曹 雯 徐玉祥 范 麗 郭 潔 李 江 張九芝

(1 西安市中醫(yī)醫(yī)院,陜西中醫(yī)藥大學(xué)西安附屬醫(yī)院腎病科,西安,710077; 2 陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,咸陽(yáng),712046; 3 西電集團(tuán)醫(yī)院腎病科,西安,710077)

腎臟缺血再灌注損傷(Renal Ischemia Reperfusion Injury,RIRI)是指腎臟缺血并恢復(fù)血液供應(yīng)后引起的一系列腎臟損傷,可導(dǎo)致腎功能障礙[1-2]。在缺血后,再灌注觸發(fā)了一系列的病理生理級(jí)聯(lián)反應(yīng),包括細(xì)胞內(nèi)Ca2+的釋放、自由基和活性氧的過(guò)度產(chǎn)生、中性粒細(xì)胞的募集,這一系列反應(yīng)加速了細(xì)胞損傷[3-4]。因此,抑制氧化應(yīng)激和炎癥是減輕RIRI的有效途徑。川陳皮素(Nobiletin,NOB)是一種主要存在于柑橘類水果中的多甲氧基黃酮,具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗阿爾茨海默病和帕金森病等活性[5-7]。據(jù)報(bào)道,NOB對(duì)腦缺血具有神經(jīng)保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與上調(diào)核因子紅系2相關(guān)因子2(Nuclear Factor Erythroid 2-related Factor 2,Nrf2)和血紅素氧合酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1),下調(diào)核因子κB表達(dá)有關(guān)[5]。NOB通過(guò)恢復(fù)受損的自噬流量來(lái)減輕大鼠急性心肌梗死后的不良心臟重構(gòu)[8]。此外,NOB通過(guò)激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol-3-kinase/Protein Kinase B,PI3K/AKT)信號(hào)通路減輕RIRI[9]。NOB通過(guò)抑制炎癥介質(zhì)和調(diào)節(jié)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS)-內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS)表達(dá)對(duì)大鼠RIRI發(fā)揮保護(hù)作用[10]。上述結(jié)果說(shuō)明NOB對(duì)RIRI具有保護(hù)作用,然而,具體的分子機(jī)制尚不清楚。

多條細(xì)胞信號(hào)通路參與了RIRI的發(fā)生發(fā)展[11-12]。組蛋白去乙?；赋聊畔⒄{(diào)節(jié)因子1(Silent Information Regulator 1,SIRT1)是一種重要的代謝傳感器,可對(duì)細(xì)胞壓力、饑餓和熱量限制作出反應(yīng)[13]。SIRT1的激活促進(jìn)了調(diào)節(jié)線粒體生物發(fā)生的基因轉(zhuǎn)錄,從而維持能量和代謝穩(wěn)態(tài)[14]。據(jù)報(bào)道,SIRT1是許多植物黃酮類化合物的主要靶點(diǎn)[15]。此類化學(xué)物質(zhì)對(duì)SIRT1的激活可調(diào)節(jié)線粒體生物發(fā)生和線粒體自噬。此外,SIRT1使叉頭框蛋白O(Forkhead Box Protein O,FOXO)家族的成員(包括FOXO3a)脫乙?；⒂绊懫湎掠巫允赏緩絒16]。研究顯示,SIRT1及其下游自噬信號(hào)調(diào)節(jié)缺血再灌注誘導(dǎo)的損傷[17]。最近,DUSABIMANA等[18]報(bào)道,NOB通過(guò)激活SIRT1/FOXO3a介導(dǎo)的自噬和線粒體生物發(fā)生來(lái)減輕肝臟缺血再灌注損傷。然而,目前尚不清楚NOB在RIRI中的可能作用機(jī)制。因此,本研究旨在揭示NOB是否通過(guò)激活SIRT-1/FOXO3a來(lái)減輕RIRI。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 40只8周齡雄性無(wú)特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級(jí)Balb/c小鼠購(gòu)自陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)生物制品有限公司[SCXK(陜)2018-001],體質(zhì)量20～25 g。將小鼠飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)SPF級(jí)環(huán)境下:恒溫(23±2)℃、恒濕(60±10)%和12 h光暗循環(huán)照明。飼養(yǎng)期間不限制飲食和飲水。所有小鼠預(yù)適應(yīng)飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本研究已獲得西安市中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)(倫理審批號(hào):2018XZYYD015),所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均按照動(dòng)物福利倫理要求執(zhí)行。

1.1.2 藥物 川陳皮素(純度:98.25%,MedChemExpress公司,美國(guó),批號(hào):HY-N0155)。

1.1.3 試劑與儀器 蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin,HE)染色試劑(批號(hào):G1120)、天狼星紅染色試劑(批號(hào):G1471)均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。血清肌酐(Serum Creatinine,Cr,批號(hào):C011-2-1)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN,批號(hào):C013-1-1)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD,批號(hào):A001-3-2)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px,批號(hào):A005-1-2)和丙二醛(Malondildehyde,MDA,批號(hào):A003-1-2)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。TUNEL試劑盒(Roche,瑞士,批號(hào):11684817910),RIPA裂解液(碧云天生物技術(shù)研究所,批號(hào):P0013B)。Pierce BCA蛋白分析試劑盒(批號(hào):23225)、Trizol試劑(批號(hào):10296010)均購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Science。SIRT1(批號(hào):ab110304)、FOXO3a(批號(hào):ab109629)、抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤-2關(guān)聯(lián)X蛋白(BCL2-Associated X,Bax)(批號(hào):ab32503)、抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤-2(B-cell Lymphoma-2,Bcl-2)(批號(hào):ab182858)、微管相關(guān)蛋白輕鏈3(Light Chain-3,LC3)(批號(hào):ab192890)、p62(批號(hào):ab211324)、β-actin(批號(hào):ab8227)、一抗及辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗(批號(hào):ab205719)均購(gòu)自英國(guó)Abcam。高容量cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào):4374967)、Power SYBR? Green Master mix(批號(hào):4367659)、StepOneTMReal-Time PCR System(批號(hào):4376357)均購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystem。

1.2 方法

1.2.1 小鼠分組及處理 NOB和SIRT1抑制劑EX527均使用0.1%二甲基亞砜溶解。將小鼠分為5組:假手術(shù)組、模型組、NOB組、EX527組、NOB+EX527組,每組6只。在建模前24 h,假手術(shù)組和模型組小鼠腹腔注射200 μL 0.1%二甲基亞砜溶劑,NOB組小鼠腹腔注射200 μLNOB(50 mg/kg),EX527組小鼠腹腔注射200 μL的SIRT1抑制劑EX527(5 mg/kg),NOB+EX527組小鼠腹腔注射100 μLNOB(50 mg/kg)和100 μL EX527(5 mg/kg)。

1.2.2 RIRI小鼠模型的建立 術(shù)前對(duì)小鼠禁食禁水處理24 h,小鼠腹腔注射75 mg/kg的戊巴比妥鈉麻醉。備皮及碘伏消毒后,雙側(cè)背部入路切口,分離出小鼠左側(cè)腎臟,用無(wú)損傷顯微血管夾夾住左腎動(dòng)靜脈,阻斷左腎血流。然后游離右側(cè)腎臟,結(jié)扎腎蒂并切除右側(cè)腎臟,縫合皮膚切口。左側(cè)腎臟缺血40 min后腎臟表面變成黑紅色,然后松開(kāi)左腎血管夾恢復(fù)左腎血液灌注,并縫合傷口。假手術(shù)組(Sham)小鼠僅開(kāi)腹但不阻斷腎臟血流。

1.2.3 血清Cr和BUN水平的檢測(cè) 建模24 h后小鼠眼眶后靜脈叢取血,室溫下1 000×g離心15 min,取上清液。按照試劑盒的說(shuō)明檢測(cè)血清中Cr和BUN的水平。

1.2.4 腎臟組織中氧化應(yīng)激生物標(biāo)志物的檢測(cè) 取血后斷頭處死小鼠并分離左腎,磷酸鹽緩沖液(Phosphate-buffered Saline,PBS)沖洗,將一部分腎組織與100 mmol/L的trisPBS混合并制備勻漿,4 ℃下12 000 r/min離心10 min。按照試劑盒的說(shuō)明檢測(cè)SOD、GSH-Px和MDA含量。

1.2.5 組織病理學(xué)分析 分離左腎后,將一部分腎組織用10%多聚甲醛固定,石蠟包埋,切成5 μm切片,通過(guò)HE染色觀察腎臟結(jié)構(gòu)和形態(tài)學(xué)改變。天狼星紅染色檢測(cè)膠原沉積,通過(guò)分析腎臟切片中紅色染色面積的百分比來(lái)計(jì)算纖維化面積。

1.2.6 細(xì)胞凋亡檢測(cè) 將小鼠腎組織置于4%多聚甲醛中固定24 h。常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切成5 μm石蠟切片。脫蠟水合后,在PBS中漂洗3次,5 min/次,切片用透析液(0.1%Triton X-100和0.1%檸檬酸鈉)在4 ℃孵育10 min,在PBS中洗滌漂洗3次,5 min/次,然后用50 μL的脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP Nick-end Labeling,TUNEL)試劑在37 ℃下避光孵育60 min。用PBS漂洗3次,5 min/次,然后用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色細(xì)胞核2 min。隨機(jī)取6個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的TUNEL陽(yáng)性凋亡細(xì)胞數(shù)。TUNEL陽(yáng)性率=TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè) 小鼠腎組織在含有蛋白酶抑制劑的放射免疫沉淀法(Radioimmunoprecipitation Assay,RIPA)緩沖液中在冰上裂解30 min。在4 ℃下15 000×g離心15 min后,將上清液用Pierce BCA蛋白分析試劑盒測(cè)定蛋白濃度。用10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白裂解產(chǎn)物并轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(Polyvinylidenefluoride,PVDF)膜上。5%脫脂牛奶室溫封閉1 h后,將膜與抗SIRT1(1∶1 000稀釋)、FOXO3a(1∶1 000稀釋)、抗凋亡蛋白Bax(1∶3 000稀釋)、抗凋亡蛋白Bcl-2(1∶2 000稀釋)、微管相關(guān)蛋白LC3(1∶2 000稀釋)、p62(1∶3 000稀釋)和β-actin(1∶1 000稀釋)在4 ℃下過(guò)夜孵育。然后將膜與辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗(1∶1 000)室溫孵育1 h。之后使用電化學(xué)發(fā)光(Electrochemiluminescence,ECL)試劑顯影,β-actin用作內(nèi)部對(duì)照。采用Image J軟件對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)行定量分析。

1.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) 采用Trizol法提取腎組織總RNA。根據(jù)高容量cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。使用Power SYBR? Green Master mix和StepOneTMReal-Time PCR System進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性4 min,95 ℃變性60 s,55 ℃退火60 s,72 ℃延伸30 s,40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參,采用2-△△Ct法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。引物序列如下:SIRT1,上游為5′-ACCAAATCGTTACATATTCC-3′,下游為5′-CAAGGGTTCTTCTAAACTTG-3′。FOXO3a,上游為5′-CTGTCCTATGCCGACCTGATCAC-3′,下游為5′-CATTCTGAACGCGCATGAAGCG-3′。β-actin,上游為5′-CGTTGACATCCGTAAAGACC-3′,下游為5′-AACAGTCCGCCTAGAAGCAC-3′。

2 結(jié)果

2.1 NOB減輕RIRI小鼠腎組織病變 HE染色顯示,假手術(shù)組小鼠腎組織形態(tài)正常。模型組小鼠腎組織出現(xiàn)胞漿空泡、血管變性、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、腎小管細(xì)胞腫脹和腎小管壞死等病變。NOB組小鼠腎組織病變較模型組明顯減輕。NOB+EX527組小鼠腎組織病變較NOB組明顯加重。見(jiàn)圖1。

微波介質(zhì)材料的研究主要采用諧振法和網(wǎng)絡(luò)參數(shù)法測(cè)量被測(cè)物品的介電常數(shù).常見(jiàn)易燃有機(jī)液體與水的介電常數(shù)差異較大，如表1所示.

圖1 各組小鼠腎組織比較(HE染色,×400)

天狼星紅染色顯示,紅色染色區(qū)域?yàn)槟z原,代表纖維化;黃色染色區(qū)域?yàn)榧∪饫w維。假手術(shù)組腎組織紅色染色面積較小。模型組腎組織紅色染色面積較假手術(shù)組增多。NOB組腎組織紅色染色面積較模型組減少。NOB+EX527組腎組織紅色染色面積較EX527組減少。定量分析顯示,各組小鼠腎臟纖維化面積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=288.155,P<0.001)。與假手術(shù)組比較,模型組小鼠腎臟纖維化面積顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,NOB組腎臟纖維化面積顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與NOB組比較,NOB+EX527組腎臟纖維化面積顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 各組小鼠腎組織纖維化

2.2 NOB降低RIRI小鼠血清Cr和BUN水平 各組小鼠血清Cr和BUN水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=334.727,P<0.001;F=526.795,P<0.001)。與假手術(shù)組比較,模型組血清Cr和BUN水平顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與模型組比較,NOB組血清Cr和BUN水平顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。此外,與NOB組比較,NOB+EX527組血清Cr和BUN水平顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠血清Cr和BUN水平

2.3 NOB提高RIRI小鼠腎組織抗氧化活性 各組小鼠腎組織SOD、GSH-Px和MDA水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=36.757,P<0.001;F=188.613,P<0.001;F=169.249,P<0.001)。與假手術(shù)組比較,模型組腎組織SOD和GSH-Px水平顯著降低,而MDA升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與模型組比較,NOB組腎組織SOD和GSH-Px水平顯著升高,而MDA降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與NOB組比較,NOB+EX527組腎組織SOD和GSH-Px水平顯著降低,而MDA升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠腎組織中SOD、GSH-Px和MDA比較

2.4 NOB抑制RIRI小鼠腎組織中的細(xì)胞凋亡 與假手術(shù)組比較,模型組TUNEL陽(yáng)性率顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,NOB組TUNEL陽(yáng)性率顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外,與NOB組比較,NOB+EX527組TUNEL陽(yáng)性率顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。假手術(shù)組腎組織TUNEL陽(yáng)性染色(綠色熒光)較少。模型組腎組織TUNEL陽(yáng)性染色較假手術(shù)組增多。NOB組腎組織TUNEL陽(yáng)性染色較模型組減少。NOB+EX527組腎組織TUNEL陽(yáng)性染色較EX527組減少。見(jiàn)圖3。

圖3 各組小鼠腎組織TUNEL陽(yáng)性率比較

與假手術(shù)組比較,模型組Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高,而B(niǎo)cl-2顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與模型組比較,NOB組Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低,而B(niǎo)cl-2顯著升高(均P<0.05)。此外,與NOB組比較,NOB+EX527組Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高,而B(niǎo)cl-2顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)圖4。

圖4 各組小鼠腎組織中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)比較

圖5 各組小鼠腎組織中SIRT1和FOXO3a的mRNA表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較,模型組SIRT1、FOXO3a和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低,而p62顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與模型組比較,NOB組SIRT1、FOXO3a和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高,而p62顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。此外,與NOB組比較,NOB+EX527組SIRT1、FOXO3a和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低,而p62顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)圖6。

圖6 各組小鼠腎組織中SIRT1、FOXO3a、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p62的蛋白表達(dá)水平比較

3 討論

缺血再灌注可導(dǎo)致腎臟出現(xiàn)強(qiáng)烈炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng),引起腎功能喪失[19]。因此,抑制過(guò)度的炎癥和氧化應(yīng)激是預(yù)防和治療RIRI的關(guān)鍵。天然植物藥在抗炎和抗氧化中具有良好效果。NOB的抗炎、抗氧化活性已經(jīng)被廣泛報(bào)道[5-7]。本研究中,HE染色和天狼星紅染色顯示,NOB減輕了RIRI小鼠腎組織病變并抑制了腎臟纖維化。Cr和BUN在RIRI動(dòng)物中升高[20],提示腎功能發(fā)生障礙,另外,本研究表明NOB降低了RIRI小鼠血清Cr和BUN水平。與LIU等[9]研究報(bào)道,NOB降低了RIRI大鼠血清Cr和BUN水平,本研究與該研究結(jié)果一致。

腎細(xì)胞對(duì)氧分壓的變化非常敏感,其內(nèi)源性抗氧化防御強(qiáng)烈依賴于高濃度抗氧化酶的存在,如SOD、CAT和GSH-Px[21]。研究表明,在動(dòng)物模型中,即使延遲給予自由基清除劑也能減輕RIRI?；钚匝醯倪^(guò)量產(chǎn)生破壞了內(nèi)源性抗氧化防御,導(dǎo)致ATP耗竭,膜磷脂蛋白酶活性升高,細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平升高,線粒體氧化磷酸化改變[22]。此外,氧自由基增加了損傷膜的脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)氧化和DNA的氧化損傷[23]。在本研究中,RIRI小鼠腎組織中抗氧化酶SOD和GSH-Px活性降低,而脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA水平升高。NOB有助于抗氧化酶活性的恢復(fù)和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化。ZHANG等[5]研究也顯示NOB可顯著增加腦缺血大鼠腦組織中Nrf2、HO-1、SOD1和GSH的表達(dá)。GüVEN?等[10]研究顯示NOB降低了RIRI大鼠腎組織中MDA、腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1β和白細(xì)胞介素-6水平。這些結(jié)果與本研究一致。充分證實(shí)NOB對(duì)RIRI小鼠具有良好的抗氧化作用。

此外,線粒體功能障礙是IR損傷的一個(gè)主要特征,因?yàn)榫€粒體對(duì)能量穩(wěn)態(tài)非常重要,并直接介導(dǎo)氧化應(yīng)激和細(xì)胞死亡[24]。過(guò)度的氧化應(yīng)激可導(dǎo)致線粒體功能障礙并啟動(dòng)細(xì)胞凋亡[25]。在本研究中,NOB減輕了RIRI小鼠的腎細(xì)胞凋亡,與LIU等[9]研究結(jié)果一致。這些結(jié)果提示,NOB可能通過(guò)抑制氧化應(yīng)激,從而減輕了RIRI小鼠線粒體功能障礙以及隨后的細(xì)胞凋亡。

增加自噬和線粒體功能是減輕IR損傷的一種有前途的治療策略。SIRT1/FOXO3a信號(hào)通路是一條重要的自噬調(diào)節(jié)通路[18]。SIRT1在細(xì)胞能量代謝、衰老、自噬等許多生理過(guò)程中起著重要作用[26]。FOXO家族調(diào)節(jié)各種器官的自噬,通過(guò)激活小鼠肝臟和原代肝細(xì)胞中的FOXO3a表達(dá)增加自噬相關(guān)基因的表達(dá)[27]。FOXO3a活性受SIRT1的調(diào)節(jié)[28]。LC3和p62是2種主要的自噬調(diào)節(jié)蛋白。自噬時(shí),胞漿型LC3(LC3Ⅰ)會(huì)發(fā)生酶解并轉(zhuǎn)變?yōu)樽允审w膜型(LC3Ⅱ),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的大小可反映自噬水平的強(qiáng)弱[29-30]。p62是一種泛素結(jié)合蛋白,自噬發(fā)生后,p62與泛素化蛋白質(zhì)結(jié)合,并在自噬溶酶體內(nèi)降解,因此,p62的水平與自噬負(fù)相關(guān)[29-30]。SIRT1/FOXO3a信號(hào)通路對(duì)自噬的調(diào)控作用主要是通過(guò)調(diào)節(jié)LC3、p62等自噬相關(guān)蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)的。天然化合物(二氫楊梅素或小檗堿)通過(guò)增強(qiáng)SIRT1/FOXO3a誘導(dǎo)的自噬途徑來(lái)減輕肝臟IR損傷,而抑制FOXO3a或SIRT1的表達(dá)減弱了這些化合物的保護(hù)作用[31-32]。本研究顯示,NOB激活了RIRI小鼠腎組織SIRT1/FOXO3a信號(hào)通路并增強(qiáng)了腎細(xì)胞自噬。WU等[8]研究也顯示NOB增強(qiáng)了急性心肌梗死大鼠心肌組織中的自噬通量。另外,使用SIRT1抑制劑EX527處理來(lái)抑制小鼠體內(nèi)SIRT1的表達(dá),研究表明,SIRT1抑制劑EX527逆轉(zhuǎn)了NOB對(duì)RIRI小鼠的腎保護(hù)作用。因此,上述結(jié)果提示NOB通過(guò)激活SIRT-1/FOXO3a信號(hào)通路介導(dǎo)的自噬來(lái)減輕RIRI。

綜上所述,本研究表明NOB通過(guò)激活SIRT1/FOXO3a信號(hào)通路介導(dǎo)的自噬來(lái)減輕RIRI。本研究將有助于揭示NOB在治療RIRI中的具體機(jī)制,并且為RIRI防治藥物的開(kāi)發(fā)提供參考。

利益沖突聲明:無(wú)。