蔣菁蓉, 張?zhí)旌? 高崇勇, 王 元, 魏 超, 陳 婧

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 1.感染科;2.繼續(xù)教育部;3.急診科,四川 成都 610000;4.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院綦江醫(yī)院 肛腸科,重慶 401420

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染屬于世界重要公共衛(wèi)生問題,高達(dá)20億人具有HBV感染史,約2.4億人被診斷為慢性HBV感染,每年因HBV感染造成死亡的患者約有65萬[1-2]。有研究報(bào)道,我國HBV感染人數(shù)占總?cè)丝诒壤s為10.00%[3]。機(jī)體長期HBV感染能使肝組織受到持續(xù)損傷,促使肝細(xì)胞產(chǎn)生纖維化病變,造成肝硬化。HBV-DNA載量可直接反映HBV感染后病毒復(fù)制活動(dòng)情況,其持續(xù)增高造成的組織損傷屬于肝硬化形成的主要原因[4]。既往研究表明,HBV感染期間,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞參與免疫抑制過程,且與慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)緊密相關(guān)[5]。CD4+CD25+能夠有效反映調(diào)節(jié)性T細(xì)胞變化[6]。白細(xì)胞介素33(interleukin-33,IL-33)屬于新型炎癥因子,可在CHB肝纖維化病變發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮作用[7]。本研究旨在探討HBV感染患者HBV-DNA載量與外周血CD4+CD25+、IL-33水平、肝組織病理的相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院自2021年1月至2022年12月收治的104例CHB患者為研究對(duì)象。依據(jù)HBV-DNA載量將患者分為高載量組(HBV-DNA載量>1.0×105IU/ml,n=71)與低載量組(1.0×103IU/ml

1.2 研究方法 抽取所有患者空腹靜脈血,以3 000 r/min離心10 min,獲得血清樣本,放入-20℃冰箱存儲(chǔ)待測。通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymease chain reaction,PCR)法進(jìn)行HBV-DNA載量測定。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測兩組患者血清IL-33水平,試劑盒由上海心語生物科技有限公司提供。通過流式細(xì)胞分析儀(貝克曼庫爾特公司生產(chǎn),型號(hào)CytoFLEX)進(jìn)行CD4+CD25+測定。肝組織病理檢查:于超聲引導(dǎo)下實(shí)施1 s穿刺活檢術(shù),獲得約1.5 cm肝組織,注意其內(nèi)部結(jié)構(gòu)中有3個(gè)及以上完整匯管區(qū),然后放入10%甲醛液固定,常規(guī)石蠟包埋處理。分別行蘇木精-伊紅染色、Masson染色、網(wǎng)狀纖維染色,由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師閱片診斷。參照《病毒性肝炎防治方案》完成肝炎癥活動(dòng)分級(jí)評(píng)估和纖維化分期評(píng)估[9]。肝炎癥活動(dòng)分級(jí)評(píng)估分為G0～G4級(jí),纖維化分期分為S0～S4期,S4期判斷為肝硬化,S2～S3期判斷為明顯纖維化。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較 兩組患者性別構(gòu)成、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)、吸煙史比例、酗酒史比例比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較/例(百分率/%)

2.2 兩組患者外周血CD4+CD25+、IL-33比較 高載量組患者CD4+CD25+、IL-33均高于低載量組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者外周血CD4+CD25+、IL-33比較

2.3 兩組患者肝組織病理比較 兩組患者纖維化分期、肝炎癥活動(dòng)分級(jí)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者肝組織病理比較/例(百分率/%)

2.4 CD4+CD25+、IL-33與HBV-DNA載量相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示,CD4+CD25+、IL-33與HBV-DNA載量呈正相關(guān)性(r=0.492、0.513,P<0.05)。

2.5 多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析顯示,CD4+CD25+、IL-33、纖維化分期、肝炎癥活動(dòng)分級(jí)均為HBV-DNA載量的影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析

3 討論

HBV侵入人體后一般不會(huì)直接損傷肝細(xì)胞,而是干擾免疫調(diào)控系統(tǒng),造成肝細(xì)胞病變。HBV感染后,會(huì)在體內(nèi)繁殖,啟動(dòng)先天免疫反應(yīng),然后建立一種適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng),在控制HBV的同時(shí)導(dǎo)致器官受損[10-11]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞參與免疫應(yīng)答穩(wěn)態(tài)以及免疫耐受維持過程,在自身免疫疾病、感染免疫、移植以及腫瘤免疫中起免疫調(diào)節(jié)作用。對(duì)于HBV感染者,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平上調(diào)可能抑制其細(xì)胞免疫功能,引起免疫耐受,病毒持續(xù)存在并不斷復(fù)制,為促使CHB發(fā)展為肝硬化以及肝癌的關(guān)鍵原因[12-13]。

本研究結(jié)果顯示,高載量組患者CD4+CD25+、IL-33均高于低載量組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這提示,CD4+CD25+、IL-33可能與HBV感染患者HBV-DNA載量有關(guān)。CD4+CD25+能夠?qū)BV感染特異性引起的CD4+、CD8+增殖作用加以抑制,在抗HBV感染免疫反應(yīng)損傷中起重要作用[14]。人體多種組織中存在IL-33表達(dá),其可在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞引起的免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用,加重炎癥反應(yīng),并對(duì)機(jī)體免疫平衡狀態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié),與多種免疫疾病形成及發(fā)展密切相關(guān)[15-16]。侯麗娟等[17]研究發(fā)現(xiàn),IL-33表達(dá)和HBV感染存在緊密聯(lián)系,且能夠反映肝纖維化情況。進(jìn)一步Spearman相關(guān)分析顯示,CD4+CD25+、IL-33與HBV-DNA載量呈正相關(guān)(r=0.492、0.513,P<0.05)。這提示,CD4+CD25+、IL-33水平越高,HBV感染患者HBV-DNA載量越大。這可能是由于機(jī)體CD4+CD25+水平或功能障礙,減弱了機(jī)體對(duì)病毒引起的細(xì)胞毒性T細(xì)胞以及效應(yīng)T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng),導(dǎo)致HBV無法被完全清除,使機(jī)體處于免疫耐受狀態(tài);HBV-DNA載量升高時(shí)HBV復(fù)制較為活躍,機(jī)體出現(xiàn)抗HBV免疫應(yīng)答行為,而這種免疫應(yīng)答能夠引起肝炎癥反應(yīng),導(dǎo)致IL-33合成增加。HBV感染后,機(jī)體通過免疫功能清除病毒的同時(shí),能夠損傷肝細(xì)胞,這類受損細(xì)胞修復(fù)過程與細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積,導(dǎo)致肝纖維化病變[18]。有研究報(bào)道,肝炎癥程度以及纖維化分期均與血清HBV-DNA載量密切相關(guān)[19]。本研究中多因素Logistic回歸分析顯示,CD4+CD25+、IL-33、纖維化分期、炎癥分級(jí)均為HBV-DNA載量的影響因素(P<0.05)。HBV復(fù)制后主要經(jīng)機(jī)體免疫功能介導(dǎo)肝組織病理損害,檢測HBV-DNA載量能夠了解HBV復(fù)制活躍度,檢測水平越高,說明HBV復(fù)制行為越活躍,對(duì)患者肝組織產(chǎn)生的傷害越大,加劇肝炎癥活動(dòng)以及纖維化病變。因此,臨床對(duì)于高水平HBV-DNA載量的CHB患者,需要重視肝炎癥活動(dòng)以及纖維化進(jìn)展,適時(shí)給予肝病理活檢,了解肝病理狀態(tài)[20]。

綜上所述,HBV感染患者HBV-DNA載量與外周血CD4+CD25+、IL-33水平、肝組織病理密切相關(guān)。CD4+CD25+、IL-33水平越高,HBV-DNA載量越大,肝纖維化病變與炎癥程度越嚴(yán)重。