◎ 閆小娟，張海悅，張瑞博，許家豪，楊 雪

（1.吉林省富生食品有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130000；2.長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130000；3.吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，吉林 長(zhǎng)春 130000）

《黃帝內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為脾胃乃后天之本，養(yǎng)生當(dāng)先健脾胃[1]。歸脾湯出自南宋御醫(yī)嚴(yán)用和的名著《濟(jì)生方》，由9味藥組成，即人參、黃芪、白術(shù)、甘草、大棗、龍眼肉、茯苓、酸棗仁、木香，這些藥組合成方，心脾兼顧，氣血雙補(bǔ)。

根據(jù)傳統(tǒng)黃帝內(nèi)經(jīng)中醫(yī)理論和本方組方原則，與專(zhuān)業(yè)工程師反復(fù)試驗(yàn)，最終嚴(yán)選了益智仁、黃精、芡實(shí)、山藥和茯苓等15味中藥，組成黃精益智仁復(fù)方固體飲料，具有補(bǔ)氣健脾、養(yǎng)血安神、益肝明目之效，且所有原材料均屬于藥食同源類(lèi)品目，無(wú)任何毒副作用。本方以黃精為君藥，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎功能，用于治療體倦乏力、脾胃虛弱、肺虛燥咳、精血不足和內(nèi)熱消渴等?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載“黃精主補(bǔ)中益氣、除風(fēng)濕、安五臟，久服輕身，延年不饑”?！侗静莘暝础贩Q(chēng)“黃精寬中益氣，使五臟調(diào)和，肌肉充盛，骨髓強(qiáng)堅(jiān)”?，F(xiàn)代研究證明黃精具有抗缺氧、抗疲勞、抗衰老等作用，能提高和改善記憶力，增強(qiáng)免疫功能和新陳代謝，其主要成分為黃精多糖、甾體皂苷、強(qiáng)心苷、維生素和多種人體有用氨基酸類(lèi)化合物[2-4]?！镀嫘Я挤健酚涊d黃精與枸杞配伍能補(bǔ)精益氣。

學(xué)生平時(shí)學(xué)習(xí)緊張，考試時(shí)抓緊最后的沖刺機(jī)會(huì)，用腦比平時(shí)更多，補(bǔ)腦尤為關(guān)鍵。益智仁是一味補(bǔ)腦的藥食同源類(lèi)物質(zhì)，本方以益智仁為臣藥。益智仁是我國(guó)南方四大名藥之一，具有益智安神、暖腎固精、溫脾開(kāi)胃的功效。中醫(yī)認(rèn)為益智仁溫而不熱，暖而不燥，補(bǔ)而不峻，澀而不瀉，有緩和滋補(bǔ)之性，很適合腦力消耗大、腦營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)不足、學(xué)習(xí)時(shí)間長(zhǎng)、學(xué)習(xí)壓力大和精神緊張過(guò)度導(dǎo)致的頭昏腦漲、記憶力減退、失眠健忘者服用。益智仁藥用價(jià)值極高，主要成分為益智仁酮、維生素B、維生素C、維生素E、多種氨基酸和脂肪酸等。益智仁之所以能益智，是因?yàn)槠浜写罅康摹奥斆饕蜃印?，即牛磺酸，?duì)處于生長(zhǎng)發(fā)育期的青少年以及記憶減退的中老年人有重要作用。益智仁所含的膽堿、酪氨酸、二十二碳六烯酸等營(yíng)養(yǎng)成分是增加神經(jīng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)的物質(zhì)，具有改善睡眠、調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌、益智安神的功效[5-7]。

本方配以芡實(shí)、山藥、茯苓、紅棗、陳皮、枸杞子、桑葚、雞內(nèi)金、山楂、火麻仁、黑芝麻、烏梅和甘草共為佐使，共湊健脾益氣、養(yǎng)心安神、養(yǎng)肝明目之效[8-13]。本方中西結(jié)合，吸收現(xiàn)代科研成果，添加了益生原（低聚果糖）和抗性糊精（膳食纖維）?，F(xiàn)代研究證實(shí)低聚果糖能促進(jìn)食欲、調(diào)節(jié)胃腸道功能；抗性糊精可以提高營(yíng)養(yǎng)素的利用率，促進(jìn)對(duì)鈣、鐵、鋅等微量元素的吸收。本研究以小鼠為模型，探究以黃精、益智仁為主的復(fù)方固體飲料的健脾作用，為藥食同源的健脾益氣產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性昆明小鼠80只，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為110324210106489574，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2019-0010，購(gòu)于斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司。小鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，自由飲水進(jìn)食，隨機(jī)分組后適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，溫度為20～26 ℃，相對(duì)濕度為40%～70%。動(dòng)物維持飼料，生產(chǎn)許可證號(hào)為蘇飼證（2019）01008，飼料合格證號(hào)為120211020048，購(gòu)于江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司。

1.2 材料與試劑

富生紫福臨黃精益智仁固體飲料（吉林省富生特醫(yī)食品公司）；0.9%氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司）；番瀉葉（吉林大藥房）；磷酸緩沖溶液（西隴科學(xué)股份有限公司）。番瀉葉水提液：沸水浸提1 h，2次，濃度濃縮至1.0 g·mL-1，冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 建造小鼠模型

造模前、后均于每天早晨固定時(shí)間觀察小鼠皮膚、毛發(fā)、行為、大便、脫肛狀態(tài)，并進(jìn)行記錄。參考劉汶等[14]的方法造模，空白組正常飼養(yǎng)，其余各組每只小鼠灌胃1.5 mL番瀉葉水提液（1.0 g·mL-1），每日2次，持續(xù)27 d。

參考《中醫(yī)脾虛證動(dòng)物模型的造型》[15]，本實(shí)驗(yàn)脾虛動(dòng)物模型標(biāo)準(zhǔn)為出現(xiàn)泄瀉嚴(yán)重，甚至脫肛，泄瀉食少、體重減輕、消瘦、神志萎靡、四肢不收、毛色枯槁、蜷縮聚堆、易疲勞等癥狀，即可認(rèn)為脾虛造模成功。選取造模成功的小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。造模期間所有動(dòng)物均正常飼養(yǎng)，為防止動(dòng)物模型因腹瀉出現(xiàn)過(guò)度脫水、電解質(zhì)紊亂的現(xiàn)象，在造模第3天喂口服補(bǔ)液鹽稀釋液，不喂水。

1.3.2 給藥方法及給藥量

設(shè)2 g·（kg bw）-1、4 g·（kg bw）-1、6 g·（kg bw）-1共3個(gè)劑量組，分別相當(dāng)于人體推薦用量的10、20、30倍。設(shè)1個(gè)模型對(duì)照組（純水），1個(gè)空白對(duì)照組，每組10只動(dòng)物。分別稱(chēng)取4 g、8 g、12 g樣品，加純水至40 mL，混合均勻備用。灌胃體積每日按20 mL·（kg bw）-1，生理鹽水作為陰性對(duì)照組，空白組采用常規(guī)飼養(yǎng)。各實(shí)驗(yàn)組每天9:00，19:00分別給予受試樣品，每日2次，共10 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 稱(chēng)重

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，稱(chēng)量每組小鼠體重并記錄。

1.4.2 小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的測(cè)定

稱(chēng)重完成后，剖開(kāi)小鼠胸腹取脾臟及胸腺，磷酸緩沖液沖洗并去除多余組織，用濾紙輕輕吸干脾臟及胸腺表面多余的液體，再分別稱(chēng)量脾臟和胸腺的重量。按照公式（1）計(jì)算小鼠脾臟和胸腺臟器指數(shù)，計(jì)算公式為

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并用（）表示，組間差異采用單因素方差分析，P＜0.05表示為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠一般行為觀察

適應(yīng)性飼養(yǎng)后，各組小鼠皮膚、毛發(fā)光滑，精神活躍，糞便呈黑色顆粒樣成形便。空白組小鼠飲食正常，小鼠皮膚、毛發(fā)光滑，糞便呈黑色顆粒樣成形便，體重增長(zhǎng)，精神活躍。造模第7天，小鼠毛發(fā)順整，未有異常行為；造模第11天，小鼠皮膚毛發(fā)枯槁，神志萎靡，活動(dòng)減少，部分小鼠泄瀉，大便不成形，未見(jiàn)脫肛；造模第17天，小鼠毛色枯槁，神志萎靡，扎堆，部分小鼠泄瀉嚴(yán)重，出現(xiàn)脫肛現(xiàn)象；造模第26天，70%以上小鼠出現(xiàn)脫肛，體重減輕，飲食減少，蜷縮聚堆，精神萎靡不振。造模成功，隨即開(kāi)始給藥治療。陰性組不給予藥物治療，脾虛泄瀉自然恢復(fù)，毛發(fā)逐漸恢復(fù)，體重逐漸上升，飲食少量增加，但很少動(dòng)，神志不佳，仍有扎堆現(xiàn)象；低、中、高劑量組分別給予不同濃度的富生紫福臨黃精益智仁固體飲料治療。

2.2 各組小鼠體重變化比較

空白組與陰性對(duì)照組前后體重增長(zhǎng)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明脾虛泄瀉型小鼠造模成功。與陰性對(duì)照組相比，富生紫福臨黃精益智仁固體飲料低、中、高劑量組小鼠給藥前后體重增長(zhǎng)率分別增加了1.85%、5.68%、12.49%，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。高劑量組小鼠的體重恢復(fù)最好，說(shuō)明富生紫福臨黃精益智仁固體飲料對(duì)治療脾虛泄瀉有效，詳見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠體重變化對(duì)比表（）

表1 各組小鼠體重變化對(duì)比表（）

組別數(shù)量/只體重/g給藥前后體重增長(zhǎng)率/%適應(yīng)性飼養(yǎng)后造模后治療后空白組1030.74±1.4339.07±2.6140.97±2.584.86±2.86陰性對(duì)照組1031.61±2.1135.70±2.8633.39±4.49-6.47±8.02低劑量組1031.39±2.0433.47±1.1434.09±2.431.85±7.38中劑量組1031.87±2.2335.90±2.6237.94±3.305.68±5.18高劑量組1032.22±2.2833.86±3.4138.09±3.5412.49±6.18

2.3 各組小鼠脾臟指數(shù)比較

空白組與陰性對(duì)照組脾臟指數(shù)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明脾虛泄瀉小鼠造模成功。與陰性對(duì)照組相比，富生紫福臨黃精益智仁固體飲料低、中、高劑量組小鼠給藥前后小鼠的脾臟指數(shù)增加，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。高劑量富生紫福臨黃精益智仁固體飲料灌胃脾虛泄瀉型小鼠時(shí)，小鼠的脾臟恢復(fù)最好，與沒(méi)有生病的小鼠脾臟重量最接近，說(shuō)明富生紫福臨黃精益智仁固體飲料對(duì)治療脾虛泄瀉有效，詳見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠給藥后脾臟指數(shù)對(duì)比表（）

表2 各組小鼠給藥后脾臟指數(shù)對(duì)比表（）

脾臟指數(shù)/（mg·g-1）空白組10128.83±16.253.14±0.36陰性對(duì)照組1061.02±15.321.82±0.24低劑量組1088.26±16.562.59±0.23中劑量組1091.84±19.652.42±0.31高劑量組10112.72±12.753.03±0.36組別數(shù)量/只脾臟重/mg

2.4 各組小鼠胸腺指數(shù)比較

空白組與陰性對(duì)照組胸腺指數(shù)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明脾虛泄瀉小鼠造模成功。與陰性對(duì)照組相比，富生紫福臨黃精益智仁固體飲料低、中、高劑量組小鼠給藥前后小鼠的胸腺指數(shù)增加，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。高劑量富生紫福臨黃精益智仁固體飲料灌胃脾虛泄瀉型小鼠時(shí)，小鼠的胸腺恢復(fù)最好，與沒(méi)有生病的小鼠胸腺重量最接近，說(shuō)明富生紫福臨黃精益智仁固體飲料對(duì)治療脾虛泄瀉有效，詳見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠給藥后胸腺指數(shù)對(duì)比表（）

表3 各組小鼠給藥后胸腺指數(shù)對(duì)比表（）

胸腺指數(shù)/（mg·g-1）空白組10122.15±21.022.98±0.52陰性對(duì)照組1059.98±15.871.74±0.38低劑量組1069.96±19.481.91±0.54中劑量組1075.09±17.911.78±0.29高劑量組10101.12±12.242.74±0.41組別數(shù)量/只胸腺重/mg

3 結(jié)論與討論

小鼠體重增長(zhǎng)率可以反映小鼠的體重增長(zhǎng)情況。免疫器官分為中樞免疫器官和外周免疫器官，中樞免疫器官有骨髓、胸腺，是免疫細(xì)胞發(fā)生、分化、發(fā)育、和成熟的場(chǎng)所。外周免疫器官有淋巴結(jié)、脾、黏膜相關(guān)淋巴組織，是成熟T細(xì)胞和B細(xì)胞定居的場(chǎng)所及產(chǎn)生免疫應(yīng)答的部位。脾臟指數(shù)可以反映小鼠的外周免疫器官在形態(tài)學(xué)上的改變；胸腺指數(shù)可以反映小鼠的中樞免疫器官在形態(tài)學(xué)上的改變。結(jié)果表明，與空白組小鼠相比，陰性對(duì)照組小鼠的體重增長(zhǎng)率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)3項(xiàng)指標(biāo)均低于空白組小鼠，說(shuō)明脾虛泄瀉型小鼠僅依靠自愈能力，不可能恢復(fù)到原狀。與陰性對(duì)照組小鼠相比，富生紫福臨黃精益智仁固體飲料低、中、高劑量組小鼠的體重增長(zhǎng)率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)3項(xiàng)指標(biāo)均增加，說(shuō)明在一定的自愈能力的基礎(chǔ)上，富生紫福臨黃精益智仁固體飲料能夠促進(jìn)脾虛泄瀉小鼠體重增長(zhǎng)，有利于外周免疫器官和中樞免疫器官恢復(fù)正常。