zhǎng)；中劑量組及高劑量組大鯢血液中的總蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量均顯著高于對(duì)照組及低劑量組；試驗(yàn)組大鯢血清中酸性磷酸酶（ACP）均高于對(duì)照組，這顯示出復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢的非特異性免疫有促進(jìn)作用；中劑量組及高劑量組大鯢血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性均顯著性高于對(duì)照組及低劑量組。結(jié)果表明，復(fù)合益生菌（芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌）添加日常餌料重量0.40%、0.60%的配比中劑量、高劑量組不僅能促進(jìn)大鯢的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)還能促進(jìn)大鯢對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而增強(qiáng)體質(zhì)，提升疾病抵抗力。

關(guān)鍵詞：復(fù)合益生菌；幼鯢；免疫指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S966.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中國(guó)大鯢擁有極高的科研及經(jīng)濟(jì)價(jià)值，已在我國(guó)已形成規(guī)模化養(yǎng)殖。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大和養(yǎng)殖環(huán)境的惡化，我國(guó)大鯢養(yǎng)殖業(yè)越來越受困于病害的影響，尤其是細(xì)菌性、真菌性和病毒性疾病給大鯢養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于傳統(tǒng)的化學(xué)類和抗生素類藥物毒性較大，不僅容易使病原微生物產(chǎn)生耐藥性，還嚴(yán)重污染水環(huán)境，因此尋找可以替代藥物的免疫添加劑正逐漸成為本領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。水產(chǎn)動(dòng)物益生菌的主要作用機(jī)制包括免疫促進(jìn)、抑菌、營(yíng)養(yǎng)促進(jìn)等［1］，本研究開展復(fù)合益生菌制劑對(duì)大鯢生長(zhǎng)及免疫力的影響，以期對(duì)大鯢的疫病綠色防控提供更有效的方法，對(duì)大鯢養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展和資源保護(hù)具有重要的積極意義。接下來主要就針對(duì)復(fù)合益生菌對(duì)幼鯢生長(zhǎng)及免疫指標(biāo)的影響進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

湖南張家界大鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)事務(wù)中心。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間

2022年01月-2022年06月，試驗(yàn)期共計(jì)180d。

1.3 試驗(yàn)材料

復(fù)合益生菌由吉首大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室提供，該復(fù)合益生菌為30%芽孢桿菌、30%酵母菌、40%乳酸菌組成的菌液，經(jīng)平皿菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定，結(jié)果顯示活菌總數(shù)為5×109CFU/mL。供試大鯢由湖南張家界大鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)事務(wù)中心提供，為規(guī)格100g/尾左右的2齡幼鯢。

1.4 試驗(yàn)內(nèi)容

根據(jù)前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)考察以占基礎(chǔ)餌料不同配的復(fù)合益生菌拌料投喂，對(duì)大鯢生長(zhǎng)指標(biāo)及非特異性免疫指標(biāo)的影響。

1.4.1供試大鯢的選擇與分組

隨機(jī)選取體質(zhì)健康、體重100g/尾左右的2齡幼鯢（幼鯢為卵黃完全消失，從開始主動(dòng)攝食到外鰓完全消失的大鯢）48尾，分為對(duì)照組、復(fù)合益生菌拌料投喂低劑量組、中劑量組及高劑量組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4尾大鯢。其中對(duì)照組：基礎(chǔ)餌料投喂；低劑量組：以基礎(chǔ)餌料重量0.20%配比復(fù)合益生菌拌料投喂；中劑量組：以基礎(chǔ)餌料重量0.40%配比復(fù)合益生菌拌料投喂；高劑量組：以基礎(chǔ)餌料0.60%配比復(fù)合益生菌拌料投喂。

1.4.2 試驗(yàn)餌料組成

根據(jù)幼鯢階段生長(zhǎng)需要，調(diào)整基礎(chǔ)餌料配方，以50%米蝦、50%大草魚切絲進(jìn)行投喂。

1.4.3 生長(zhǎng)及攝食指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)期間，記錄供試大鯢的初始體重及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的體重、每日投餌量及殘餌量，計(jì)算試驗(yàn)期內(nèi)大鯢體重增加量、平均增重率、餌料系數(shù)、特定生長(zhǎng)率。具體計(jì)算公式如下：

體重增加量=W2－W1；

平均增重率=［（W2－W1）/W1］/n×100%；

餌料系數(shù)=（F1－F2）/（W2－W1）；

特定生長(zhǎng)率=（lnW2－lnW1）/t×100%

式中，W1為大鯢的初始總重、W2為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鯢的總重，n為各個(gè)重復(fù)的樣本數(shù)，F(xiàn)1為總投餌量、F2為總殘餌量，t為實(shí)驗(yàn)總天數(shù)。

1.4.4 血液生理指標(biāo)和生化指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)所有供試大鯢以無菌注射器進(jìn)行尾靜脈采血，并將血樣注入到添加抗凝劑的采血管中，將血樣低溫保存，送至湖南張家界市人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室以全自動(dòng)生化儀進(jìn)行檢測(cè)。生理指標(biāo)主要測(cè)定白細(xì)胞數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、血紅蛋白（Hb）及血小板總數(shù)（Plt）等，生化指標(biāo)主要測(cè)定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TBIL-K）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）、甘油三酯（TG）膽固醇（CHOL）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）等。

1.4.5 血清抗氧化酶和非特異性免疫指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)所有供試大鯢以無菌注射器進(jìn)行尾靜脈采血，采集到的血液于4℃靜置2h后，再以4000r/min離心10min，取上清液，即為血清。分別以試劑盒測(cè)定待測(cè)血清中的酸性磷酸酶（ACP）、過氧化氫酶（CAT）及SOD（超氧化物歧化酶）等抗氧化酶和非特異性免疫指標(biāo)。具體方法如下：

（1）ACP的測(cè)定采用酸性磷酸酶試劑盒，其活力單位定義為：100mL血清或1g組織蛋白在37℃與基質(zhì)作用30min產(chǎn)生1mg酚為一個(gè)金氏單位；

（2）CAT的測(cè)定采用過氧化氫酶測(cè)定試劑盒，其活力單位定義為：1mL或1mg組織每秒鐘分解1μmol的H2O2的量為一個(gè)活力單位；

（3）SOD的測(cè)定采用總SOD試劑盒，其中以血清為樣品，活力單位定義為1mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量。

1.4.6 發(fā)病率及成活率統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)期間密切觀察各組大鯢的生長(zhǎng)情況，如發(fā)生病害感染應(yīng)及時(shí)采取隔離措施，并對(duì)病鯢進(jìn)行疾病診斷及治療。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，統(tǒng)計(jì)各組大鯢各類病害發(fā)生情況、死亡數(shù)，計(jì)算發(fā)病率、死亡率及成活率。

1.5 飼養(yǎng)管理

將供試大鯢養(yǎng)殖于陰涼避光處，養(yǎng)殖水源為寶峰湖湖水，水溫保持在20～25℃之間，溶解氧＞6.0mg/L，pH值為6.5～7.5。餌料經(jīng)消毒后于每日18：00投喂，次日08：00撈出殘餌，分別記錄每日各組的投餌量與殘餌量。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件處理后，用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著，P＜0.01表差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢生長(zhǎng)性能的影響

由統(tǒng)計(jì)分析（見表1）可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，三個(gè)試驗(yàn)組大鯢終末體重、平均增重率、特定生長(zhǎng)率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說明以復(fù)合益生菌拌料投喂有利于大鯢的生長(zhǎng)；三個(gè)試驗(yàn)組之間終末體重、平均增長(zhǎng)率、特定生長(zhǎng)率差異不顯著（P＞0.05）；四個(gè)組別的餌料系數(shù)均無顯著性差異；四組試驗(yàn)大鯢均未出現(xiàn)死亡。

2.2 復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢血液生理指標(biāo)的影響

由統(tǒng)計(jì)分析（見表2）可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，四組大鯢血液中的白細(xì)胞數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、血紅蛋白（Hb）以及血小板總數(shù)（Plt）均無顯著性差異（P＞0.05），說明復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢血液生理指標(biāo)無不利影響。

2.3 復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢血液生化指標(biāo)的影響

由統(tǒng)計(jì)分析（見表3）可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，中劑量組及高劑量組大鯢血液中的總蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量均顯著高于對(duì)照組及低劑量組（P＜0.05），但中劑量組與高劑量組之間、對(duì)照組與低劑量組之間總蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量差異不顯著（P＞0.05）；四組大鯢血液中的總膽紅素（TBIL-K）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）、甘油三酯（TG）、膽固醇（CHOL）谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）堿性憐酸酶（ALP）含量均無顯著性差異（P＞0.05）。

2.4 復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢血清抗氧化酶和非特異性免疫指標(biāo)的影響

由統(tǒng)計(jì)分析（見表4）可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，四組大鯢血清中的酸性磷酸酶（ACP）及過氧化氫酶（CAT）活性均無顯著性差異（P＞0.05），但試驗(yàn)組大鯢血清中酸性磷酸酶（ACP）均高于對(duì)照組，這顯示出復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢的非特異性免疫或有促進(jìn)作用；中劑量組及高劑量組大鯢血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性均顯著性高于對(duì)照組及低劑量組（P＜0.05），但中劑量組與高劑量組之間、低劑量組與對(duì)照組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.5 復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢發(fā)病率及成活率的影響

由統(tǒng)計(jì)分析（見表5）可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，所有組別的大鯢均無死亡；其中對(duì)照組發(fā)病率為16.67%，低劑量組發(fā)病率為8.33%，中劑量組及高劑量組發(fā)病率均為0；經(jīng)診斷，所有患病大鯢所患疾病均為水霉病。

3 討論

益生菌是通過定殖在動(dòng)物體內(nèi)，改變宿主某一部位菌群組成的一類對(duì)宿主有益的活性微生物。研究表明，益生菌能促進(jìn)水生動(dòng)物生長(zhǎng)性能及免疫力提升，減少病害的發(fā)生，從而降低生產(chǎn)成本。此外，益生菌還可改善水體環(huán)境，從而使養(yǎng)殖獲得較好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益［2］。

相較于單一益生菌，近年來復(fù)合型益生菌的應(yīng)用日益增多，與添加單一益生菌相比，在飼料中添加復(fù)合益生菌對(duì)降低腸道細(xì)菌數(shù)量、調(diào)節(jié)水產(chǎn)動(dòng)物腸道菌群平衡、改善腸道菌群組成等具有更好的促進(jìn)作用［3］。

本研究以芽孢桿菌、乳酸菌及酵母菌組成的復(fù)合益生菌拌料投喂大鯢，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組大鯢的生長(zhǎng)性能得到有效提升。血液中的總蛋白由白蛋白和球蛋白組成，良好的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)可以使上述指標(biāo)維持在較高水平。試驗(yàn)結(jié)果顯示，以占日常餌料配比0.40%、0.60%的復(fù)合益生菌拌料投喂大鯢，能使得大鯢血液中總蛋白、白蛋白顯著高于對(duì)照組，說明合理添加量的益生菌的使用能促進(jìn)大鯢對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而增強(qiáng)其體質(zhì)［4］。

另外，試驗(yàn)結(jié)果還顯示，以復(fù)合益生菌拌料投喂的大鯢相較對(duì)照組大鯢血液中酸性磷酸酶（ACP）活性得到顯著提升，這顯示出復(fù)合益生菌拌料投喂對(duì)大鯢的非特異性免疫或有促進(jìn)作用。

此外，試驗(yàn)期間對(duì)照組及低劑量組部分大鯢體表出現(xiàn)灰白色菌絲，并伴隨表皮潰爛及少量出血，部分病鯢表現(xiàn)出焦躁不安、在飼養(yǎng)池內(nèi)急速游動(dòng)等狀態(tài)，經(jīng)診斷，確定上述大鯢感染水霉病。對(duì)照組與中、高劑量組發(fā)病率的差異進(jìn)一步證實(shí)了適量以添加芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌組成的復(fù)合益生菌拌料投喂，對(duì)增強(qiáng)大鯢體質(zhì)有一定的促進(jìn)作用［5］。

綜上所述，以芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌組成的復(fù)合益生菌拌料投喂不僅能在一定程度上促進(jìn)大鯢的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)還能在一定程度上促進(jìn)大鯢對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而增強(qiáng)其體質(zhì)，提升其疾病抵抗力。但由于本試驗(yàn)使用的為成品復(fù)合益生菌，因此對(duì)三種單一菌種之間的協(xié)同或拮抗作用機(jī)理尚不清楚，還有待進(jìn)一步研究。

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*通訊作者：魏營(yíng)（1983-）男，工程師，野生動(dòng)植物保護(hù)與利用 E-mail：zsh78718@163.com