藍(lán)曉琳 曲春生 王雙虎 黃金偉 樊慧蘇 商振球

作者單位：323000 麗水市人民醫(yī)院肝科感染科（藍(lán)曉琳、商振球），檢驗(yàn)科（曲春生），藥學(xué)部（王雙虎），呼吸內(nèi)科（黃金偉）兒科（樊慧蘇）

呼吸道鼻病毒感染是免疫力較低的兒童群體常見(jiàn)的疾病，呼吸道可感染的病原體眾多，在感染早期及時(shí)確定鼻病毒感染有助于臨床治療的決策，減少醫(yī)療資源浪費(fèi)。近年來(lái)，抗原檢測(cè)技術(shù)、PCR 技術(shù)、宏基因組二代測(cè)序技術(shù)等均用于兒童呼吸道感染病原學(xué)診斷，并展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景[1]。本研究利用RTPCR 聯(lián)合毛細(xì)電泳技術(shù)對(duì)麗水地區(qū)某醫(yī)院兒童樣本進(jìn)行鼻病毒等病原體檢測(cè)，根據(jù)結(jié)果分析鼻病毒的流行病學(xué)特征，為預(yù)防感染及臨床精準(zhǔn)醫(yī)療提供幫助。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 收集2020 年3 月至2021 年6 月在麗水市人民醫(yī)院門(mén)診或住院的0～12 歲兒童鼻拭子送檢標(biāo)本1 603 例，其中男770 例，女833 例；＜1 歲413 例，1～6 歲681 例，＞6～12 歲509 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：在麗水定居3 個(gè)月以上，經(jīng)本院收治的上呼吸道癥狀患者，且病毒核酸檢測(cè)為鼻病毒陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn)：患病就診前使用過(guò)抗生素者；合并流感病毒、腺病毒等其他呼吸道病毒感染者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有兒童家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 儀器與試劑 全自動(dòng)核酸提取儀（型號(hào)：Smart LabAssist-32，中國(guó)臺(tái)灣圓點(diǎn)奈米技術(shù)股份有限公司）由寧波海爾施基因科技有限公司進(jìn)口；核酸或純化提取試劑（浙甬食藥監(jiān)械生產(chǎn)備20150063）、呼吸道病原體多重檢測(cè)試劑盒（浙食藥械生產(chǎn)許20130074 號(hào)）、T400 Sanger 測(cè)序儀（浙食藥械生產(chǎn)許20150033 號(hào)）購(gòu)自寧波海爾施基因科技有限公司；基因擴(kuò)增儀[型號(hào)：TC-96/G/H（b）C]購(gòu)自杭州博日科技有限公司。

1.3 檢測(cè)方法 收集0～12 歲兒童的鼻拭子置于細(xì)胞保存液中，利用全自動(dòng)核酸提取儀及試劑進(jìn)行核酸提取，提取的核酸用呼吸道病原體多重檢測(cè)試劑盒進(jìn)行RT-PCR 擴(kuò)增，在T400 Sanger 測(cè)序儀上用毛細(xì)電泳技術(shù)分離不同長(zhǎng)度的PCR 產(chǎn)物，可以分析出鼻病毒、博卡病毒、腺病毒、偏肺病毒、冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率分析 1 603 例標(biāo)本中，鼻病毒陽(yáng)性檢出率為25.95%（416/1 603）。

2.2 不同性別兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率比較 男童鼻病毒陽(yáng)性檢出率為32.60%（251/770），高于女童的19.81%（165/833），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=34.06，P＜0.01）。

2.3 不同年齡兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率比較 ＜1 歲、1～6 歲和＞6～12 歲兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率分別為18.89%（78/413）、36.71%（250/681）和17.79%（88/509），不同年齡兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=71.63，P＜0.01）。其中1～6 歲兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率高于＜1 歲和＞6～12 歲兒童（均P＜0.05）。

2.4 不同季節(jié)兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率比較 春季、夏季、秋季和冬季兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率分別為26.08%（103/395）、35.31%（149/422）、23.38%（94/402）和18.23%（70/384），不同季節(jié)兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.53，P＜0.01）。其中夏季鼻病毒陽(yáng)性檢出率最高，其次為春季和秋季。

2.5 混合感染分析 1 603 例樣本中，檢出鼻病毒合并其他類型病毒感染52 例，其中，合并博卡病毒的陽(yáng)性檢出率最高，占雙重混合感染的44.23%（23/52）；其次為合并呼吸道合胞病毒感染，占雙重混合感染的21.15%（11/52）；余下依次為合并腺病毒、偏肺病毒、冠狀病毒，分別占雙重混合感染的15.38%（8/52）、13.46%（7/52）、5.78%（3/52）。

3 討論

呼吸道病原體感染是兒童常見(jiàn)的感染原因之一，其中鼻病毒感染是較為常見(jiàn)的呼吸道病原體感染[2]。本研究利用RT-PCR 聯(lián)合毛細(xì)電泳分析鼻病毒的流行病學(xué)特征，發(fā)現(xiàn)其在冬季檢出率最低，而在夏季檢出率最高，這可能與鼻病毒自身的生長(zhǎng)最適溫度為33～35 ℃有關(guān)[3]。不同年齡分組中，＜1 歲兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率最低，這與兒童的活動(dòng)環(huán)境相對(duì)固定，家人的悉心照顧有關(guān)。1～6 歲兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率最高，可能是因?yàn)樗麄兯幁h(huán)境容易接觸到傳染源，并且此階段的兒童免疫力相對(duì)較低，更易感染有關(guān)。隨著年齡的增長(zhǎng)，兒童免疫力不斷加強(qiáng)，＞6～12 歲兒童鼻病毒陽(yáng)性檢出率有所下降。

本次觀察的1 603 例標(biāo)本中，共檢出416 例鼻病毒陽(yáng)，陽(yáng)性檢出率為25.95%，這與郭鵬波等[4]在鄭州地區(qū)兒童鼻病毒的感染率十分接近。在不同性別的陽(yáng)性檢出率上，本研究發(fā)現(xiàn)男童的陽(yáng)性檢出率高于女童；與于樂(lè)香等[5]研究報(bào)道不一致。引起這一差異的原因可能在于標(biāo)本的來(lái)源不同，于樂(lè)香等[5]分析的是兒童下呼吸道標(biāo)本，而本研究分析的標(biāo)本來(lái)源為上呼吸道鼻拭子標(biāo)本。在鼻病毒檢出的患兒群體中，有合并檢出博卡病毒的情況，這與蘇州地區(qū)兒童呼吸道急性感染報(bào)道中的混合感染情況相類似[5]。患兒中出現(xiàn)鼻病毒合并呼吸道合胞病毒的感染情況在蘇州、武漢等地均有報(bào)道[6-7]。鼻病毒合并偏肺病毒的混合感染情況主要出現(xiàn)在我國(guó)南方地區(qū)[7]，這與本研究中發(fā)現(xiàn)的混合感染相一致。但鼻病毒合并冠狀病毒的報(bào)道較為少見(jiàn)，還需進(jìn)一步與其他地區(qū)的研究報(bào)道相互認(rèn)證。

綜上所述，夏季鼻病毒陽(yáng)性檢出率高，且1～6 歲兒童更易感染，男童高于女童，提示夏季應(yīng)做好鼻病毒的預(yù)防工作，并根據(jù)不同季節(jié)、不同年齡段兒童進(jìn)行精確管理，做好預(yù)防措施及相關(guān)病原體的診治。