張曉云，梅曉宏*

（1 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院 北京 100083 2 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價（食用）重點實驗室 北京 100083）

目前肥胖已成為全球公共健康問題[1]。2016年，超過19 億18 歲及以上的成年人患有肥胖癥[2]。據(jù)估計，到2025 年，世界范圍內(nèi)的肥胖人口將增加50%以上，中國將會有46%的成年人和15%的兒童超重或肥胖[3]。而肥胖又是多種疾病的主要誘因，如心血管疾病、糖尿病、高血脂、高血壓、脂肪肝等[4]?？旃?jié)奏的生活方式使得通過運(yùn)動來預(yù)防肥胖并非易事，而長期使用減肥藥物會對人體產(chǎn)生毒副作用，因此，人們更偏向于從植物性食物或藥物中提取對人體無害的天然活性成分，通過食用這些天然的產(chǎn)物來達(dá)到預(yù)防肥胖或減肥的目的。

腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）是一種AMP 依賴性蛋白激酶，是生物能量代謝調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，參與肥胖、脂代謝異常、糖尿病、腫瘤、炎癥以及阿爾茨海默病等多種疾病的發(fā)生[5]，因此近年來逐漸成為研究代謝相關(guān)疾病的核心。激活A(yù)MPK 可增強(qiáng)組織對胰島素、葡萄糖攝取和脂肪酸氧化的敏感性，抑制糖異生、膽固醇和甘油三酯的產(chǎn)生，在能量代謝調(diào)節(jié)方面起到關(guān)鍵性作用[6]。一些天然的活性成分通過激活A(yù)MPK 來達(dá)到調(diào)節(jié)機(jī)體代謝的作用，如米糠酚提取物能通過激活肝臟中AMPK，進(jìn)而促進(jìn)ACC 磷酸化和抑制HMGCR 蛋白表達(dá)來改善高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠脂代謝受損[7]。富含原兒茶酸、咖啡酸和鞣花酸等酚類化合物的蓮子酚提取物能顯著降低3T3-L1 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累，抑制HFD 飼養(yǎng)小鼠體質(zhì)量的增加，改善血脂水平，增加AMPK 的磷酸化，同時下調(diào)脂肪合成相關(guān)基因SREBP-1c、ACC1、FAS等的表達(dá)，上調(diào)脂肪分解相關(guān)基因PGC-1α、Sirt1、CPT1α 和脂聯(lián)素的表達(dá)，表明蓮子結(jié)合酚類物質(zhì)可能通過調(diào)節(jié)AMPK 信號通路來減輕肥胖[8]。紫玉米花青素可以下調(diào)SREBP-1c基因表達(dá)，上調(diào)PPARα、PGC1α 等基因的表達(dá)，促進(jìn)肝臟AMPK 活性，抑制脂質(zhì)合成關(guān)鍵酶ACC 活性，具有預(yù)防肥胖的潛力[9]。

據(jù)美國糧食及農(nóng)業(yè)組織報道，2017 年中國的板栗產(chǎn)量占全球的83%以上，是全球最大的板栗生產(chǎn)國[10]。板栗加工過程中產(chǎn)生了大量的廢料，包括內(nèi)殼和外殼，約占整個板栗質(zhì)量的15%～20%[11]。板栗殼色素（Cheatnut shells pigment，CSP）是從板栗殼提取的一種天然棕色素，富含酚類和黃酮類物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌、抗高血糖以及癌癥等多種生物活性[12-15]，然而目前對CSP 的研究僅局限于體外生物活性，對其體內(nèi)生理活性功能的研究報道較少。

本實驗通過飼喂高脂飼料構(gòu)建C57BL/6J 小鼠肥胖模型，研究CSP 對肥胖小鼠的脂代謝紊亂的改善作用，并探究CSP 對AMPK 及其相關(guān)通路的調(diào)控機(jī)制。本研究旨在為進(jìn)一步擴(kuò)大板栗殼廢棄物的應(yīng)用領(lǐng)域提供理論基礎(chǔ)，同時為肥胖和脂代謝紊亂的預(yù)防和治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 板栗殼色素 本實驗室前期成功提取、分離、純化得到板栗殼色素凍干粉，并鑒定出13 種酚類物質(zhì)，分別為兒茶素、原花青素B2、p-羥基苯甲酸、花青素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、表兒茶素沒食子酸酯、花旗松素、異鼠李素-3-O-半乳糖苷、橙皮苷、棕矢車菊素、黃芩素4'-甲基醚、異鼠李素、百里香酚-β-D-葡萄糖苷，此外，還鑒定出2種生物堿（千里光堿、辛可寧堿）和1 種萜類化合物（積雪草酸）。

1.1.2 實驗動物 50 只4 周齡SPF 級雄性C57BL/6J 小鼠，北京市維通利華有限公司（許可證號：SCXK（京）2021-0006）。

1.1.3 試劑 沒食子酸標(biāo)品（HPLC≥98%）、兒茶素（≥98%），索萊寶公司；甘油三酯（Total triglycerides，TG）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白-膽固醇（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate aminotransferase，AST）試劑盒，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK（Thr172））、乙酰輔酶A 羧化酶（ACC）、磷酸化乙酰輔酶A 羧化酶（p-ACC（Ser79））、過氧化物酶體增殖物激活受體-α（PPARα）、甲基戊二酰輔酶A 還原酶（HMGCR）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）一抗抗體，Cell Signaling Technology 有限公司；內(nèi)參β-Tubulin 和二抗抗體，碧云天生物技術(shù)有限公司。小鼠基礎(chǔ)飼料（3.40 kcal/g，脂肪供能占比12%）、60%高脂飼料（5.24 kcal/g，脂肪供能占比60%），北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

1.2 設(shè)備與儀器

Centrisart D-16C 高速離心機(jī)，德國Eppendorf 公司；DM2500 顯微鏡，德國Laica 公司；KZ-II高速組織研磨儀，Servicebio 公司；FA1004B 分析天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司；UNIQUE-R20純水儀，廈門銳思捷生命科學(xué)有限公司；-80 ℃超低溫冰箱，日本SANYO 公司；TU-1901 紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 CSP 多酚含量的測定 采用福林酚測定總酚含量[16]。取10 μL 1 mg/mL 的CSP 水溶液，加入一定量超純水進(jìn)行稀釋，然后依次加入1 mL 福林酚試劑和1 mL 10%Na2CO3溶液，超純水定容至4 mL。在50 ℃下避光反應(yīng)5 min，于波長765 nm 處測吸光度。以沒食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)品，計算CSP 中總酚含量。

1.3.2 動物實驗 小鼠飼養(yǎng)在SPF 級動物房中，每籠4 只，12 h 黑夜，12 h 光照，溫度20～25 ℃，濕度45%～65%，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后開始實驗。小鼠隨機(jī)分成5 組，每組10 只。對照組（N 組）飼喂基礎(chǔ)飼料，其它組飼喂60%高脂飼料（High fat diet，HFD），分別為高脂飲食對照組（HFD 組）、高脂飲食＋低劑量組（HFD-L 組）、高脂飲食＋高劑量組（HFD-H 組）和高脂飲食＋兒茶素組（HFD-C 組），HFD-L、HFD-H 和FHD-C 組在飼喂高脂飼料基礎(chǔ)上每日灌胃劑量分別為20，50 mg CSP/kg 和20 mg 兒茶素/kg，N 組和HFD 組灌胃等體積的超純水。實驗期間，每周稱量記錄小鼠體質(zhì)量和飲食量。CSP 處理14 周后，小鼠禁食1 夜，并從眶靜脈采集血樣，將全血置于4 ℃靜置2 h，1 000×g 條件下離心15 min，分離血清備用。取肝和附睪脂肪（Epididymal fat，EP），用生理鹽水沖洗、稱重，部分肝臟和EP 用于制作病理組織切片，另外一部分肝臟在-80 ℃冷凍備用。所有實驗程序均由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物福利和動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)編號AW72101202-4-5）。

1.3.3 血清生化指標(biāo)測定 根據(jù)試劑盒說明，測定血清樣品中的TG、TC、LDL-C、HDL-C、ALT、AST 含量，以及肝組織中TG 含量。

比較不同服藥模式的兩組患者所取得的治療效果，可見中西藥結(jié)合的治療方式，能夠取得更顯著的治療效果，兩組患者治療效果對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），西藥治療組21例，十分有效8，基本有效5，無效8，總體有效率61.90%；中西藥結(jié)合治療組21例，十分有效12，基本有效7，無效2，總體有效率90.48%。

1.3.4 病理組織切片分析 為更方便觀察組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，采用蘇木精-伊紅（H&E）染色法對組織進(jìn)行染色觀察：取小鼠肝臟和附睪脂肪組織，用10%福爾馬林固定液固定后，乙醇脫水，石蠟包埋，切片（5～10 μm 厚），蘇木精伊紅染色。染色切片在光學(xué)顯微鏡下放大200 倍，進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察和圖像分析。

1.3.5 蛋白質(zhì)印跡（Western blots，WB）實驗 稱取一定量的小鼠肝組織，按1∶10 的比例加入RIPA 裂解液和蛋白酶-磷酸酶抑制劑混合物（50：1）。冰浴研磨，4 ℃、15 000×g 離心10 min，吸取上清液。用BCA 蛋白試劑盒測定蛋白濃度，牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）作為標(biāo)品。

用SDS-PAGE 凝膠分離含有負(fù)載上樣緩沖液的蛋白樣品，將分離好的蛋白條帶轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，用5%的牛奶封閉2～4 h，并在4 ℃下用孵育一抗過夜，AMPK、p-AMPK（Thr172）、ACC、p-ACC（Ser79）、PPARα、HMGCR、SREBP-1c 的抗體稀釋1∶1 000 使用。然后，用TBS-Tween 20 緩沖液洗滌4 次，每次5 min；室溫下孵育二抗（1∶1 000）1 h，然后用TBS-Tween 20緩沖液洗滌4 次，每次5 min 后，用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（ECL）底物顯示蛋白條帶，采用Odyssey 成像系統(tǒng)掃描并通過圖像分析軟件進(jìn)行分析，并對抗原-抗體復(fù)合物的光密度進(jìn)行量化，β-Tubulin 作為內(nèi)參。

1.4 數(shù)據(jù)分析

實驗結(jié)果采用SPSS Statistics 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差（）”表示，采用單因素方差分析（One-way analysis of variance，ANOVA）中的Duncan 多重比較分析組間差異性。

2 結(jié)果與分析

2.1 CSP 的多酚含量

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=12.605x-0.1111，回歸系數(shù)R2為0.9992，表明回歸方程具有可靠性。通過計算得到CSP 粉末中總酚含量為75.92%±1.40%。

2.2 CSP 對肥胖小鼠體質(zhì)量、脂肪組織質(zhì)量及組織切片的影響

如圖1a 所示，小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，平均體質(zhì)量為19.8 g，在喂養(yǎng)高脂飼料2 周后，小鼠體質(zhì)量開始增加，第5 周時，與N 組比較，HFD 組小鼠體質(zhì)量顯著升高（P＜0.05），顯示肥胖模型造模成功。實驗結(jié)束時與N 組小鼠體質(zhì)量增加量【（6.98±0.79）g】 相比，HFD 組小鼠的體質(zhì)量增加量【（12.87±0.54）g】顯著升高（P＜0.001）。與HFD組相比，HFD-L 組（9.18±1.12）g、HFD-H 組（7.83±0.81）g 和HFD-C 組（10.4±0.43）g 小鼠體質(zhì)量增加量均顯著降低，且HFD-H 組比HFD-L 組效果更好，說明CSP 降低體質(zhì)量具有劑量依賴性，在合理給藥濃度范圍內(nèi)，劑量越高降低體質(zhì)量的效果越好。

肥胖通常伴隨著白色脂肪質(zhì)量的增加，而EP是典型的白色脂肪。由圖1d 可以看出，與N 組相比，HFD 組小鼠的EP 質(zhì)量顯著升高（P＜0.001）。與HFD 組相比，HFD-L、HFD-H 和HFD-C 組EP 質(zhì)量均顯著降低（P＜0.05），這與減輕小鼠體質(zhì)量增長結(jié)果相一致。

與此同時，兒茶素（20 mg/kg）也體現(xiàn)出減肥的作用，這與前人的報道相一致[18]，而CSP 中也富含兒茶素，因此，兒茶素可能是CSP 抑制高脂飼料喂養(yǎng)小鼠體質(zhì)量增長的有效成分之一。然而，等劑量兒茶素的作用效果比等劑量的CSP 稍差，可能原因是CSP 提取物含有多種有效活性成分，由于物質(zhì)之間的降脂具有協(xié)同作用，其效果比單一的兒茶素作用效果更好。

2.3 CSP 對肥胖小鼠飲食量和能量攝入的影響

攝食量會嚴(yán)重影響體重的增減，因此控制飲食量，抑制食欲是減肥的重要舉措。本實驗通過檢測小鼠的日常攝食量和能量攝入，探究CSP 對肥胖小鼠減肥作用是否與抑制其食欲有關(guān)。如圖2所示，N 組小鼠的每日攝食量最大，為（2.13±0.11）g，而總能量的攝入?yún)s最少，為（4.58±0.15）kcal。HFD 組飼養(yǎng)高脂飼料，小鼠每日攝食量降低至（1.18+0.07）g 且與N 組相比具有顯著性差異（P＜0.05），而能量攝入?yún)s最高，為（6.19±0.24）kcal，主要是因為與維持飼料相比，高脂飼料的能量大大增加，較少量的高脂飼料就能滿足小鼠每日所需，飽腹感較強(qiáng)，故攝入量較少而攝入能量增加；HFD-L、HFD-H 和HFD-C 組小鼠的日常攝食量與HFD 組相比，雖略有降低，但不具有顯著性差異（P＞0.05），表明CSP 可以在一定程度上起到抑制肥胖小鼠食欲的作用。從能量攝入的角度看，只有HFD-H 組能顯著抑制肥胖小鼠的能量攝入（P＜0.05）。以上結(jié)果表明CSP 可以減少肥胖小鼠的膳食和能量攝入，從而起到減肥的作用。

圖2 CSP 對肥胖小鼠飲食量和能量攝入的影響Fig.2 Effects of CSP on food intake and energy intake of obese mice

2.4 CSP 對肥胖小鼠血脂的影響

有研究表明，肥胖會導(dǎo)致血清中TG、TC、LDL-C 含量升高，HDL-C 含量降低[19]，而血脂 代謝紊亂是高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠的顯著特征。如表1 所示，與N 組比較，HFD 組小鼠血清TC、TG、LDL-C 水平極顯著升高（P＜0.01），HDL-C 水平顯著降低（P＜0.05），表明肥胖小鼠的血脂代謝發(fā)生紊亂。與HFD 組相比，HFD-L 組肥胖小鼠血清的LDL-C 水平顯著降低（P＜0.05），然而對其它血脂指標(biāo)沒有顯著性的影響（P＞0.05）；提高CSP灌胃劑量（50 mg/kg），可顯著降低TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C 水平；而兒茶素的處理能顯著降低TC 和LDL-C 水平，升高HDL-C 水平，然而對TG 的降低程度不具有顯著性差異（P＞0.05）。

表1 CSP 對肥胖小鼠血脂的影響Table 1 Effect of CSP on lipid of obese mice

2.5 CSP 對肥胖小鼠肝功能的影響

肥胖會導(dǎo)致肝臟脂代謝發(fā)生紊亂，主要表現(xiàn)為肝臟因脂肪的堆積而腫大。與N 組相比，HFD組小鼠肝臟質(zhì)量極顯著增加（P＜0.01），表明高脂飲食會誘導(dǎo)肝臟脂肪的積累，導(dǎo)致肝損傷。對肝臟中的TG 進(jìn)行定量測定，發(fā)現(xiàn)HFD 組小鼠肝臟TG含量與N 組相比顯著升高，CSP 和兒茶素均能顯著降低TG 的含量。與HFD 組相比，HFD-L（P＜0.05）、HFD-H（P＜0.01）和HFD-C（P＜0.05）組均能降低肝臟質(zhì)量和TG 含量。ALT 和AST 是檢驗肝臟功能的重要指標(biāo)。肝功能受損時，細(xì)胞膜通透性下降，分布于細(xì)胞胞漿中的ALT 和線粒體中的AST 會發(fā)生異常外流[20]。由表2 可以看出，高脂飼養(yǎng)會使血清中ALT 顯著增加（P＜0.01），然而AST不會升高，表明14 周的高脂飲食處理，不足以損傷肝細(xì)胞中的線粒體，使得AST 外流。與HFD 組相比，HFD-L 和HFD-H 組會修復(fù)損傷的肝細(xì)胞，顯著減少ALT（P＜0.05）外流。

表2 CSP 對肥胖小鼠肝功能的影響Table 2 Effects of CSP on liver function of obese mice

2.6 肝臟切片病理觀察

在肥胖的發(fā)展過程中，過多的脂肪熱量超過脂肪組織儲存的緩沖能力和效率，導(dǎo)致在肝臟等其它組織沉積，形成脂肪空泡。如圖3 所示，N 組小鼠肝細(xì)胞肝索排列規(guī)則，肝細(xì)胞胞漿均勻，幾乎無空泡樣變性和炎癥細(xì)胞。HFD 組小鼠肝臟脂肪變性明顯，有較多的空泡樣變性，而3 個處理組均能有效減少脂肪空泡情況。

圖3 肝臟H&E 染色Fig.3 H&E staining of liver

圖4 CSP 對肝臟AMPK 通路的影響Fig.4 Effect of CSP on AMPK pathway in the liver

2.7 CSP 對小鼠肝組織AMPK 信號通路蛋白表達(dá)量的影響

AMPK 作為一種重要的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)因子，是預(yù)防或治療肥胖的潛在靶點[9]。因此，對肝臟中AMPK、p-AMPK、ACC、p-ACC、SREBP-1c、PPARα、HMGCR 的表達(dá)量進(jìn)行檢測。Western blot 結(jié)果表明，與N 組相比，長期高脂飼料飼喂使小鼠肝臟p-AMPK/AMPK 水平極顯著降低（P＜0.01），同時p-ACC/ACC 蛋白表達(dá)極顯著下降（P＜0.001），PPARα 極顯著降低（P＜0.01），而SREBP-1c（P＜0.001）和HMGCR（P＜0.01）表達(dá)量顯著升高。CSP干預(yù)后，與HFD 相比，HFD-H 組小鼠肝臟組織中p-AMPK/AMPK（P＜0.05）、p-ACC/ACC（P＜0.01）、PPARα（P＜0.01）的表達(dá)均顯著上調(diào)，SREBP-1c 和HMGCR 的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01）。由此可見，CSP 可能通過調(diào)控肝臟AMPK 信號通路來改善脂代謝紊亂。

3 討論與結(jié)論

肥胖的特點是脂肪組織在體內(nèi)過度積累，可導(dǎo)致機(jī)體患慢性疾病的風(fēng)險增加，而植物多酚已被證明可以發(fā)揮抗肥胖作用，然而，富含酚類物質(zhì)的CSP 對脂肪合成和代謝的作用尚未見報道。本實驗發(fā)現(xiàn)CSP 飲食干預(yù)，可以抑制高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠體質(zhì)量、脂肪組織質(zhì)量的增加，改善了因高脂飲食造成的脂肪細(xì)胞肥大及血脂異常，此外，還可以通過促進(jìn)AMPK 磷酸化，抑制脂肪酸合成，促進(jìn)脂肪酸氧化，改善肝臟能量代謝從而改善機(jī)體肥胖和脂代謝紊亂。

據(jù)報道，植物源的兒茶素和原花青素均具有減肥、降脂的功效，如兒茶素被人體攝入后，能抑制胰、胃脂肪酶，降低脂肪乳化從而起到降脂的作用[21]，并且茶葉中的兒茶素能通過激活A(yù)MPK，調(diào)控葡萄糖生成與分解、脂肪酸合成與分解代謝[22]。楊梅原花青素也可以通過激活A(yù)MPK 信號通路來調(diào)節(jié)HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)代謝紊亂[23]。因此，CSP 能改善肥胖小鼠的脂代謝紊亂，可能因為CSP 富含兒茶素、原花青素等生物活性成分，從而起到很好的減肥降脂效果。肝臟是人體主要的代謝器官，HFD誘導(dǎo)的肥胖與白色脂肪細(xì)胞中脂滴的積累有關(guān)[24]，甚至在肝細(xì)胞中積累脂滴，這可能會導(dǎo)致肝臟脂肪變性，影響肝臟正常的脂代謝功能。本研究發(fā)現(xiàn)高脂飲食會導(dǎo)致小鼠肝臟中TG 含量顯著升高，這與肝臟H&E 染色的結(jié)果相一致，結(jié)合肝臟ALT 和AST 指標(biāo)，表明高脂飲食會導(dǎo)致一定程度的肝損傷，而CSP 能顯著修復(fù)高脂飲食導(dǎo)致的肝損傷。

腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）被稱為“細(xì)胞能量調(diào)節(jié)器”，是細(xì)胞一級能量平衡的主傳感器和調(diào)節(jié)因子[6]。多項研究表明，肥胖小鼠肝臟中AMPK活性會被抑制[25]。本實驗中，高脂飲食會顯著抑制肝臟AMPK 活性，這與之前的報道相一致，而CSP可通過促進(jìn)AMPK 在Thr172 位點的磷酸化而逆轉(zhuǎn)抑制作用，使得p-AMPK/AMPK 的比值升高，促進(jìn)能量的分解代謝抑制合成代謝。ACC 能催化乙酰CoA 羧化成丙二酰CoA，被認(rèn)為是脂肪酸合成過程中的限速酶[26]。AMPK 通過調(diào)節(jié)下游ACC 的磷酸化，在脂肪酸合成和氧化過程中起重要作用。由ACC 催化生成的丙二酰輔酶A 不僅可作為脂肪酸合成的前體，也是線粒體脂肪酸攝取關(guān)鍵酶CPT-1 的內(nèi)源性抑制劑[27-28]。CSP 能磷酸化AMPK使其活化，然后能激活A(yù)CC 第79 位上的絲氨酸磷酸化位點使其失去活性，進(jìn)而使體內(nèi)丙二酰輔酶A 合成減少，不僅降低了脂肪的合成也激活CPT-1，增強(qiáng)了脂肪酸β-氧化作用[29-30]，進(jìn)而改善脂質(zhì)代謝。此外，AMPK 還能通過介導(dǎo)SREBP-1c調(diào)節(jié)脂肪酸合成和脂肪酸氧化[31-32]。AMPK 活化后能抑制SREBP-1c 的表達(dá)，被抑制的SREBP-1 又進(jìn)一步降低ACC 的表達(dá)，進(jìn)而抑制脂肪酸的合成。AMPK 也可以調(diào)節(jié)膽固醇穩(wěn)態(tài)。HMGCR 是膽固醇從頭合成的限速酶，可以被AMPK 磷酸化所抑制[33]。CSP 能顯著抑制HFD 誘導(dǎo)小鼠HMGCR的蛋白表達(dá)，這與降低血清中TC 的結(jié)果保持一致。PPARα 通過調(diào)節(jié)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)和β-氧化以及以脂肪酸和各種脂肪酸衍生物作為內(nèi)源性配體保持血漿脂質(zhì)譜來控制肝臟中的脂質(zhì)通量[26]，本研究發(fā)現(xiàn)，CSP 能上調(diào)PPARα，從而增強(qiáng)脂質(zhì)氧化，降低血漿中TG、TC、LDL-C 水平，升高HDL-C 水平，改善肝臟脂肪的積累導(dǎo)致的損傷。

如圖5 所示，推測CSP 可以靶向作用于AMPK，從而調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝?；诖耍芯空J(rèn)為CSP 具有預(yù)防肥胖的潛力。同時，CSP 是從農(nóng)業(yè)廢棄的板栗殼中提取的天然色素，本研究的結(jié)果提供了一種有效的食物輔助預(yù)防高脂飲食肥胖的方法，為通過膳食補(bǔ)充來維持代謝綜合征患者體內(nèi)能量平衡提供可能性。

圖5 CSP 通過AMPK 信號通路調(diào)控HFD 小鼠脂代謝紊亂Fig.5 CSP regulated lipid metabolism disorders in HFD mice through AMPK signaling pathway