玄玉瑩，丁玉林，王金玲

內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018

0 引言

牛支原體性肺炎和關(guān)節(jié)炎是危害牛養(yǎng)殖業(yè)的一類(lèi)重要疾病[1]，牛支原體是主要侵害3月齡至1周歲的牛[2]。臨床表現(xiàn)分為急性型和慢性型，慢性病例癥狀不明顯，體溫稍有升高，采食正常，眼和鼻腔有輕度的黏液性或膿性的分泌物排出，急性型開(kāi)始只是個(gè)別牛出現(xiàn)癥狀，24～48 h發(fā)病牛增加，發(fā)病牛會(huì)出現(xiàn)劇烈的咳嗽、關(guān)節(jié)腫大等癥狀[3，4]。常規(guī)的抗生素治療對(duì)于支原體性感染效果比較差，且有研究顯示，支原體可大大促進(jìn)其他病原微生物的繼發(fā)感染， 進(jìn)而造成大量死亡，給養(yǎng)殖企業(yè)造成損失[5]。

1 臨床病史

某牛場(chǎng)共養(yǎng)殖荷斯坦牛1 200 頭左右，犢牛200 頭左右。犢牛于出生4～7 天開(kāi)始發(fā)病，發(fā)病犢牛腕關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié)明顯腫大，有的犢牛出現(xiàn)一側(cè)頸部腫大，站立不穩(wěn)，后期出現(xiàn)呼吸困難癥狀。2月開(kāi)始偶然發(fā)病，4月時(shí)發(fā)病牛數(shù)量明顯增多，已死亡8 頭犢牛。病程1 周～2 個(gè)月不等。

2 剖檢病變

發(fā)病牛消瘦，胸部皮下水腫，四肢腕關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié)明顯腫大（圖1），切開(kāi)可見(jiàn)大量淡黃色半透明的關(guān)節(jié)液，關(guān)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)大量的纖維素性滲出物（圖2），關(guān)節(jié)周?chē)∪饨M織內(nèi)可見(jiàn)壞死灶（圖3），并與皮膚粘連。肋骨與椎骨關(guān)節(jié)也見(jiàn)膿腫。頸胸部淋巴結(jié)腫大明顯，較濕潤(rùn)，呈灰黃色。肝腫大。支氣管性大葉性間質(zhì)性肺炎，肺臟心葉和副葉完全實(shí)變，呈深紅色肌肉樣（圖4）。心內(nèi)膜下散在小出血斑點(diǎn)。腎臟輕度腫大，表面偶見(jiàn)小出血點(diǎn)。其它組織眼觀無(wú)明顯病變。

圖2 漿液纖維素性關(guān)節(jié)炎

圖3 跗關(guān)節(jié)周?chē)鷫乃涝?/p>

圖4 間質(zhì)性肺炎

3 組織病理學(xué)

慢性增生性間質(zhì)性肺炎，肺間質(zhì)增寬，特別是各級(jí)細(xì)支氣管和血周?chē)馨图?xì)胞增生明顯，形成血管周?chē)缀图?xì)支氣管周?chē)祝▓D5）；肺泡間質(zhì)增寬，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞增生，肺泡腔內(nèi)大量紅細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞滲出和浸潤(rùn)，部分巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)吞噬若干紅細(xì)胞和變質(zhì)的中性粒細(xì)胞（圖6）。淋巴結(jié)皮質(zhì)淋巴小節(jié)和副皮質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞增生明顯，髓質(zhì)淋巴竇內(nèi)有巨噬細(xì)胞增生，中性粒細(xì)胞也增多。肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞呈急性變性。骨骼肌內(nèi)化膿灶中內(nèi)為壞死組織，周?chē)罅渴戎行粤＜?xì)胞滲出和浸潤(rùn)，有的壞死灶周?chē)研纬擅黠@的肉芽腫和包囊。

圖5 慢性增生性間質(zhì)性肺炎，血管周?chē)?/p>

圖6 間質(zhì)性肺炎，肺泡間隔增寬，肺泡腔內(nèi)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)

4 病原學(xué)的分離和培養(yǎng)

取犢牛關(guān)節(jié)液分別接種普通固體瓊脂培養(yǎng)基和支原體培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)72 h后，普通固體瓊脂培養(yǎng)基上無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，支原體培養(yǎng)基上可觀察到透明細(xì)小的菌落，顯微鏡下菌落呈“油煎蛋”樣（圖7）。取支原體培養(yǎng)基內(nèi)菌落制備涂片，采用姬姆薩染色法進(jìn)行染色和觀察，可見(jiàn)大小不等的多形態(tài)的藍(lán)染支原體（圖8）。

圖7 油煎蛋樣的支原體菌落

圖8 多形態(tài)的藍(lán)染支原體

5 PCR擴(kuò)增和測(cè)序

提取肺組織和關(guān)節(jié)液內(nèi)的基因組，用支原體通用引物擴(kuò)增，肺組織和關(guān)節(jié)液內(nèi)均擴(kuò)增出1500 bp左右目的條帶，經(jīng)測(cè)序后，在Genbank中比對(duì)，肺臟和關(guān)節(jié)液內(nèi)擴(kuò)增出的基因核苷酸序列同源性為100%，均與湖北牛支原體參考株親緣關(guān)系最近，同源率在99%以上。

6 診斷

本研究通過(guò)臨床病史、尸體剖檢、涂片和觸片檢查，以及組織病理學(xué)方法綜合確診了1例荷斯坦?fàn)倥Ｖгw性肺炎和關(guān)節(jié)炎。

7 討論

感染支原體性肺炎和關(guān)節(jié)炎的病牛初期表現(xiàn)出食欲不振、有鼻液、運(yùn)動(dòng)后會(huì)出現(xiàn)干咳，后期出現(xiàn)呼吸困難、血便、關(guān)節(jié)炎和結(jié)膜炎等癥狀[6]。本文中的病例出現(xiàn)了關(guān)節(jié)腫大和呼吸困難的癥狀，與資料中描述一致。

支原體性肺炎的典型的病理剖檢變化是肺臟的壞死灶和大理石樣變，嚴(yán)重者會(huì)與胸腔粘連，出現(xiàn)漿液性纖維素性肺炎，也有肝臟腫大、心包積液的病理變化[6，7]。出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥狀的病牛，關(guān)節(jié)腔內(nèi)的關(guān)節(jié)液黏稠且量多，關(guān)節(jié)腔內(nèi)充滿了黏稠性、半透明而混濁的關(guān)節(jié)液[8，9]。本次剖檢的犢牛出現(xiàn)同樣的病變，但是關(guān)節(jié)炎癥狀更明顯，腫脹部位的皮膚與皮下已經(jīng)發(fā)生粘連且關(guān)節(jié)腔內(nèi)有膿性滲出物。

組織病理學(xué)表現(xiàn)為肺間質(zhì)增寬，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增生，肺泡壁明顯增厚，肺臟內(nèi)以大量中性粒細(xì)胞滲出浸潤(rùn)為主，也有巨噬細(xì)胞和壞死的上皮細(xì)胞。腎臟和心臟出現(xiàn)顆粒變性，淋巴竇內(nèi)巨噬細(xì)胞增生，淋巴結(jié)小梁水腫[3]。本病例出現(xiàn)的肺泡間質(zhì)增生，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增生，肺泡中的嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)以及腎臟和心肌的變性都與文獻(xiàn)中描述的變化相似。

支原體的大小為0.1～0.3 μm，無(wú)細(xì)胞壁，不能維持固定的形態(tài)而呈現(xiàn)多形性，在固體培養(yǎng)基表面呈特有的“油煎蛋”狀，本次用關(guān)節(jié)液培養(yǎng)出的菌落在顯微鏡下呈現(xiàn)出典型的“油煎蛋”樣，與資料中描述一致。PCR擴(kuò)增測(cè)序結(jié)果也顯示與支原體的同源性最高達(dá)99%以上。

“早診斷、早治療”能有效控制該病，藥物治療以抗菌消炎為主，在治療中應(yīng)注意觀察全身癥狀，根據(jù)病情的變化合理調(diào)整藥物對(duì)癥治療[10]。但是牛支原體引起的疾病對(duì)任何化學(xué)療法都有抵抗力，有時(shí)正確使用抗生素以減少繼發(fā)性細(xì)菌感染，但常常不能有效地治療支原體感染。注意牛舍場(chǎng)地和用具的清潔衛(wèi)生，是防止本病發(fā)生的基本措施[8]，通過(guò)加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，及時(shí)接種疫苗以及對(duì)外來(lái)的引入牛做好防疫來(lái)預(yù)防此病的發(fā)生[11]。