趙凌斐，王 丹，劉 余，卞丙鳳，李 娜

黑龍江省醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000

甲狀腺通常位于甲狀軟骨以下，氣管兩側(cè)，甲狀腺參與甲狀腺激素的合成和釋放，從而影響機(jī)體正常的生理功能。甲狀腺癌被認(rèn)為是比較多見的惡性腫瘤，近幾年，甲狀腺癌發(fā)患者數(shù)急劇增加，2015年全世界大約有62 450例新確診甲狀腺癌患者。研究［1-2］表明，這種癌癥可能來自濾泡細(xì)胞或?yàn)V泡旁細(xì)胞（C細(xì)胞）。來自C細(xì)胞的癌癥被稱為甲狀腺髓樣癌（MTC），來自濾泡細(xì)胞的癌癥根據(jù)病理又可分為4種，其中甲狀腺乳頭狀癌（PTC）最為多見。

趨化因子是同一種類的細(xì)胞因子或信號(hào)蛋白，一般情況下由70～125個(gè)氨基酸共同組成，大多數(shù)的研究提示白細(xì)胞可以自發(fā)或通過誘導(dǎo)后釋放趨化因子。這些分子能夠通過激活位于靶細(xì)胞表面的特定G 蛋白受體來傳遞信號(hào)，導(dǎo)致不同的細(xì)胞反應(yīng)，如粘附、趨化和遷移。其中趨化因子參與白細(xì)胞轉(zhuǎn)移到炎癥部分的全部過程并且意義重大。趨化因子也參與了許多白細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)，如生長(zhǎng)和激活。此外，趨化因子在人體的諸多重要生理及病理過程中起重要作用，如血管生成和自身免疫反應(yīng)。最新的研究結(jié)果提示，已經(jīng)被研究的趨化因子共有50多種，依據(jù)趨化因子末端半胱氨酸序列的位置差異分成C、CC、CXC 和CXXXC 這4 大類［3-4］，其能夠快速募集表達(dá)趨化因子受體的各類B細(xì)胞、T 細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等參與機(jī)體炎癥的發(fā)生發(fā)展。趨化因子通過與其受體結(jié)合，從而達(dá)到影響腫瘤微環(huán)境的作用，可以誘導(dǎo)腫瘤原發(fā)部位中腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處靶器官發(fā)生定向遷徙，從而完成腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。趨化因子與其受體相互作用對(duì)于腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響非常復(fù)雜，既能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞趨化、活化免疫細(xì)胞，從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，還可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解、刺激腫瘤生長(zhǎng)及促進(jìn)血管增殖發(fā)揮從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展［4］。趨化因子受體3（CXCR3）在腫瘤細(xì)胞可能具有不同的作用，CXCR3 存在剪接變體，主要為CXCR3A 和CXCR3B。CXCR3 的不同剪接變體的相對(duì)表達(dá)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞活力，調(diào)控細(xì)胞增殖具有重要意義［5-6］。本研究使用免疫組化測(cè)定并比較CXCR3A、CXCL10在PTC和癌旁正常組織中表達(dá)，明確PTC 組織中CXCR3A 及CXCL10 表達(dá)水平和PTC患者的臨床特點(diǎn)的關(guān)系，探討CXCR3A與CXCL10的相關(guān)性，研究CXCR3A與PTC發(fā)生、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年5月—2021年5月在黑龍江省醫(yī)院通過手術(shù)切除治療PTC的患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）首次經(jīng)過手術(shù)切除治療的PTC患者。（2）病理證實(shí)是PTC。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他病理類型甲狀腺癌患者。收集通過手術(shù)切除治療PTC的患者69例，其中男32例，女37例。該研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，患者均簽署知情同意書［7］。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)CXCR3A 及CXCL10 采取免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CXCR3A 和CXCL10 在PTC 組織里的表達(dá)情況，檢測(cè)CXCR3A 和CXCL10 在癌旁正常組織里的表達(dá)情況。組織標(biāo)本固定，制成石蠟切片，切片經(jīng)脫蠟及水化，3%的過氧化氫中在室溫條件中孵育15 min，再應(yīng)用0.01 mmol/L 枸櫞酸鹽，抗原修復(fù)，應(yīng)用CXCR3A 的單克隆抗體、CXCL10 的單克隆抗體，進(jìn)行孵育；二抗孵育；DAB顯色，復(fù)染，脫水，透明，封片。

1.2.2 結(jié)果判定 若細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顯現(xiàn)淡黃色至棕褐色微粒視則認(rèn)為CXCR3A、CXCL10 呈陽性。在光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選出5個(gè)視野，根據(jù)細(xì)胞染色的強(qiáng)度和陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)進(jìn)行判定。細(xì)胞染色強(qiáng)度：0分為不顯色，1分為淡黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色。陽性細(xì)胞百分比評(píng)分：＜15%為0 分，15%～25%為1 分，26%～75%為2分，76%～100%為3分。采用組織學(xué)分級(jí)式∑PI得出最終結(jié)果（P：陽性細(xì)胞比例，I：染色強(qiáng)度）。0 分為陰性（-），1～3分為弱陽性（+），4～6分為中陽性（++），7～9分為強(qiáng)陽性（+++）［8］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCR3A在PTC組織和癌旁正常組織的表達(dá)

CXCR3A 在PTC 組 織 的 表 達(dá) 率 是71.01% （49/69），CXCR3A 在癌旁正常組織中表達(dá)率是21.74%（15/69），CXCR3A 在PTC 組織的表達(dá)水平較在癌旁正常組織中高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 CXCL10在PTC組織和癌旁正常組織的表達(dá)

CXCL10 在PTC 組 織 的 表 達(dá) 率 是60.87% （42/69），CXCL10 在癌旁的正常組織的表達(dá)率是17.39%（12/69），CXCL10 在PTC 組織的表達(dá)水平較在癌旁正常組織中高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 PTC組織中CXCR3A的表達(dá)與腫瘤特點(diǎn)的相關(guān)性

CXCR3A 和CXCL10 在PTC 組織中的表達(dá)率高低與腫瘤的TNM 分期、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.05），與患者的性別、甲狀腺乳頭狀癌的最大直徑無關(guān)（P＞0.05），見表1。

表1 PTC組織中CXCR3A與腫瘤特點(diǎn)相關(guān)性 例（%）

2.4 PTC組織中CXCR3A和CXCL10相關(guān)性

CXCR3A 在PTC 組織的表達(dá)與CXCL10 在PTC 組織的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.561，P＜0.05），見表2。

表2 PTC中CXCR3A和CXCL10相關(guān)性 例

3 討論

甲狀腺癌是一種常見的惡性腫瘤，2015年全世界大約有62 450例新確診甲狀腺癌患者，約占所有新確診癌癥患者總體的3.80%［9］，其中80.00%的甲狀腺癌為PTC，大部分PTC進(jìn)展緩慢，但有些組織學(xué)亞型容易發(fā)生血管侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后相對(duì)較差，因此，如何提高患者生存時(shí)間，防止PTC發(fā)生轉(zhuǎn)移，減少復(fù)發(fā)至關(guān)重要［9］。

與炎癥相關(guān)的現(xiàn)象，如趨化因子水平升高，已被認(rèn)為是RET 原癌基因重排（RET/PTC）的易感因素，而RET/PTC是能夠誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞開始惡性轉(zhuǎn)變的癌基因［8］。反過來，RET/PTC通過轉(zhuǎn)錄程序促進(jìn)PTC的腫瘤發(fā)生，該程序包括上調(diào)趨化因子及其受體，創(chuàng)造一個(gè)引發(fā)促腫瘤反應(yīng)的炎癥環(huán)境［10-12］。因此，越來越多的證據(jù)表明，炎癥與甲狀腺癌轉(zhuǎn)化和進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)增加之間有很強(qiáng)的相關(guān)性［10，13-14］。目前已有研究調(diào)查研究了癌癥和炎癥的相互作用。有人認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞能夠分泌多種炎癥介質(zhì)，通過腫瘤及炎癥之間的相互影響達(dá)到調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移的目的。有研究證明，這些介導(dǎo)分子可能是特定群體的成員，如細(xì)胞因子或其他趨化因子。

趨化因子是一類低分子量蛋白質(zhì)，以趨化活性為特征。早期，人們認(rèn)為趨化因子功能為影響白細(xì)胞定向遷移至機(jī)體炎癥區(qū)域的整個(gè)過程。這些分子能夠通過激活位于靶細(xì)胞表面的特定G蛋白受體來傳遞信號(hào)，導(dǎo)致不同的細(xì)胞反應(yīng)，如粘附、趨化和遷移。隨后，有研究認(rèn)為，趨化因子及其受體的相互作用介導(dǎo)免疫細(xì)胞運(yùn)輸?shù)侥[瘤微環(huán)境，導(dǎo)致不同細(xì)胞的招募和激活，從而影響腫瘤的發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移。此外，趨化因子還參與了人體的許多重要的生理過程，并起關(guān)鍵的作用。有研究認(rèn)為，趨化因子及其受體的相互作用介導(dǎo)免疫細(xì)胞運(yùn)輸?shù)侥[瘤微環(huán)境，導(dǎo)致不同細(xì)胞的招募和激活，從而影響腫瘤的發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移。盡管趨化因子在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮了作用，但在腫瘤生長(zhǎng)中的功能與參與炎癥過程有關(guān)，這可能促進(jìn)癌癥的發(fā)展和進(jìn)展。趨化因子與其受體相互作用對(duì)于腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響非常復(fù)雜，趨化因子與其受體相互作用既能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞趨化、活化免疫細(xì)胞，從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，還可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解、刺激腫瘤生長(zhǎng)及促進(jìn)血管增殖發(fā)揮從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展［4］。CXCL8是目前研究最廣泛的趨化因子。事實(shí)已經(jīng)證明，這種蛋白質(zhì)可以影響不同的細(xì)胞群，從而達(dá)到對(duì)腫瘤影響的雙向性。CXCL8與其受體相互作用能夠增加樹突狀細(xì)胞以及肥大細(xì)胞遷移活力。CXCL8與其受體結(jié)合后能夠增加基質(zhì)金屬蛋白酶從而達(dá)到增加血管生成的目的。趨化因子同時(shí)還可以抑制血管生成。CXCL4與其受體結(jié)合可以減少VEGF從而達(dá)到抑制血管生成的目的。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟的過程，涉及局部侵襲、外滲、增殖和生長(zhǎng)的過程，在此階段腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤擴(kuò)散到體內(nèi)的遠(yuǎn)處。到目前為止有眾多的研究結(jié)果提示，趨化因子與受體的相互作用對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移的整個(gè)過程都具有重要意義。

趨化因子可以分成C、CC、CXC 和CXXXC 這4 大類，其受體是一種G蛋白耦聯(lián)受體［4］。CXCR3被認(rèn)為是CXC的受體之一［15］。據(jù)報(bào)道［16］，CXCR3 在許多人類腫瘤中表達(dá)異常，并經(jīng)常與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生和不良結(jié)局相關(guān)。干擾素-γ誘導(dǎo)的趨化因子通過誘導(dǎo)實(shí)體瘤細(xì)胞遷移到轉(zhuǎn)移部位來促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展［17］。在淋巴結(jié)中，CXCL9 和CXCL10的上調(diào)是由分泌干擾素-γ的激活的Th-1淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)的［17］。此外，有研究［17］認(rèn)為，CXCR3在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)高低與是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。這些研究表明，腫瘤細(xì)胞可以利用干擾素-γ 誘導(dǎo)的趨化因子，通過CXCR3 信號(hào)促進(jìn)其腫瘤轉(zhuǎn)化和腫瘤進(jìn)展。人類CXCR3 基因經(jīng)過交替剪接后可形成3 類異構(gòu)體：CXCR3-A、CXCR3-B 和CXCR3-ALT，目前關(guān)于CXCR3-ALT 的研究比較少［4-5］。CXCR3-A與G蛋白偶聯(lián)，并引起腺苷酸環(huán)化酶活性的抑制，最終引起細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的升高，促進(jìn)細(xì)胞增殖遷移。研究表明，在一些腫瘤中，CXCR3-A 被證明可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖、趨化，從而影響腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移。CXCR3A 及CXCR3B 對(duì)于細(xì)胞存活、增殖、血管生成和細(xì)胞凋亡有不同的作用［5］。CXCR3異構(gòu)體的相對(duì)表達(dá)對(duì)于調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖和存活非常重要［18-20］，并且與多種腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)相關(guān)［21-22］。在人類腎癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌組織中，CXCR3A 表達(dá)上調(diào)，而CXCR3B 表達(dá)顯著降低［18-19，22-23］。

本研究發(fā)現(xiàn)PTC 組織中CXCR3A 及CXCL10 的表達(dá)均增加，說明CXCR3A 與CXCL10 的相互作用參與了PTC 的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)PTC 組織中CXCR3A、CXCL10 表達(dá)水平與TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，這提示CXCR3A與CXCL10 相互作用與PTC 發(fā)展密切相關(guān)。綜上所述，CXCR3A有可能成為PTC早期診斷和治療的新靶點(diǎn)。