劉 玥 梁 珍 趙 坤 李林輝

（西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院“西南野生動植物資源保護(hù)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗室，四川南充 637000）

羊肚菌Morchellaspp.，屬子囊菌，菌蓋表面呈蜂窩狀，因具有極高的食藥用價值而深受消費(fèi)者喜愛。野生羊肚菌資源有限，因此，人工栽培的羊肚菌將成為市場供應(yīng)主力[1-3]。相較于平菇、木耳、香菇等食用菌，羊肚菌菌株退化速度更快，同時菌株的性狀直接影響羊肚菌的產(chǎn)量[4]。因此，不斷篩選優(yōu)勢羊肚菌菌株以獲得較好的栽培效益具有現(xiàn)實(shí)意義。

筆者比較六妹羊肚菌原始母種、子囊孢子單孢菌株及其組織分離菌株的菌絲培養(yǎng)性狀、產(chǎn)量，以期篩選出優(yōu)良的羊肚菌栽培菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）羊肚菌菌株：六妹羊肚菌原母種F1，由南充世順農(nóng)業(yè)有限公司提供。

以六妹羊肚菌母種F1為出發(fā)菌株栽培羊肚菌，選取一健壯子囊果，通過單孢分離技術(shù)獲得子囊孢子單胞菌株Fa2、Fa67；栽培Fa2、Fa67獲得健壯子囊果，組織分離獲得菌株Ft2、Ft67。

（2）供試培養(yǎng)基

PDA 培養(yǎng)基：土豆200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g，蒸餾水1 000 mL?；A(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，硝酸鉀2 g，硫酸鎂0.5 g，磷酸二氫鉀0.5 g，氯化鈉0.5 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1 000 mL，pH7.0。

碳源試驗培養(yǎng)基：分別以等量的蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖，其他成分不變。

氮源試驗培養(yǎng)基：分別以等量的尿素、蛋白胨、硫酸銨、硝酸銨代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的硝酸鉀，其他成分不變。

1.2 試驗方法

1.2.1 供試菌株菌絲培養(yǎng)基適宜碳氮源試驗

制備表面覆蓋無菌賽璐玢膜的PDA 平板，將供試羊肚菌菌株分別接種于平板中央，20 ℃培養(yǎng)5 d后，于無菌環(huán)境下將覆滿菌絲體的賽璐玢膜剪成直徑約5 mm 的圓片。將供試菌株膜片分別接種在鋪有無菌賽璐玢膜的含不同碳氮源培養(yǎng)基平板中心，每個菌株3次重復(fù)。

20 ℃培養(yǎng)菌絲，每24 h測1次菌落直徑，并計算菌絲生長速度，菌絲生長速度=（菌落直徑-菌塊直徑）/培養(yǎng)時間。結(jié)束培養(yǎng)后從賽璐玢膜上刮取所有菌絲，于55 ℃烘干至恒重后，稱量記錄菌絲生物量。

1.2.2 供試菌株菌核產(chǎn)生能力比較

將供試羊肚菌菌株分別接種在PDA 培養(yǎng)基上，每個菌株3 次重復(fù)，于20 ℃恒溫培養(yǎng)。待菌核產(chǎn)生且變黃時結(jié)束培養(yǎng)，收集氣生菌核，于55 ℃烘干至恒重后稱量并記錄，基面菌核采用Photoshop CS 計算其面積。

1.2.3 供試菌株產(chǎn)量比較

試驗地位于四川省廣安市武勝縣禮安鎮(zhèn)觀音壩村，海拔約249.2 m，土壤為沙質(zhì)土，土壤疏松透氣。

播種前清除地面雜草、亂石，撒生石灰消毒。采用廂式栽培方式，廂長10 m、寬1 m，溝寬0.3 m，深0.2 m。播種時按照300 g/m2用種量將菌種均勻撒播在廂面，并覆蓋細(xì)土。播種后的管理參照文獻(xiàn)[5]。待子囊果顏色變?yōu)樽睾谏纯刹墒?，記錄鮮菇產(chǎn)量。

供試羊肚菌菌株各栽培3 個小區(qū)，每小區(qū)10 m2。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2019 處理試驗數(shù)據(jù)，通過Spss 26.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，采用Origin 2023 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試菌株菌絲培養(yǎng)基碳源試驗結(jié)果

由表1可知，含不同碳源培養(yǎng)基中，羊肚菌子囊孢子單胞菌株（Fa）和母本菌株（F1）的菌絲長速（日均生長速度，下同）均占優(yōu)勢。子囊孢子單胞菌株菌絲生物量優(yōu)于母本菌株，但組織分離菌株（Ft）菌絲生物量少于母本菌株。在以葡萄糖為碳源培養(yǎng)基上，子囊孢子單胞菌株及母本菌株菌絲生物量多于另外三種碳源培養(yǎng)基?？梢娖咸烟菫楣┰嚲昃z培養(yǎng)基最適碳源，且母本F1 菌株、子囊孢子單胞菌株Fa菌絲生長優(yōu)勢更明顯（圖1）。

表1 供試菌株在不同碳源培養(yǎng)基中的菌絲長速

圖1 供試菌株在不同碳源培養(yǎng)基中的菌絲生物量

2.2 供試菌株菌絲培養(yǎng)基氮源試驗結(jié)果

在以尿素為氮源的培養(yǎng)基中，供試羊肚菌菌株菌絲生物量及生長速度明顯慢于其他氮源培養(yǎng)基，說明羊肚菌菌絲對尿素利用差。相反，在蛋白胨為氮源培養(yǎng)基中供試菌株的菌絲生物量及生長速度較其他氮源培養(yǎng)基中更高、快，表明蛋白胨可作為羊肚菌菌絲擴(kuò)繁培養(yǎng)基的氮源。以硝酸鉀為氮源的培養(yǎng)基中供試菌株生物量均差異顯著，說明以硝酸鉀為氮源培養(yǎng)基可以作為菌絲生長優(yōu)勢菌株的培養(yǎng)基。綜合表2、圖2 結(jié)果，母本F1 與兩子囊孢子單胞菌株（Fa2、Fa67）在供試氮源培養(yǎng)基中菌絲生物量較高、菌絲生長較快，為優(yōu)良菌株。

表2 供試菌株在不同氮源培養(yǎng)基中的菌絲長速

圖2 不同氮源培養(yǎng)基中供試菌株菌絲生物量

2.3 供試菌株產(chǎn)菌核能力

羊肚菌菌株生產(chǎn)性能一定程度上與其產(chǎn)菌核能力相關(guān)，產(chǎn)菌核越多的菌株一般越容易獲得較多子實(shí)體[6]。試驗結(jié)果，供試菌株Ft2、Ft67 只產(chǎn)生氣生菌核，而其他菌株除氣生菌核外還會產(chǎn)生大量基面菌核（圖3）。由表3可知，子囊孢子單胞菌株菌核數(shù)較多，其中Fa2菌核最多，F(xiàn)t2最少。由此，可初步判斷菌核數(shù)較多的子囊孢子單孢菌株Fa2、Fa67 為優(yōu)良菌株。

表3 供試菌株產(chǎn)菌核情況

圖3 供試羊肚菌菌株產(chǎn)生的菌核

2.4 供試菌株產(chǎn)量比較

供試羊肚菌菌株播種兩個月后開始陸續(xù)出菇，由圖4 可知，菌株Fa2 產(chǎn)量最高，較適宜于人工栽培；相反，菌株Ft2 產(chǎn)量最低，不宜作為栽培菌株。出菇場景見圖5。

圖4 供試羊肚菌菌株產(chǎn)量比較

圖5 試驗羊肚菌出菇場景

3 小結(jié)與討論

食用菌優(yōu)良菌株隨著傳代次數(shù)的增加，其性狀的退化是必然的[5-7]，因此篩選優(yōu)勢菌株維持種性穩(wěn)定是一項永恒的工作。試驗比較羊肚菌親本菌株、子囊孢子單孢菌株、組織分離菌株的產(chǎn)量、碳氮源利用、產(chǎn)菌核能力。結(jié)果表明，子囊孢子單孢菌株的生產(chǎn)特性不僅遠(yuǎn)優(yōu)于組織分離菌株，比親本菌株也略勝一籌，這說明子囊孢子單孢菌株適宜作為優(yōu)勢菌株人工栽培及保種。

試驗表明，從子囊孢子中篩選羊肚菌優(yōu)良菌株是可行的，而組織分離因為每個組織中存在潛在的遺傳差異，這些差異在繼代培養(yǎng)及制備菌種時會被擴(kuò)大，因此應(yīng)用組織分離的菌株風(fēng)險較大。

試驗只是以六妹系列菌株為研究對象，其他系列羊肚菌菌株是否能獲得同樣效果，有待驗證，另外今后還需要從羊肚菌發(fā)育的機(jī)理上進(jìn)一步尋找菌株退化的原因。