李 青 竇磊娜 溫 凱 于雪芝 余文博 沈建忠 王戰(zhàn)輝

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，動(dòng)物源食品安全檢測(cè)技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種生存能力極強(qiáng)的革蘭氏陽(yáng)性機(jī)會(huì)致病菌，可產(chǎn)生多種毒力因子，引起廣泛感染、中毒性休克綜合征（toxic shock syndrome，TSS）和食物中毒。其中，金黃色葡萄球菌腸毒素（staphylococcal enterotoxins， SEs）是金黃色葡萄球菌的主要毒力因子。同時(shí)還有一類與SEs結(jié)構(gòu)十分相似但不具有嘔吐活性的蛋白質(zhì)分子。國(guó)際葡萄球菌超抗原命名委員會(huì)（international nomenclature committee for staphylococcal superantigens，INCSS）將具有嘔吐活性的蛋白質(zhì)分子命名為SEs，缺乏嘔吐活性或未被檢測(cè)是否具有嘔吐活性的蛋白質(zhì)分子命名為類腸毒素（staphylococcal enterotoxins-like，SEls）［1］。

金黃色葡萄球菌的適宜生長(zhǎng)溫度和pH 值范圍較廣，因此該菌不僅可以引起淺表皮膚感染和深層組織感染，還可以污染各種各樣的食物，包括肉類、蔬菜、水果、糕點(diǎn)和奶制品［2］，其分泌的SEs可引起廣泛感染和食品污染。SEs 具有高度穩(wěn)定性，對(duì)高溫和大多數(shù)蛋白水解酶都具有強(qiáng)烈的抗性。金黃色葡萄球菌的菌體細(xì)胞在80℃下經(jīng)30 min 即可被殺滅，而SEs 可耐受100℃高溫，即使煮沸30 min 還維持其生物活性和免疫活性，并且SEs能夠抵抗胃腸液中胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等蛋白酶的水解作用［3-5］。

SEs污染范圍廣、穩(wěn)定性高、具有致命的毒性作用，研發(fā)出有效的治療策略十分必要。目前還沒有針對(duì)SEs治療策略展開論述的綜述。因此本文首先介紹了SEs 的分類，并針對(duì)出現(xiàn)頻率高、毒性大、 危害最嚴(yán)重的兩種SEs—— 腸毒素A（staphylococcal enterotoxin A，SEA）和腸毒素B（staphylococcal enterotoxin B，SEB），總結(jié)了其基本結(jié)構(gòu)、超抗原活性及嘔吐活性等毒性作用，重點(diǎn)討論了SEA、SEB 發(fā)揮作用的T 細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）-SEs-主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC） II 三元復(fù)合物的相互作用結(jié)合區(qū)域以及關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)，并針對(duì)SEA、SEB總結(jié)了以疫苗為主的主動(dòng)治療策略以及以中和性抗體為主的被動(dòng)治療策略，以期為SEs有效治療提供思路。

1 金黃色葡萄球菌腸毒素的分類及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

1959 年，Bergdoll 和Casman 首次發(fā)現(xiàn)SE，并將其命名為SEA，至今共發(fā)現(xiàn)了23 種SEs 和金黃色葡萄球菌類腸毒素（staphylococcal enterotoxinslike，SEls）［6-10］。這些毒素是由168~261 個(gè)氨基酸組成的球狀單鏈蛋白，分子質(zhì)量大小為19~29 ku。幾乎所有的金黃色葡萄球菌都至少編碼1 個(gè)SE，有些甚至可編碼12 個(gè)SEs［11］。根據(jù)SEs 的核苷酸和氨基酸序列的同源性，SEs和SEls可以分為5組，I 組包括毒性休克綜合征毒素1 （toxic shock syndrome toxin-1，TSST-1）、葡萄球菌超抗原樣蛋白7 （staphylococcal superantigen-like protein 7，SSL7） 和SElX；II 組包括SEB、SEC、SEG、SElU和SElW；III組包括SEA、SED、SEE、SEH、SElJ、SEN 和SEP；V 組包括SEI、SEK、SEL、SEM、SEQ、SET 和SElV；IV 組來源于鏈球菌，故本文不予討論。

盡管SEs之間的一級(jí)序列不同，但三維結(jié)構(gòu)十分相似，主要由氨基端和羧基端兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成［12-13］（圖1）。氨基端有一個(gè)特征性的寡糖/寡核苷酸折疊（oligosaccharide/oligonucleotide fold，O/B fold），形成β 桶狀結(jié)構(gòu)，其分子內(nèi)部高度疏水，但表面覆蓋著大量的親水殘基。羧基端含有一個(gè)β抓握基序（β-grasp motif），兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間的α螺旋在分子頂端形成一個(gè)與TCR 結(jié)合相關(guān)的淺腔。以III 組的SEA 和II 組的SEB 為例，具體介紹SEs的二級(jí)結(jié)構(gòu)［14-15］。SEA 的氨基端包含兩個(gè)β 折疊（β-sheet），一個(gè)β 折疊由β 折疊股（β-strand）β1、β4a 和β5b 構(gòu)成，另一個(gè)β 折疊由β 折疊股β2、β3、β4b 和β5a 構(gòu)成，兩個(gè)β 折疊構(gòu)成一個(gè)β 桶狀結(jié)構(gòu)（圖1b）。β 桶狀結(jié)構(gòu)上被β3 和β4a 之間的α 螺旋（a）SEA（PDB ID：1SXT）、SEB（PDB ID：3SEB）、SEC2（PDB ID：1STE）、SEC3（PDB ID：1JWM）和SEE（PDB ID：5FKA）的序列比對(duì)：顏色越深表示氨基酸同源性越大；（b，c）SEA（b）和SEB（c）的三維結(jié)構(gòu)以及活性位點(diǎn)分布，不同的顏色表示不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)：紅色為螺旋，青色為β折疊，綠色為轉(zhuǎn)角，銀色為卷曲，黃色為半胱氨酸，虛線為半胱氨酸間的二硫鍵。（α-helix）α3 覆蓋。羧基端包含由β 折疊構(gòu)成的β抓握基序。兩個(gè)半胱氨酸殘基（Cys96 和Cys106）在β桶狀結(jié)構(gòu)底部形成一個(gè)二硫鍵。SEB氨基端包含由β折疊股β1、β2、β3、β4、β5組成的β桶狀結(jié)構(gòu)和α2、α3、α5 等3 個(gè)α 螺旋（圖1c）。兩個(gè)半胱氨酸殘基（Cys93 和Cys113）在β 桶狀結(jié)構(gòu)頂部形成一個(gè)二硫鍵。羧基端含有一個(gè)由β折疊股β6和β折疊股β12構(gòu)成的反平行β折疊。SEA和SEB都含有一個(gè)由上述二硫鍵構(gòu)成的半胱氨酸環(huán)，該環(huán)被認(rèn)為與嘔吐活性有關(guān)［16］。SEA、SEC2和SED的結(jié)構(gòu)中存在Zn2+，其在SEs 與MHC II 類分子相互作用中發(fā)揮著必不可少的作用［17-18］，但SEB、SEE等與MHC II類分子相互作用時(shí)不依賴該Zn2+。

Fig. 1 Primary and tertiary structure of SEs圖1 SEs的一級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)

2 金黃色葡萄球菌腸毒素的毒性作用

SEs具有多種生物學(xué)活性，主要包括超抗原活性、誘導(dǎo)機(jī)體嘔吐及胃腸炎活性。當(dāng)SEs通過胃腸道或皮膚創(chuàng)口進(jìn)入機(jī)體，這些生物學(xué)活性在SEs產(chǎn)生毒性作用過程中發(fā)揮了巨大作用。超抗原與傳統(tǒng)抗原刺激T細(xì)胞機(jī)制不同（圖2）。傳統(tǒng)抗原經(jīng)抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC）內(nèi)化或處理后形成短的蛋白質(zhì)水解肽，可與MHC I 或II類分子的多肽結(jié)合槽［19］、TCR 的高變區(qū)形成特異性的TCR-肽-MHC 復(fù)合物［20］（圖2a）。而超抗原是完整的天然蛋白質(zhì)，不經(jīng)APC 的遞呈與處理，可直接與MHC II 類分子多肽結(jié)合槽以外的位點(diǎn)結(jié)合［21］（圖2b）。并且超抗原繞過與多肽結(jié)合的TCR特異性決定區(qū)，與特異性的TCR結(jié)構(gòu)域結(jié)合，每一種超抗原都對(duì)應(yīng)一種特異性的TCR 結(jié)構(gòu)域［22］。超抗原與MHC II類分子、TCR的這種作用方式導(dǎo)致更多的T 細(xì)胞被刺激，釋放大量細(xì)胞因子［23］。SEs可以激活高達(dá)30%的T細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、白介素（interleukin， IL） -6、 IL-2 和γ 干擾素（interferon γ，IFN-γ）等細(xì)胞因子大量釋放，最終導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生TSS 甚至敗血癥［24］。其中SEB 是超抗原活性最強(qiáng)的SEs，霧化SEB可導(dǎo)致動(dòng)物肺部產(chǎn)生肺水腫和呼吸衰竭［25］。SEB在20世紀(jì)60年代被美國(guó)列為進(jìn)攻性生物戰(zhàn)劑，在2000 年被美國(guó)國(guó)家過敏和傳染病研究所列為B 類重點(diǎn)病原體［26］。SEB對(duì)公共衛(wèi)生安全產(chǎn)生了巨大威脅。

Fig. 2 TCR，MHC class II molecules interact with antigens and superantigens圖2 TCR、MHC Ⅱ類分子與抗原、超抗原相互作用

人和動(dòng)物腸道攝入高納克或低微克數(shù)量級(jí)濃度的SEs，會(huì)產(chǎn)生發(fā)燒、劇烈惡心嘔吐、腹痛和腹瀉等癥狀［27-28］。但SEs 導(dǎo)致機(jī)體嘔吐的機(jī)制仍不清楚，有學(xué)者認(rèn)為，SEs導(dǎo)致嘔吐主要是引起機(jī)體產(chǎn)生5-羥色胺進(jìn)而刺激迷走神經(jīng)，但該假說并未得到進(jìn)一步確證［29］。據(jù)報(bào)道70%的腸毒素性食物中毒（S. aureusfood poisoning，SFP）都是由SEA 引起的［30］。鑒于SEA 和SEB 的較強(qiáng)毒性，臨床主要圍繞SEA和SEB的中毒治療開展研究。

3 TCR-SEs-MHC Ⅱ類分子相互作用位點(diǎn)分析

SEs 主要與MHC II 類分子、TCR 形成TCRSEs-MHC II 類分子三元復(fù)合物發(fā)揮超抗原活性，因而了解SEs 與MHC II 類分子、TCR 相互作用的關(guān)鍵位點(diǎn)，對(duì)于圍繞這些關(guān)鍵作用位點(diǎn)開展針對(duì)性的研究，達(dá)到治療目的具有重要意義。

所有TCR-SEs-MHC II 類分子三元復(fù)合物存在兩個(gè)相互作用界面，TCR-SEs 相互作用面和SEs-MHC II 類分子相互作用面，而TCR-MHC II 類分子相互作用界面在不同SEs 分子中存在情況不同［31-32］?，F(xiàn)有研究多是針對(duì)TCR-SEs、SEs-MHC II類分子兩個(gè)作用面制備疫苗或中和抗體，因此本文圍繞SEA、SEB，針對(duì)這兩個(gè)作用面的作用位點(diǎn)展開論述。

3.1 TCR-SEs相互作用位點(diǎn)分析

不同的SEs識(shí)別不同的TCR亞型，與SEs相互作用的TCR 結(jié)構(gòu)域具有特異性［22］。SEA 與人TCR亞型Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ16、Vβ18 和Vβ22 鏈均存在相互作用［22］。SEB 可與人TCR 亞型Vβ3、Vβ12、Vβ14、Vβ15、Vβ17 和Vβ20 鏈結(jié)合［15］。人TCR Vβ利用互補(bǔ)決定區(qū)（complementary determining region， CDR） 2、 骨架區(qū)（frame region，F(xiàn)R） 3、高變區(qū)（hypervariable region，HV）4和CDR1與SEA羧基端與氨基端之間的淺槽相互作用，分別占SEA-TCR 復(fù)合物中的TCR 埋藏面積的37%、20%、23%和10%。SEA 有4 個(gè)區(qū)域與TCR產(chǎn)生相互作用（圖3a），包括α2螺旋（殘基Gly20、Thr21、Gly24、Asn25、Lys27 和Tyr32、Asn33、Glu34），β2-β3 和β4-β5a 環(huán)組成的疏水區(qū)（殘基Ser62、Trp63、Tyr64、Tyr91、Tyr92、Gly93和Tyr94），α4-β9 環(huán)（殘基Val174 和Phe175），以及α5 螺旋的氨基端一側(cè)（殘基Tyr205 和Ser206）［33］。人TCR與SEB氨基端β桶狀結(jié)構(gòu)和α2螺旋之間的淺槽結(jié)合。SEB 中的殘基Asn23、Val26、Asn31、Val33、Asn60、Tyr61、Tyr90 和Tyr91殘基在毒素分子與人TCR相互作用過程中均發(fā)揮了重要作用（圖3b）［32，34］。小鼠TCR Vβ8.2結(jié)構(gòu)域上FR2 的殘基His47，CDR2 的殘基Tyr50、Ala52、Gly53、Ser54和Thr55，F(xiàn)R3的殘基Glu56、Lys57、Tyr65、Lys66 和Ala67，HV4 的Pro70 和Ser71，都是與SEB相互作用的重要位點(diǎn)［35］。

3.2 SEs-MHC II類分子相互作用位點(diǎn)分析

MHC II 類分子與不同的SEs 分子結(jié)合時(shí)的位點(diǎn)不同，但存在部分重疊［36］。一些SEs 結(jié)合MHC II類分子的α1區(qū)域，一些SEs結(jié)合MHC II類分子的β1 區(qū)域，一些SE 與MHC II 類分子的α1 區(qū)域和β1區(qū)域同時(shí)結(jié)合。

SEA 既可與MHC 的α 或β 同時(shí)結(jié)合，但一個(gè)SEA分子不能與同一個(gè)MHC II類分子α、β同時(shí)結(jié)合，可以與兩個(gè)MHC II 類分子的α 或β 同時(shí)結(jié)合［28］。MHC II 類分子β 鏈的His81 對(duì)SEA 的結(jié)合很重要［37］。Hudson 等［38］發(fā)現(xiàn)了在與MHC II 類分子的相互作用過程中，SEA的兩個(gè)作用位點(diǎn)。第一個(gè)高親和力位點(diǎn)是由Zn2+介導(dǎo)的His187、His225、Asp227 三個(gè)關(guān)鍵氨基酸與MHC II 類分子β 鏈中的His81 相互作用。第二個(gè)低親和力位點(diǎn)的相互作用與SEB 類似，為Phe47 與MHC II 類分子α 鏈相互作用。第一個(gè)高親和力位點(diǎn)的相互作用可增強(qiáng)第二個(gè)低親和力位點(diǎn)結(jié)合。這兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)是SEA 發(fā)揮最大活性所必須的，兩個(gè)位點(diǎn)的存在使得SEA能夠跨越APC 上的MHC-II 分子，增加超抗原活性［39］。

SEB 與MHC II 類分子α 鏈相互作用［28］。SEB與MHC II 類分子的結(jié)合面由SEB 的兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)組成，包括由β 桶狀結(jié)構(gòu)的3 個(gè)β 折疊股1（殘基Val33-Lys39）、2（殘基Asp48-Ser52）和3（殘基Asn63-Phe68）衍生的極性結(jié)合袋和疏水性β轉(zhuǎn)角。另外，以亮氨酸殘基為中心的疏水環(huán)在大多數(shù)SEs中是保守的（SEA-Leu48，SEB-Leu45），是與MHC II 類分子相互作用的關(guān)鍵殘基之一［36，40］。SEB 通過殘基Phe44 和Leu45 結(jié)合MHC II 類分子α1 區(qū)域的保守疏水結(jié)合袋［41］。當(dāng)突變了SEB 分子中殘基Phe44和Leu45時(shí)，SEB與MHC II類分子的結(jié)合親和力被破壞［34］。SEB 的結(jié)合袋殘基Glu67、Tyr89 和Tyr115，結(jié)合MHC II 類分子α 亞基的Lys39。

SEA、SEB 利用類似的蛋白質(zhì)結(jié)合基序與MHC II 類分子發(fā)生相互作用，結(jié)合基序周圍的結(jié)構(gòu)對(duì)MHC II 類分子與SEs 的結(jié)合親和力也至關(guān)重要［42］。SEs 的極性結(jié)合袋與二硫鍵合環(huán)等保證了SEs-MHC II類分子復(fù)合物結(jié)合的穩(wěn)定性與特異性。SEA中有一個(gè)短二硫鍵合環(huán)，SEB中有一個(gè)長(zhǎng)的同源長(zhǎng)環(huán)。SEB長(zhǎng)環(huán)中的殘基Tyr94與MHC II類分子α 亞基的Leu60 和Ala61 形成疏水相互作用，SEA中的Ala97具有類似于SEB的Tyr94的作用。

4 金黃色葡萄球菌腸毒素中毒的免疫治療策略

目前尚沒有針對(duì)SEs引起的致死性休克的有效療法。免疫療法是預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌相關(guān)疾病的一種非常有前景的治療策略［43］。針對(duì)SEs開展的治療性研究也大多數(shù)是圍繞抗體的主動(dòng)免疫療法和被動(dòng)免疫療法，主動(dòng)誘導(dǎo)或被動(dòng)給予機(jī)體針對(duì)SEs的中和性抗體（圖4a，b）。免疫療法產(chǎn)生的中和性抗體可以特異性地結(jié)合SEs，中和SEs 的毒性作用，減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而產(chǎn)生保護(hù)作用。主動(dòng)免疫療法通常選擇SEs發(fā)揮超抗原活性的某個(gè)表位，消除SEs的超抗原活性，用其制備疫苗，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用的抗體（表1）。被動(dòng)免疫療法通常是給予機(jī)體中和性抗體，這些針對(duì)SEs 的中和性抗體主要分為兩類，一類是可識(shí)別MHC II 類分子結(jié)合表位的抗體，一類是可識(shí)別TCR 表位的抗體（表2）。這兩類抗體都通過破壞TCR-SEs-MHC II 類分子三元復(fù)合物的形成從而阻斷SEs的超抗原作用以達(dá)到治療目的。

Table 1 Research on active therapy for SEs表1 主動(dòng)療法治療SEs的研究

Table 2 Research on passive therapy for SEs表2 被動(dòng)療法治療SEs的研究

Fig. 4 Active and passive immunotherapy for SEs圖4 主動(dòng)免疫療法和被動(dòng)免疫療法治療SEs

4.1 主動(dòng)免疫療法在預(yù)防金黃色葡萄球菌腸毒素中毒中的應(yīng)用

4.1.1減毒疫苗

1996 年，Bavari 等［44］通過定點(diǎn)突變分別將SEA 上的64 位和92 位酪氨酸突變?yōu)楸彼幔⊿EAY92A，SEAY64A），從而破壞TCR-SEA-MHC II類分子三元復(fù)合物的形成，將突變后的SEA 作為疫苗免疫小鼠。SEAY92A 降低了SEA 與HLA（human leukocyte antigen）-DR1 結(jié)合能力；SEAY64A降低了SEA與TCR的相互作用；體外實(shí)驗(yàn)表明，SEAY92A和SEAY64A不能誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖。高劑量SEAY92A 或SEAY64A 免疫的小鼠可完全抵抗WT SEA毒素攻擊，所有接種疫苗的小鼠血清中均檢測(cè)到較高水平的SEA 抗體。1998 年，該團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，通過單一定點(diǎn)突變SEB 極性結(jié)合袋（Y89A、Y115A、E67Q） 或疏水結(jié)合環(huán)（Q43P、F44P、L45R）上的關(guān)鍵氨基酸殘基，構(gòu)建的重組SEB 可以破壞SEB與HLA-DR1的結(jié)合［45］。這些突變體對(duì)T細(xì)胞無(wú)刺激性，不引起細(xì)胞因子生成，所有免疫小鼠均產(chǎn)生了持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的免疫應(yīng)答。該疫苗在靈長(zhǎng)類動(dòng)物身上同樣有很好的保護(hù)作用，接種重組SEB 的小鼠可以承受WT SEB 10~30 倍的LD50攻擊，接種重組SEB 的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物恒河猴可以承受30 倍的LD50攻擊。此外，該疫苗具有一定的交叉保護(hù)作用，可以引起較高水平的SEC1抗體產(chǎn)生，以及一定程度的SEA、TSST-1 抗體產(chǎn)生。隨后，Boles 等［46］將SEB 的MHC II 類分子結(jié)合位點(diǎn)的3個(gè)氨基酸突變（SEBL45R/Y89A/Y94A），制備了一種重組SEB 減毒疫苗STEBVax。該減毒疫苗在小鼠模型中產(chǎn)生了良好的保護(hù)作用。將該減毒疫苗免疫恒河猴后，使用致死濃度的霧化SEB 攻擊恒河猴，該減毒疫苗對(duì)恒河猴產(chǎn)生了劑量依賴性保護(hù)作用。目前，SEB疫苗STEBVax已經(jīng)完成了臨床I期試驗(yàn)，所有志愿者表現(xiàn)出良好的劑量耐受性［47］。2017年，Choi等［48］基于以往研究基礎(chǔ)和計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)設(shè)計(jì)了4 個(gè)重組SEB 減毒疫苗：S2（SEBF44A/E67A）、 S9 （SEBN23A/Y90A）、 S19（SEBN23A/Y90A/R110A/F177A） 和S26 （SEBF44A/E67A/Y90A/R110A/F177A）。除S2外，其他3個(gè)重組SEB 減毒疫苗均不表現(xiàn)T 細(xì)胞刺激活性。S9 和S19 在小鼠模型中具有100%的保護(hù)作用，而S26僅產(chǎn)生20%的保護(hù)作用。其原因可能是S26的氨基酸取代改變了減毒疫苗發(fā)揮誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生的原始結(jié)構(gòu)，影響免疫效果。

4.1.2亞單位疫苗

2002 年，LeClaire 等［49］制備了SEB 前99 個(gè)氨基酸殘基的重組SEB 氨基端片段（1~99）和羧基端（66~243）氨基酸殘基片段。將這兩個(gè)蛋白質(zhì)片段免疫小鼠后發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)重組片段具有很高的免疫原性，但產(chǎn)生的抗體沒有中和作用，無(wú)法保護(hù)小鼠免受SEB 的致死性攻擊，說明SEB 重組片段不是設(shè)計(jì)有效疫苗的理想選擇。2012 年，Shylaja等［50］構(gòu)建了一個(gè)包含SEB 的融合蛋白（SEBTSST-1），該融合蛋白可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)SEB的抗體。但該研究并未進(jìn)一步探究該融合蛋白的疫苗保護(hù)作用。隨后，Reddy 等［51］評(píng)估了一個(gè)包含SEA56~177 的融合蛋白（SEA-TSST-1）在小鼠中的保護(hù)作用。將該融合蛋白免疫小鼠后15 d 或120 d 給予小鼠4 倍LD100的毒素，小鼠存活率分別為80%和50%，空白對(duì)照存活率為0%?？梢娫撘呙绮粌H可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)SEA 的中和抗體，還可以使機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)SEA 的免疫記憶。Kota等［52］在Shylaja等和Reddy等的研究基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了一個(gè)包含SEA、SEB 和α 溶血素的嵌合蛋白r-HAB，該融合蛋白可以在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)強(qiáng)抗體反應(yīng)，在致死劑量的毒素攻擊下對(duì)小鼠提供了83%的保護(hù)作用。用抗r-HAB 抗體被動(dòng)給予機(jī)體，在致死劑量毒素攻擊下可以對(duì)小鼠提供大約50%的保護(hù)率。這些疫苗設(shè)計(jì)均保留了SEs發(fā)揮毒性作用的作用位點(diǎn)，在使用的過程中存在一定的生物安全隱患。Venkatasubramaniam 等［53］設(shè)計(jì)了一種由TSST-1、SEB 和SEA 突變體構(gòu)建的毒素融合蛋白——TBA225。首先改造SEA、SEB 和TSST-1 的MHC II 類分子結(jié)合面，分別產(chǎn)生3 個(gè)突變毒素分子：SEAL48R/D70R/Y92A、SEBL45R/Y89A/Y94A 和TSST-1L30R/D27A/I46A。此前有報(bào)道，SEA高親和力MHC結(jié)合位點(diǎn)H225的突變可降低毒素激活T細(xì)胞的能力［38］。因此將H225A 作為額外的安全突變引入到SEA 三重突變體中，產(chǎn)生了SEAL48R/D70R/Y92A/H225A。SEA 突變體編碼基因與SEB、TSST-1 突變體編碼基因融合構(gòu)建了TBA225。該疫苗在小鼠體內(nèi)可同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)SEA、SEB和TSST-1的中和抗體。在致死性毒素聯(lián)合LPS 攻擊實(shí)驗(yàn)中，TBA225免疫對(duì)SEB和TSST-1的保護(hù)率為100%，對(duì)SEA的保護(hù)率為90%。利用TBA225制備的兔多抗對(duì)TSST-1、SEA、SEB、SEC-1、SEH、SEK、SEE、SED都具有一定的中和作用。此外，TBA225誘導(dǎo)的抗體可中和包括USA300在內(nèi)的多個(gè)臨床相關(guān)金黃色葡萄球菌培養(yǎng)上清液對(duì)人類外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC） 的毒性作用。

B細(xì)胞表位疫苗不包含毒素蛋白完整結(jié)構(gòu)，生物安全性高，且易于生產(chǎn)。在Boles 等［46］的研究基礎(chǔ)上，Zhao 等［54］利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）又進(jìn)一步確定了6個(gè)可用于制備B細(xì)胞表位疫苗的免疫優(yōu)勢(shì)線性表位：SEB31~48、SEB97~114、SEB133~150、SEB193~210、SEB205~222 和SEB247~261。將6 個(gè)線性表位分別偶聯(lián)偶聯(lián)鑰孔血藍(lán)蛋白（keyhole limpet hemocyanin，KLH）后免疫小鼠，均在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)出SEB 特異性抗體，并可對(duì)抗甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistantStaphylococcus aureus，MRSA）感染產(chǎn)生部分保護(hù)作用，其中SEB193-210-KLH聯(lián)合弗氏佐劑與其他表位/佐劑組合相比表現(xiàn)出最好的保護(hù)作用（70%）。6個(gè)線性表位串聯(lián)融合蛋白免疫后的小鼠在MRSA攻擊后，表現(xiàn)出比STEBvax［46］（85%或90%）更好的保護(hù)效果（90%或100%）。

4.1.3其他疫苗

SEB主要通過黏膜進(jìn)入宿主，因此與傳統(tǒng)接種途徑疫苗相比，黏膜接種疫苗以及黏膜抗體IgA在SEs 中毒的免疫治療中十分重要。Inskeep 等［55］在Boles 等［46］的研究基礎(chǔ)上，將STEBVax 疫苗口服給予仔豬模型后，仔豬血清IgG和糞便IgA均可識(shí)別SEB。這一現(xiàn)象表明黏膜疫苗不僅能誘導(dǎo)機(jī)體黏膜免疫，還能誘導(dǎo)外周IgG 產(chǎn)生。隨后，Xiong等［56］以枯草芽孢桿菌為載體，構(gòu)建了表達(dá)STEBVax 的疫苗。與空白對(duì)照相比，口服表達(dá)STEBVax 的枯草芽孢桿菌孢子的小鼠糞便中出現(xiàn)SEB 特異性IgA，血清中出現(xiàn)SEB 特異性IgG1 和IgG2a。與空白對(duì)照相比，口服接種該疫苗的小鼠模型存活率提高33.3%。

溶解微針（microneedles，MNs）是微米級(jí)結(jié)構(gòu)體，其針頭搭載的靶標(biāo)分子及構(gòu)成針頭的全部成分均由對(duì)人體無(wú)害的生物分解性物質(zhì)組成，通過完全溶解在使用部位內(nèi)的方式將靶標(biāo)分子輸送到體內(nèi)任何部位。皮膚中存在大量可用于抗原提呈的朗格漢斯細(xì)胞和組織樹突細(xì)胞，因此Liu 等［57］評(píng)估了負(fù)載有STEBvax，由硫酸軟骨素和海藻糖構(gòu)成的MNs 免疫效果。該疫苗不僅延長(zhǎng)了體內(nèi)抗原保留時(shí)間，還誘導(dǎo)出高水平的SEB 特異性抗體反應(yīng)，在致死劑量SEB 攻擊時(shí)可以提供80%的保護(hù)率。這一方法為SEs的疫苗制備提供了新的研究思路。

4.2 被動(dòng)免疫療法在治療金黃色葡萄球菌腸毒素中毒中的應(yīng)用

4.2.1單克隆抗體

近些年來一直有針對(duì)SEs 中和抗體的研究報(bào)道。2010年，Tilahun等［58］制備了一對(duì)識(shí)別不同表位的鼠源SEB 中和抗體63.1.1 和82M.1.2，其與SEA、TSST-1 無(wú)交叉反應(yīng)，這對(duì)抗體以協(xié)同作用抑制SEB 誘導(dǎo)的T 細(xì)胞增殖。2014 年，Xia 等［18］制備了亞納摩爾親和力的抗SEB 鼠源中和抗體3E2，3E2具有阻斷SEB和MHC II類分子相互作用的功能，且3E2與SEA、SEC沒有交叉反應(yīng)。突變分析表明，SEB上的殘基Y46和K71是3E2產(chǎn)生中和作用的關(guān)鍵結(jié)合殘基，其中Y46是3E2區(qū)分SEB和SEA所必需的。Drozdowski等［59］利用電融合方法制備出分泌高親和力SEB MAb 的人源雜交瘤細(xì)胞，產(chǎn)生的HuMAb-154 可以抑制SEB 誘導(dǎo)的人原代淋巴細(xì)胞促炎細(xì)胞因子INF-γ 和INF-α 的分泌。預(yù)防給予抗體HuMAb-154 的小鼠可以抵抗高達(dá)100 μg 的SEB 攻擊，在SEB 攻擊后給予該抗體同樣也可以提高動(dòng)物的存活率。

與甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（methicillinsusceptibleStaphylococcus aureus，MSSA） 菌株M11118 相比，MRSA 菌株SEB 編碼基因第703 位點(diǎn)都發(fā)現(xiàn)一個(gè)額外的堿基，從而導(dǎo)致235、236 和238 位的3 個(gè)氨基酸發(fā)生變化（Y235T、N236T 和Q238K），影響中和性抗體結(jié)合［60］。Varshney等［60］將來源于MSSA的全長(zhǎng)SEB免疫BALB/c小鼠，獲得4 株特異性單克隆抗體（MAbs） ——20B1、14G8、4C7 和6D3。這4 株MAbs 不與SEB 羧基端缺失11 個(gè)氨基酸的SEB 結(jié)合，表明SEB 羧基端存在介導(dǎo)SEB 與這4 株MAb 特異性結(jié)合的B 細(xì)胞表位。其中，20B1、14G8 和6D3 與SEB 有納摩爾的結(jié)合親和力，可以抑制SEB誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖以及人源T 細(xì)胞體外分泌IL-2 和IFN-γ。在BALB/c 小鼠和HLA-DR3小鼠模型（缺失小鼠內(nèi)源性MHC II類分子，表達(dá)HLA-DR3分子以及人源CD4分子）中研究MAb對(duì)SEB誘導(dǎo)的致死性休克（SEB-induced lethal shock，SEBILS）的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)高劑量MAb 20B1 對(duì)兩種小鼠模型的SEBILS 均有高保護(hù)率，MAb 14G8 對(duì)BALB/c 小鼠無(wú)保護(hù)作用，MAb 6D3 對(duì)BALB/c 小鼠僅有部分保護(hù)作用，高劑量MAb 14G8 和Mab 6D3 對(duì)HLA-DR3 小鼠無(wú)保護(hù)作用。而同時(shí)給予一種保護(hù)性和一種非保護(hù)性MAb（20B1+14G8 或20B1+6D3）或同時(shí)給予兩種非保護(hù)性MAb（14G8+6D3）對(duì)HLA-DR3 小鼠也有保護(hù)作用。該團(tuán)隊(duì)利用核磁共振和結(jié)晶學(xué)來研究SEB和MAb 20B1、14G8、6D3之間的相互作用，以確定MAb增強(qiáng)保護(hù)效力的機(jī)制［61］。結(jié)果表明，MAb 20B1和TCR競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合SEB，20B1與SEB的結(jié)合親和力是TCR與SEB結(jié)合親和力的1 000倍，因此阻斷了TCR-SEB-MHC II 類分子三元復(fù)合物的形成。MAb 14G8和6D3與SEB的結(jié)合表位距離TCR和MHC II 類分子表位較遠(yuǎn)，因此保護(hù)作用低。高劑量的MAb 20B1 還可保護(hù)MRSA 來源的SEB 中毒。在MRSA 感染的膿毒血癥模型中，預(yù)先使用MAb 20B1 靜脈注射小鼠，MAb 20B1 可與感染組織中的SEB 結(jié)合，降低促炎細(xì)胞因子水平、淋巴細(xì)胞增殖和中性粒細(xì)胞募集，同時(shí)降低皮膚淺層和深層組織中的細(xì)菌負(fù)荷，提高動(dòng)物存活率［62］。

4.2.2基因工程抗體

Tilahun 團(tuán)隊(duì)［58］將鼠MAb 的輕鏈可變區(qū)（light chain variable region，VL） 和重鏈可變區(qū)（heavy chain variable region，VH）的編碼基因分別移植到編碼人Igκ和IgG1恒定區(qū)的基因上，制備出可適用于人類的人-鼠嵌合抗體Ch 63 和Ch 82 M。在人PBMC 或HLA-DR3 小鼠脾細(xì)胞中進(jìn)行測(cè)試發(fā)現(xiàn)，人鼠嵌合抗體Ch 63 和Ch 82 M 以協(xié)同作用中和SEB。人鼠嵌合抗體Ch 63 和Ch 82 M可以減弱由產(chǎn)SEB的金黃色葡萄球菌引起的全身炎癥反應(yīng)，在金黃色葡萄球菌肺炎模型中可顯著提高小鼠存活率［63］。人鼠嵌合抗體Ch 82 M與具有免疫調(diào)節(jié)活性作用的洛伐他汀聯(lián)用時(shí)，對(duì)小鼠致死性TSS 也產(chǎn)生協(xié)同保護(hù)作用［64］。洛伐他汀或人鼠嵌合抗體Ch 82 M 單獨(dú)作用于HLA-DR3 小鼠時(shí)，對(duì)致死性TSS起到了部分保護(hù)作用（分別為50%、66%），而洛伐他汀與Ch 82 M聯(lián)用時(shí)，保護(hù)率為100%。臨床安全性他汀藥物和低免疫原性嵌合抗體的聯(lián)合使用為人體SEs 中毒治療提供新思路。

Varshney 等［65］將MAb 20B1 的輕重鏈CDR 區(qū)分別嫁接到人源胚系骨架IGKV1-39 和IGHV3-7，制備了兩個(gè)人源化SEB抗體Hu-1.6/1.1和Hu-1.4/1.1。這兩個(gè)人源化抗體對(duì)SEBILS 的治療水平與MAb 20B1 相當(dāng)，經(jīng)Hu-1.4/1.1 或Hu-1.6/1.1 處理后的小鼠存活率為80%，而未處理的小鼠存活率為10%。用小鼠金黃色葡萄球菌敗血癥模型進(jìn)一步探討Hu-1.6/1.1 和Hu-1.4/1.1 的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)與MAb 20B1以及萬(wàn)古霉素相比，Hu-1.6/1.1可顯著提高產(chǎn)SEB MRSA 菌株引起的致命膿毒癥小鼠存活率。Hu-1.6/1.1 治療組小鼠的存活率為90%，而同型對(duì)照單抗治療的小鼠存活率為10%，萬(wàn)古霉素治療的小鼠存活率為40%。此外，Hu-1.6/1.1 與萬(wàn)古霉素聯(lián)合治療進(jìn)一步提高了動(dòng)物存活率并改變了細(xì)胞因子反應(yīng)，Hu-1.6/1.1 或萬(wàn)古霉素單獨(dú)治療小鼠的存活率為40%，Hu-1.6/1.1 和萬(wàn)古霉素聯(lián)用治療小鼠的存活率為90%，這種聯(lián)合療效的提高從IFN-γ、IL-10 等細(xì)胞因子水平上也得到了體現(xiàn)。在深部組織感染模型中，Hu-1.4/1.1 與SEB 結(jié)合后可降低促炎細(xì)胞因子水平，緩解組織膿腫。

噬菌體展示技術(shù)是篩選SEs中和抗體的重要手段。2010 年，Larkin 等［66］利用噬菌體展示技術(shù)，制備出針對(duì)STEBVax 的人源抗原結(jié)合片段（antigen-binding fragment，F(xiàn)ab）以及其全長(zhǎng)IgG，這些人源MAb 可高親和力、特異性地中和毒素，保護(hù)小鼠免受SEBILS。當(dāng)效力較弱的Fab 轉(zhuǎn)化為全長(zhǎng)IgG時(shí)，效價(jià)可以得到明顯提高。Larkin等［66］認(rèn)為可能是Fc 區(qū)域在抗體中和作用中發(fā)揮了較大作用。但MacIntyre 等［67］將Fc 區(qū)域進(jìn)行突變后證明，SEB的中和不需要Fc受體結(jié)合發(fā)揮中和作用。全長(zhǎng)IgG中Fc的存在可能通過增加Fab的構(gòu)象穩(wěn)定性，進(jìn)而提高抗體效價(jià)。2012年，Karauzum等［68］利用基于噬菌體展示技術(shù)篩選出一組高親和力的SEB 人源Fab。將Fab 轉(zhuǎn)化為全長(zhǎng)的IgG-GC121 與SEB有高結(jié)合親和力，與SEA、SEC-1和SED也存在交叉反應(yīng)。IgG-GC121 可以抑制SEB 誘導(dǎo)的人PBMC IFN-γ 的分泌。預(yù)防性使用IgG-GC121 抗體1 h可以保護(hù)SEB對(duì)小鼠的致死性攻擊。研究發(fā)現(xiàn)，IgG-GC121 不與STEBVax 結(jié)合，可推測(cè)該抗體通過阻礙SEB 與MHC II 類分子結(jié)合抑制SEB毒性作用。隨后，該團(tuán)隊(duì)利用同一個(gè)噬菌體文庫(kù)篩選出另一類具有不同結(jié)合表位的SEB 人源中和抗體GC132，可以阻斷SEB 與TCR 的結(jié)合［69］。該抗體與SEB 具有皮納摩爾結(jié)合親和力，體外毒素中和效果與IgG-GC121相當(dāng)，在TSS模型中可以保護(hù)小鼠免受致死攻擊。對(duì)GC132 輕鏈和重鏈CDR 區(qū)采用基于鳥槍同源掃描技術(shù)的基因工程抗體親和力成熟研究，篩選出的GC132a 在以INF-γ 釋放量為SEB毒性的衡量試驗(yàn)中，表現(xiàn)出優(yōu)于親本抗體250倍的效價(jià)。鑒于抗體GC121 和GC132a 分別識(shí)別SEB 的MHC II 類分子結(jié)合和TCR 結(jié)合區(qū)，為了探究這兩個(gè)抗體是否存在協(xié)同效應(yīng)，該團(tuán)隊(duì)將單鏈抗體GC132a融合在IgG-GC121 Fc端，構(gòu)建的雙特異性抗體bsAb-121/132a 也展現(xiàn)了優(yōu)于親本的毒素中和效果，但不能與IgG-GC132a 相媲美。該研究中的雙特異性抗體建立是一種簡(jiǎn)單且可有效提高治療效果的策略，對(duì)于不同抗體之間連接方式的優(yōu)化可能會(huì)產(chǎn)生更好的治療策略。2021 年，Hu 等［70］在人噬菌體抗體庫(kù)中篩選出3 個(gè)抗SEB 人源抗體，LXY8、LXY9 和LXY10，其中LXY8 可有效抑制PBMC 活化和細(xì)胞因子釋放。在體內(nèi)小鼠模型中，LXY8劑量依賴性地提高了BALB/c小鼠的存活率。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，LXY8 與TCR 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合SEB，其中SEB176~179是LXY8結(jié)合地關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)。

此外，還有一些抗體篩選方法制備得到的SEs抗體也具有良好的中和性能。2014年，Sully等［71］將SEB 的人-鼠嵌合抗體19F1 轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌中，制備出具有良好中和能力的植物來源MAb c19F1。Verreault等［72］研究了具有不同結(jié)合表位的IgG-GC121和c19F1在恒河猴氣溶膠SEB中毒模型中的作用。所有實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物均存活，而對(duì)照組動(dòng)物在暴露30~48 h后死亡。2020年，Liu等［73］利用流式篩選出一株人源SEB 抗體M0313，該抗體可以有效抑制SEB誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞和人PBMC細(xì)胞因子IL-2、IL-6、INF-γ和TNF-α的釋放，并且在金黃色葡萄球菌引起的小鼠敗血癥模型中產(chǎn)生了較好的保護(hù)作用。在致死劑量MRSA252 攻擊前24 h 或攻擊后1 h 給予小鼠抗體M0313，可使小鼠分別獲得100%或50%的保護(hù)率（空白對(duì)照死亡率為20%）。注射抗體M0313 的小鼠中有77.8% 在JN064（一株表達(dá)SEA、SEC、SED、SEE 的金黃色葡萄球菌）誘導(dǎo)的敗血癥中存活，33.3%在JN028（一株表達(dá)SEB的金黃色葡萄球菌）誘導(dǎo)的敗血癥中存活（空白對(duì)照死亡率均為10%）。其中，SEB85~102是M0313發(fā)揮關(guān)鍵作用的免疫優(yōu)勢(shì)表位。為了解決抗體治療過程中使用量大的問題，Kroetsch 等［74］在Xia 等［18］研究基礎(chǔ)上，利用酵母展示技術(shù)以及合理設(shè)計(jì)和定向進(jìn)化MAb 3E2，篩選制備出pH 依賴性抗體L2、L6 和L6.R。這些抗體在中性條件下與SEB 結(jié)合親和力高，在酸性條件下與SEB 結(jié)合親和力低，與親本抗體3E2 相比，顯著降低了SEB的循環(huán)半衰期。

5 挑戰(zhàn)與展望

SEs毒性作用主要包括超抗原活性和胃腸道活性，其中超抗原活性引起的細(xì)胞因子紊亂最終導(dǎo)致TSS，胃腸道活性的致病機(jī)制目前尚無(wú)定論［29］。TCR-SEs-MHC II 類分子三元復(fù)合物是SEs 發(fā)揮超抗原活性的必需結(jié)構(gòu)，因此目前針對(duì)SEs中毒的免疫治療性研究大多圍繞該三元復(fù)合物的形成和破壞。研究表明，主動(dòng)免疫療法所使用的疫苗可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)可能的中毒產(chǎn)生較強(qiáng)的抵抗反應(yīng)；被動(dòng)免疫療法所使用的抗體特異性強(qiáng)、體內(nèi)穩(wěn)定性高，可快速中和體內(nèi)已有的毒素蛋白。這些研究表明，免疫治療策略在SEs中毒臨床治療中可發(fā)揮巨大潛力。然而盡管早在20 世紀(jì)80 年代就已經(jīng)有SEs中毒的免疫治療策略，但是迄今為止仍然沒有相關(guān)疫苗和抗體獲得審批。由Chen 等［47］研發(fā)的SEB疫苗STEBVax是唯一進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的SEs候選疫苗，于2015年完成臨床I期試驗(yàn)。目前尚無(wú)SEs中和抗體進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

限制免疫治療策略發(fā)展的因素有以下幾點(diǎn)。a. 在主動(dòng)免疫療法中，疫苗主要包括傳統(tǒng)的滅活疫苗、減毒活疫苗疫苗，以及基因工程亞單位疫苗、重組載體疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗。已報(bào)道的SEs疫苗主要是圍繞制備超抗原活性缺失、但仍保留關(guān)鍵作用位點(diǎn)免疫原性的減毒疫苗和基因工程亞單位疫苗。這些疫苗在動(dòng)物體內(nèi)都能誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生，但同時(shí)也能誘導(dǎo)非中和抗體產(chǎn)生。疫苗研究過程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過免疫的機(jī)體再次遇到抗原時(shí)，非中和抗體與中和抗體和抗原的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合可能削弱疫苗的保護(hù)作用［76］。此外，一種成功的疫苗從研究階段到臨床應(yīng)用階段面臨大量的挑戰(zhàn)，包括抗原和佐劑對(duì)于人體的安全性威脅，疫苗設(shè)計(jì)和生產(chǎn)過程中的高成本需求，疫苗生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存過程中的穩(wěn)定性要求等［77］。b. 在被動(dòng)免疫療法中，盡管SEs發(fā)揮毒性作用的位點(diǎn)已基本清晰，但高效精準(zhǔn)制備針對(duì)這些位點(diǎn)的特異性中和抗體仍然十分困難。目前SEs中和抗體的制備技術(shù)主要包括傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)和噬菌體展示技術(shù)。雜交瘤技術(shù)融合、篩選效率低，且獲得的鼠源MAbs在人體內(nèi)易被免疫系統(tǒng)識(shí)別并清除，因而制備的MAb 需要額外復(fù)雜的人源化改造［78］。噬菌體展示技術(shù)中的原核表達(dá)經(jīng)常造成抗體蛋白難以正確折疊且輕重鏈隨機(jī)配對(duì)，篩選到的抗體通常親和力不高，往往還需體外進(jìn)化［79］。此外，已報(bào)道的SEs中和抗體均是通過盲篩制備，難以得到針對(duì)毒素關(guān)鍵毒性作用位點(diǎn)的高親和力中和抗體。

針對(duì)上述制約因素，可從以下3個(gè)方面尋找突破。a. 合成肽疫苗是將抗原中已知的或經(jīng)預(yù)測(cè)得到的表位氨基酸序列，通過化學(xué)合成技術(shù)制備的疫苗，其安全性高、制備方式簡(jiǎn)單［80］。利用已報(bào)道的TCR-SEs-MHC II 類分子三元復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)或計(jì)算機(jī)表位預(yù)測(cè)技術(shù)篩選三元復(fù)合物相互作用時(shí)發(fā)揮關(guān)鍵作用的SEs表位氨基酸序列，有望構(gòu)建僅誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生的SEs 合成肽疫苗。SEs 的關(guān)鍵毒性作用位點(diǎn)表位氨基酸合成肽在被動(dòng)免疫療法抗體制備過程中也可用于篩選特異性SEs 中和抗體。b. 單B細(xì)胞抗體制備技術(shù)保留了重鏈和輕鏈可變區(qū)的天然配對(duì)，不僅充分保留B細(xì)胞多樣性，且具有效率高、時(shí)間短的特點(diǎn)，有望篩選出全新的鼠源或人源SEs 中和抗體［79］。c. 傳統(tǒng)抗體是異源四聚體，穩(wěn)定性和異源性高。納米抗體是在駱駝科及鯊魚科動(dòng)物血清中大量存在的一種天然輕鏈缺失的抗體，其免疫原性低、人源化簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高、親和力高且可識(shí)別隱藏抗原表位，在毒素中和過程中有很大的潛在應(yīng)用價(jià)值［81］。

SEB作為一種恐怖戰(zhàn)劑通常為氣霧狀，被人體吸入后造成多器官損傷，嚴(yán)重者可導(dǎo)致休克或死亡［25-26］，因此口鼻接種疫苗以及黏膜抗體IgA 在SEs中毒的免疫治療中十分重要。然而目前為止關(guān)于黏膜免疫接種途徑SEs疫苗及IgA類中和抗體研究較少，預(yù)防及治療呼吸道感染SEs 的效果有限。SEs的黏膜免疫研究在消除公共衛(wèi)生安全威脅上有很大前景。