阮 君，尚浩南，劉 雨，張 強，劉凱利，張 力，肖鐵剛，王 兵△

1 上海中醫(yī)藥大學附屬市中醫(yī)醫(yī)院，上海 200070；2 上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院，上海 200233； 3 上海市第八人民醫(yī)院，上海 200235

代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）是以肥胖、高血糖、血脂異常及高血壓等聚集發(fā)病的臨床癥候群，嚴重影響機體健康［1］。單一對癥的藥物治療模式對于MS 相關(guān)組分疾病的治療作用明顯，但體質(zhì)量、腰圍的下降不顯著［2］。當下，國內(nèi)外對于MS 的治療已在單一對癥藥物治療的基礎(chǔ)上對MS 患者進行健康的生活方式干預(yù)［3-4］。中醫(yī)學無“代謝綜合征”一詞，根據(jù)其臨床表現(xiàn)可將其歸于“消渴”“眩暈”“頭痛”“濕阻”“肥滿”等范疇。利膽化痰活血方具有清熱利膽、化痰活血之功效，臨床療效顯著。本研究從動物實驗角度探討利膽化痰活血方對MS 大鼠肥胖相關(guān)指標的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物42 只SPF 級雄性SD 大鼠，體質(zhì)量（150±20）g，6～8 周齡，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，實驗動物許可證號：SCXK（滬）2012-001。飼養(yǎng)于上海市第六人民醫(yī)院動物房，SPF 級，飼養(yǎng)室溫度22～26 ℃，濕度40%～70%，晝夜明暗交替（12 h/12 h），每籠4～5 只，自由活動，予充足飼料及飲用水。

1.2 飼料高脂高糖高鹽飼料：繁殖鼠料47%，豬油18.9%，膽固醇1.3%，膽鹽0.3%，蔗糖14%，酪蛋白8.7%，食鹽5%，預(yù)混料1.8%，麥芽糊精3%；普通飼料：水分≤10%，粗蛋白質(zhì)≥20.5%，粗脂肪≥4%，粗纖維≤5%，粗灰分≤8%，鈣1.0%～1.8%，總磷0.6%～1.2%，賴氨酸≥1.32%，蛋氨酸+胱氨酸≥0.78%，購于中國科學院上海斯萊克實驗動物有限公司。

1.3 實驗藥品利膽化痰活血方顆粒劑（玉米須30 g，虎杖15 g，制半夏6 g，陳皮9 g，丹參15 g）（四川新綠藥業(yè)科技有限發(fā)展公司），購于上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院。將利膽化痰活血方顆粒劑兌成每l mL 藥液分別含生藥1.25、2.5、5 g 的藥液，并保存于4 ℃冰箱中備用。

1.4 實驗方法

1.4.1 造模及分組 將42只SD大鼠隨機分為普通飼料喂養(yǎng)的空白組（Control 組，9 只）和高脂高糖高鹽飲食喂養(yǎng)的造模組（Model 組，33 只），喂養(yǎng)12 周建立代謝綜合征大鼠模型。成模后將模型組分為代謝綜合征組（MS 組，8 只）、利膽化痰活血方低劑量組（LHH-L 組，8 只）、利膽化痰活血方中劑量組（LHH-M 組，8 只）、利膽化痰活血方高劑量組（LHH-H組，9只）。

1.4.2 給藥方法 Control 組和MS 組予生理鹽水灌胃，LHH-L 組、LHH-M 組、LHH-H 組以相應(yīng)濃度的中藥液灌胃，每只5 mL/kg，灌胃干預(yù)時間為6周。Control組繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，MS組、LHH-L組、LHH-M組、LHH-H組均繼續(xù)高脂高糖高鹽飼料喂養(yǎng)。

1.5 觀察指標

1.5.1 一般情況 每日觀察大鼠的精神狀態(tài)、體態(tài)、活動度、毛發(fā)、二便、飲水量。

1.5.2 肥胖指標測定 觀察并測定大鼠體質(zhì)量、腹圍、體長、內(nèi)臟脂肪，計算肝體比=肝濕質(zhì)量／體質(zhì)量×l00%；脂肪系數(shù)=內(nèi)臟脂肪質(zhì)量/體質(zhì) 量×100%。Lee′s 肥 胖 指 數(shù)：Lee′s INDEX=

1.6 統(tǒng)計學方法采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。實驗所得數(shù)據(jù)采用±s表示，符合正態(tài)分布即采用t檢驗或單因素方差分析。非正態(tài)分布、方差不齊則采用非參數(shù)檢驗；兩兩比較，正態(tài)分布，方差齊時采用LSD法和S-N-K法，正態(tài)分布、方差不齊時用Tamhane′s T2 法和Dunnett′s T3法。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況整個造模及治療期間，Control組大鼠體態(tài)活潑、毛發(fā)平整光澤，飲食飲水正常，大便呈顆粒狀；MS 組大鼠較治療組大鼠肥胖少動，精神萎靡嗜睡，毛發(fā)粗糙發(fā)黃無光澤，糞便軟黏，無明顯腹瀉。

2.2 大鼠肥胖指數(shù)6周后，與Control組相比，MS組體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量、肝體比均增高（P＜0.01）。與MS 組比較，LHH-H 組大鼠體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量、肝體比降低（P＜0.05）；LHH-L組、LHH-M組體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量較MS組無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量及肝體比較（±s）

表1 各組大鼠體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量及肝體比較（±s）

注：與Control比較，*表示P＜0.01；與MS組比較，Δ表示P＜0.01

肝體比（%）2.2±0.16 4.0±0.39*3.6±0.27Δ 3.9±0.40 3.5±0.33Δ組別Control組MS組LHH-L組LHH-M組LHH-H組鼠數(shù)98889體質(zhì)量（g）525.5±41.02 583.6±41.47*556.6±41.18 543.5±39.51 539.3±35.68Δ肝濕質(zhì)量（g）12.0±1.50 23.3±2.22*20.7±3.13 21.2±2.96 19.8±1.47Δ

2.3 大鼠體脂水平灌胃6周后，與Control組比較，MS組大鼠內(nèi)臟脂肪質(zhì)量，計算脂肪系數(shù)及Lee′s肥胖指數(shù)升高（P＜0.05）。與MS組比較，LHH-L組、LHH-M組內(nèi)臟脂肪質(zhì)量無明顯變化（P＞0.05）；LHH-M組脂肪系數(shù)降低（P＜0.05）；LHH-H組內(nèi)臟脂肪質(zhì)量及脂肪系數(shù)降低明顯（P＜0.01）；LHH-H 組、LHH-M 組lee′s 肥胖指數(shù)較MS 組降低（P＜0.05）。各組體長及腹圍無明顯變化（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠內(nèi)臟脂肪質(zhì)量、脂肪系數(shù)、腹圍、體長及Lee′s肥胖指數(shù)比較（±s）

表2 各組大鼠內(nèi)臟脂肪質(zhì)量、脂肪系數(shù)、腹圍、體長及Lee′s肥胖指數(shù)比較（±s）

注：與Control比較，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；與MS組比較，ΔΔ表示P＜0.01，Δ表示P＜0.01

組別Control組MS組LHH-L組LHH-M組LHH-H組鼠數(shù)Lee's肥胖指數(shù)2.87±0.07 3.00±0.05**2.96±0.10 2.91±0.08Δ 2.91±0.08Δ 98889肥胖指數(shù)內(nèi)臟脂肪質(zhì)量（g）1.43±0.24 1.73±0.35*1.68±0.24 1.56±0.25 1.27±0.17ΔΔ脂肪系數(shù)（%）0.26±0.02 0.34±0.08*0.31±0.05 0.26±0.06Δ 0.23±0.04ΔΔ腹圍（cm）17.7±1.03 18.8±1.20*18.3±1.16 18.1±0.73 17.8±0.79體脂水平體長（cm）28.3±0.62 27.9±1.06 27.9±1.06 28.1±0.50 28.5±0.94

3 討論

近年來，經(jīng)濟發(fā)展和生活方式的改變使MS 在全世界的患病率逐年上升。在中國，城市居住的人 口MS 患 病 率1990 年 是25.84%，2000 年 是35.39%，2014 年底則高達54.7%［5］。作為MS 的關(guān)鍵危險因素之一的肥胖，在過去的25 年里，73 個國家的兒童和成人的患病率增加了1 倍，至2015年，全球有6.037 億肥胖成年人，根據(jù)LAURA 等［6］的說法，到2030 年，男性和女性的超重和肥胖率將分別達到89%和85%。肥胖是一個全球性的危機，MS也已成為世界性的公共衛(wèi)生問題［7］。

代謝綜合征的作用機制尚不明確，1988 年，REAVEN［8］首先提出胰島素抵抗是MS 的發(fā)病基礎(chǔ)，目前多認為MS 是遺傳和環(huán)境因素之間相互作用的慢性低等級炎癥的狀態(tài)，胰島素抵抗、內(nèi)臟脂肪過多、免疫和炎癥是造成MS 的幾個主要因素［9］。而肥胖與MS 更是密切相關(guān)，其相互作用機理有二：一是脂肪酸理論。因膳食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，現(xiàn)代人能量攝入過多，多余的能量儲存為脂肪，導致脂肪堆積，促進激素敏感的脂肪酶活性和脂肪細胞的甘油三酯大量分解，特別是腹部脂肪組織，過量釋放游離脂肪酸［10］，使肝糖原代謝紊亂，胰島β細胞功能減退［11-12］，致血糖升高；游離脂肪酸過量刺激肝臟極低密度脂蛋白的輸出，導致高甘油三酯血癥。由游離脂肪酸介導產(chǎn)生活性氧導致內(nèi)皮細胞功能障礙，高胰島素誘發(fā)交感神經(jīng)系統(tǒng)激活和抑制一氧化氮的合成酶，均可致高血壓［13］。二是脂肪細胞因子的分泌。脂肪組織會釋放出多種細胞因子，包括瘦素、抵抗素、內(nèi)酯素、脂聯(lián)素、炎性細胞因子、抗炎素、黏蛋白素、纖溶酶原激活物抑制劑1 和血管緊張素等，是新興的代謝危險因素。有保護性因子預(yù)防糖尿病和心血管疾??；危險因子導致代謝疾病或心血管疾病。已經(jīng)有廣泛的研究討論了不同的脂類物質(zhì)如何影響系統(tǒng)代謝［14］。瘦素可以抑制能量攝入［15］，瘦素基因缺陷的人胃口大，并且嚴重肥胖［16-17］，在正常情況下，當脂肪組織擴張時，瘦素的釋放會增強［18］減少了代謝危險因素［19］。另一種保護性脂肪因子就是脂聯(lián)素，其水平與代謝危險因素成反比［20］，能控制脂肪代謝和胰島素敏感性，加速骨骼肌脂肪酸氧化，減少脂質(zhì)堆積，改善胰島素抵抗。

體質(zhì)量的改變可以改善糖尿病、高血壓、血脂紊亂狀態(tài)。最新結(jié)果顯示，體質(zhì)量減輕15 kg 的患者，2 型糖尿病的緩解率達到86%，體質(zhì)量減輕10 kg 的患者，2 型糖尿病的緩解率達到46%［21］。研究表明，體質(zhì)量降低4.5 kg，可使收縮壓下降10 mm Hg（1 mm Hg≈0.133 kPa），舒 張 壓 下 降5 mm Hg［22］。研究顯示，體質(zhì)量減輕10 kg，心血管事件的發(fā)生率減少40%，體質(zhì)量指數(shù)≥24 的人群甘油三酯異常檢出率為正常人群的2.5 倍，高密度脂蛋白降低檢出率為正常人群的1.8 倍，而BMI≥28 人群甘油三酯異常檢出率為正常人群的3 倍，高密度脂蛋白降低檢出率為正常人群的2.1倍。

人體內(nèi)臟脂肪包括白色脂肪和棕色脂肪兩種脂肪組織。白色脂肪組織主要以甘油三酯的形式儲存能量，而棕色脂肪組織能特異性表達線粒體脫偶連蛋白1 抗體，通過產(chǎn)熱參與能量消耗。通過棕色脂肪組織消耗能量能夠減少白色脂肪組織中脂肪的存儲量［23-24］。在棕色脂肪組織中，膽汁酸激活膜受體G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體5，誘導腺苷環(huán)磷酸依賴的2 型甲狀腺激素脫碘酶活性增加，甲狀腺素4 轉(zhuǎn)化為三碘甲狀腺原氨酸，產(chǎn)生更多熱量，耗能增加，減輕體質(zhì)量［25］。玉米須為利膽化痰活血方的君藥，多項研究證明玉米須醇提取物可抑制脂肪合成相關(guān)基因的表達，促進脂肪分解和脂肪氧化相關(guān)基因的表達，玉米須類黃酮可通過激活Caspase 級聯(lián)反應(yīng)和改善線粒體功能障礙誘導3T3-L1 前脂肪細胞凋亡，最終導致脂肪組織質(zhì)量降低［26］。余淵等［27］認為，玉米須總皂苷可以使肥胖引起的增大脂肪細胞縮小，對內(nèi)臟脂肪濕質(zhì)量、體脂比、血糖、血脂均有很好的調(diào)控作用，增加脂肪甘油三酯脂肪酶表達，進而促進肥胖大鼠脂肪分解，最終降低大鼠體質(zhì)量。同時其可以較好地改善棕色脂肪細胞病理學，明顯升高能量代謝蛋白UCP1 和白色脂肪細胞轉(zhuǎn)化為棕色脂肪細胞，調(diào)節(jié)蛋白PRDM16 的表達，進而達到降低體質(zhì)量的目的［28］。實驗研究證明，虎杖可抑制胰脂肪酶和脂肪生成，減少脂肪堆積從而達到降脂目的。證據(jù)提示橘皮素、川陳皮素同時具有預(yù)防肥胖、降血脂和保護肝臟的效果。

綜上所述，高劑量利膽化痰活血方可減輕內(nèi)臟脂肪質(zhì)量及脂肪系數(shù)，其機制可能與膽汁酸代謝及棕色脂肪組織調(diào)節(jié)代謝能力有關(guān)。