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        火龍果潰瘍病研究進(jìn)展

        2023-08-05 19:53:05姚姿婷賢小勇李瑞芳等
        植物保護(hù) 2023年4期

        姚姿婷 賢小勇 李瑞芳等

        關(guān)鍵詞 火龍果潰瘍?。?新暗色柱節(jié)孢;發(fā)病及危害;防控技術(shù)

        中圖分類號: S432 文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A DOI:10.16688/j.zwbh.2022253

        火龍果也稱紅龍果、仙蜜果,屬于仙人掌科Cac’taceae量天尺屬Hylocereus或者Selenicereus,是近年興起的熱帶、亞熱帶水果。其果實(shí)中富含花色苷、植物白蛋白、維生素及膳食纖維等,具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。當(dāng)前,全球規(guī)模化生產(chǎn)火龍果的國家僅20多個(gè),主要是越南、中國、泰國、馬來西亞和菲律賓等亞洲國家。2018年,越南火龍果產(chǎn)量居世界首位,中國火龍果產(chǎn)量僅次于越南,種植面積5萬hm,產(chǎn)量102萬t[1]。在中國,火龍果主要產(chǎn)于廣西、廣東、云南、貴州、海南、臺灣和福建7省(區(qū))。目前主要種植的火龍果是紅皮紅肉火龍果Hylocereus Polyrhizus和紅皮白肉火龍果H.undatus,另外黃皮白肉火龍果H.megalanthus也有種植?;瘕埞呀?jīng)成為我國一種重要的熱帶亞熱帶經(jīng)濟(jì)作物。

        隨著火龍果栽培面積的不斷擴(kuò)大,各種病害也隨之發(fā)生。由新暗色柱節(jié)Neoscytulidium dimidiatum引起的潰瘍病發(fā)病面積大,嚴(yán)重時(shí)可造成果園絕收,成為火龍果生產(chǎn)上最嚴(yán)重的真菌病害。我國廣西、廣東、海南、貴州和臺灣等地均有火龍果潰瘍病的發(fā)生[26]。國內(nèi)主栽品種均可感染火龍果潰瘍?。郏矗?。世界其他火龍果主要生產(chǎn)國也有該病高發(fā)的報(bào)道[711]。目前國內(nèi)外學(xué)者主要對火龍果潰瘍病的病害癥狀、病原菌的形態(tài)特征和生物學(xué)特性、病原菌與火龍果的互作、流行規(guī)律以及防治措施等方面進(jìn)行了研究,本文對其研究進(jìn)展作一綜述。

        1火龍果潰瘍病癥狀、發(fā)生及分布

        1.1病害癥狀

        新暗色柱節(jié)孢主要侵染火龍果肉質(zhì)莖和果實(shí)。潰瘍病發(fā)病初期,火龍果幼嫩的莖上出現(xiàn)圓形凹陷的褪綠病斑,隨后病斑逐漸轉(zhuǎn)為橘黃色,接著在圓形斑中央出現(xiàn)紅褐色針狀點(diǎn),逐漸擴(kuò)大形成褐色突起斑。發(fā)病后期,空氣干燥時(shí),病斑呈灰白色木栓化突起;濕度大時(shí),莖部腐爛,干燥后形成圓形穿孔病斑。火龍果果實(shí)發(fā)生潰瘍病初期,果實(shí)表面及其鱗片均出現(xiàn)圓形凹陷的褪綠病斑,隨后病斑逐漸轉(zhuǎn)為橘黃色。天氣干旱時(shí),隨著果實(shí)成熟,橘黃色病斑轉(zhuǎn)為突起的灰白色潰瘍斑,其上產(chǎn)生子實(shí)體。如遇雨水,病斑迅速蔓延至整個(gè)果實(shí),且病斑上布滿黑褐色的子實(shí)體。

        1.2病害發(fā)生和分布

        火龍果主要種植在熱帶、亞熱帶暖濕區(qū)域,這些區(qū)域均有潰瘍病發(fā)生。2008年,馬來西亞的所有火龍果種植園均出現(xiàn)潰瘍病,發(fā)病率2%~42%,2009年,在以色列中部地區(qū)發(fā)現(xiàn)火龍果潰瘍病,果實(shí)發(fā)病率達(dá)50%,之后蔓延到以色列全境[8,10]。2015年,潰瘍病成為美國佛羅里達(dá)州南部最主要的火龍果病害,且果實(shí)潰瘍病發(fā)病率高于莖潰瘍病發(fā)病率,最高達(dá)70%[12]。2020年,波多黎各報(bào)道火龍果潰瘍病發(fā)病率高達(dá)80%[11]。2021年,泰國南部也暴發(fā)了火龍果潰瘍?。郏罚?。在我國,2012年,臺灣地區(qū)首次報(bào)道新暗色柱節(jié)孢導(dǎo)致火龍果莖潰瘍病,隨后在廣東、海南、廣西和貴州也陸續(xù)暴發(fā)了莖潰瘍病和果實(shí)潰瘍?。郏玻叮荨?/p>

        2火龍果潰瘍病病原學(xué)研究

        2.1病原菌的分子生物學(xué)鑒定

        火龍果潰瘍病最初在中國、馬來西亞和美國等地出現(xiàn),從這些國家的火龍果果園分離獲得的病原菌,經(jīng)核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internaltranscribedspacer,ITS)序列比對,及/或構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,均確定為新暗色柱節(jié)孢[23,10,12],隸屬于葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae。

        隨著潰瘍病不斷出現(xiàn),為了提高鑒定準(zhǔn)確率,研究者們增加了鑒定分類的基因。如Hong等基于ITS、beta-微管蛋白基因(β-Tub2)和翻譯延伸因子基因(TEF1-α)3段序列的比對結(jié)果,將佛羅里達(dá)州南部分離的潰瘍病病原菌鑒定為新暗色柱節(jié)孢[9]。Dy等基于ITS、β-Tub2和核糖體大亞基基因(LSU)構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹,將泰國南部分離的潰瘍病病原菌菌株PSU-SC02也鑒定為新暗色柱節(jié)孢[7]。

        2.2病原菌的形態(tài)特征

        新暗色柱節(jié)孢在PDA 培養(yǎng)基上生長迅速,25℃培養(yǎng)3d,菌落直徑可達(dá)9cm。其氣生菌絲為白色,長絨毛狀,菌絲有分支和隔膜,培養(yǎng)3~4d后菌絲逐漸變黑。病原菌的孢子有3種類型:節(jié)孢子(arthrospore)、厚垣孢子(chlamydospore)和分生孢子(conidiospore),孢子均為單細(xì)胞。節(jié)孢子由菌絲脫節(jié)后形成,無色到淺褐色,形態(tài)多樣,有柱狀、球狀或腰鼓狀,有些節(jié)孢子相連成為節(jié)孢子鏈,節(jié)孢子大小為(2.11~7.37)μm×(5.26~12.63)μm。

        節(jié)孢子細(xì)胞壁加厚形成厚垣孢子,深褐色,近球狀。

        新暗色柱節(jié)孢在寄主上產(chǎn)生子實(shí)體,單生,球形,產(chǎn)生的分生孢子無色透明,橢圓狀或長橢圓狀,大小為(5.50~5.91)μm×(10.50~16.31)μm[1316]。

        2.3 病原菌的生物學(xué)特性國內(nèi)不同地區(qū)的新暗色柱節(jié)孢菌株的生物學(xué)特性有差異,可能與其適應(yīng)所處的生存環(huán)境有關(guān)。為有效防治火龍果潰瘍病,需要充分了解新暗色柱節(jié)孢的生物學(xué)特性。溫度是影響菌絲生長和孢子萌發(fā)的重要條件,從緯度越低的地區(qū)分離到的新暗色柱節(jié)孢菌株的最適溫度越高。菌絲在5~45℃內(nèi)可生長,最適溫度為28~32℃[13,15,17]。新暗色柱節(jié)孢的節(jié)孢子萌發(fā)時(shí),多數(shù)在一端形成芽管,少數(shù)在中央形成芽管。孢子在15~40℃內(nèi)可萌發(fā),最適萌發(fā)溫度為30~35℃[15,18]。相對濕度越高,越有利于孢子萌發(fā),相對濕度高于98%,孢子萌發(fā)率可達(dá)100%[15]。

        新暗色柱節(jié)孢的菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)也受環(huán)境pH 影響。廣東湛江分離菌株菌絲生長的pH 范圍為4~10,最適合pH 為8;最適合產(chǎn)孢的pH 為7;孢子萌發(fā)的pH 范圍為4~9,最適合孢子萌發(fā)的pH 為7[15]。廣東惠東分離菌株菌絲生長的最適pH 為4~6,海南瓊海分離菌株菌絲生長的最適pH 為5,可能與菌株適應(yīng)這兩地的偏酸性土壤環(huán)境有關(guān)[13,19]。

        培養(yǎng)基成分對新暗色柱節(jié)孢菌絲的生長也有影響。碳源以蔗糖和葡萄糖最適合其菌絲生長和產(chǎn)孢,含核糖和木糖的培養(yǎng)基最不適合其菌絲生長和產(chǎn)孢;氮源以酵母膏最利于菌絲生長,而菌株不能在以尿素為氮源的培養(yǎng)基上生長;菌株在以甘氨酸為氮源的培養(yǎng)基上產(chǎn)孢最多[13,15]。

        光照對不同地區(qū)分離菌株的影響差異較大。光照可促進(jìn)廣東湛江分離菌株菌絲的生長,但對其孢子萌發(fā)有一定的抑制作用,在24h黑暗條件下,該分離菌株的孢子萌發(fā)率最高[15]。光照對貴州鎮(zhèn)寧分離菌株的菌絲生長有一定的抑制作用[17];但對廣東惠東分離菌株和海南瓊海分離菌株的菌絲生長沒有影響[13,19]。

        不同地區(qū)分離菌株的致病力有差異。鄭運(yùn)鋒對從廣東的廣州、湛江、惠東以及海南分離的4株菌株進(jìn)行了致病力檢測,海南菌株的致病力最強(qiáng),湛江菌株的致病力最弱[19]。

        2.4病原菌的基因組分析

        目前已有2個(gè)新暗色柱節(jié)孢菌株完成了核基因組序列分析。首個(gè)新暗色柱節(jié)孢核基因組序列分析在2016年完成,測序菌株UM880來自馬來西亞,它的核基因組大小約為42.69 Mb,GC 含量為54.3%,含110個(gè)scaffolds。序列分析結(jié)果顯示該菌株為MAT1-1交配型,提示新暗色柱節(jié)孢為異宗配合型真菌[20]。值得注意的是,Yu等比較了包括新暗色柱節(jié)孢在內(nèi)的葡萄座腔菌科的19個(gè)種的基因組,發(fā)現(xiàn)新暗色柱節(jié)孢UM880的協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族(majorfacilitatorsuperfamily,MFS)的基因數(shù)量最少,只有16個(gè)[20]。MFS是目前已知最大的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族之一,在次級代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起著重要作用,與真菌毒素的產(chǎn)生相關(guān)。葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的MFS的基因數(shù)量多達(dá)62 個(gè)[21]。第2 個(gè)完成測序的菌株為UCR-Neo1,核基因組大小約為42 Mb,含478 個(gè)scaf-folds[22]。Garcia等也比較了包括新暗色柱節(jié)孢在內(nèi)的葡萄座腔菌科17個(gè)種的基因組,發(fā)現(xiàn)新暗色柱節(jié)孢UCR-Neo1 比其他種存在更多的GH76 和PL3蛋白。這些蛋白主要是甘露聚糖酶、α-葡萄糖苷酶和果膠酸裂解酶,它們可能與新暗色柱節(jié)孢可以特異侵染一些寄主的果實(shí)和軟組織有關(guān)[22]。

        2.5病原菌寄主互作的分子機(jī)制

        目前,關(guān)于新暗色柱節(jié)孢火龍果互作的研究,Xu等[23]通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法對比了紅皮紅肉火龍果健康株和感染潰瘍病植株的基因表達(dá)譜差異,發(fā)現(xiàn)多數(shù)差異表達(dá)基因顯著富集到植物-病原菌互作和RNA 轉(zhuǎn)運(yùn)等通路上。其中,富集到植物-病原菌互作通路的差異表達(dá)基因主要編碼鈣離子依賴的蛋白激酶、環(huán)核苷酸門控通道蛋白、鈣調(diào)蛋白和WRKY家族轉(zhuǎn)錄因子等。此外還在紅皮紅肉火龍果中鑒定到233個(gè)富含亮氨酸重復(fù)序列(leucine-richrepeat,LRR)蛋白編碼基因以及4個(gè)病程相關(guān)蛋白(pathogenesis-relatedprotein,PR)編碼基因的表達(dá)響應(yīng)新暗色柱節(jié)孢的侵染。Xu等選了4個(gè)含最長編碼區(qū)的LRR 基因進(jìn)行了表達(dá)模式分析,發(fā)現(xiàn)這4 個(gè)LRR基因在紅肉火龍果中的表達(dá)水平在病原菌侵染后3~4d達(dá)到峰值,而在白肉火龍果中的表達(dá)水平在病原菌侵染后4~6d達(dá)到峰值,說明不同火龍果品種可能表現(xiàn)出不同的抗性[24]。Xu等還選了3個(gè)PR基因進(jìn)行表達(dá)模式分析,發(fā)現(xiàn)它們表達(dá)峰值出現(xiàn)的時(shí)間在被病原菌侵染的紅皮紅肉和紅皮白肉火龍果間有差異,其中HpPR1差異表達(dá)倍數(shù)最大,推測HpPR1是響應(yīng)潰瘍病病原菌侵染的關(guān)鍵基因。通過酵母雙雜交試驗(yàn),進(jìn)一步篩選到與HpPR1蛋白發(fā)生互作的蛋白,它們是仙人掌抑制類蛋白、仙人掌病毒X 分離物Rep/(TGB1,TGB2,TGB3)/CP、甘露醇脫氫酶、半胱氨酸蛋白酶等[25]。Pan等通過蛋白組學(xué)方法對比了火龍果潰瘍病發(fā)生前后的蛋白譜差異,發(fā)現(xiàn)病原菌侵染后豐度增加的蛋白中,近一半定位在線粒體和葉綠體,推測線粒體和葉綠體受病原菌的影響最大。差異表達(dá)蛋白主要是與光合作用、植物激素活性、活性氧平衡和致病性防御反應(yīng)相關(guān)的蛋白。其中,生長素和脫落酸的含量在病原菌侵染后顯著增加,活性氧平衡相關(guān)蛋白的含量發(fā)生顯著改變,均是與防御新暗色柱節(jié)孢侵染相關(guān)[26]。

        3病害流行規(guī)律

        高溫多雨是適宜新暗色柱節(jié)孢生長繁殖的條件,此條件下潰瘍病發(fā)生最為嚴(yán)重。海南是經(jīng)常發(fā)生高溫、高濕天氣及臺風(fēng)的地區(qū),全年均容易大面積暴發(fā)火龍果潰瘍病。在海南,害蟲全年活躍也是誘發(fā)火龍果潰瘍病的一個(gè)重要原因[6]。廣東、廣西和貴州全年都會發(fā)生潰瘍病,其中,廣東每年4月-10月潰瘍病發(fā)生嚴(yán)重,廣西在7月-9 月高溫高濕季節(jié)發(fā)生最嚴(yán)重,貴州每年6月-9月是高溫多雨季節(jié),田間潰瘍病癥狀最為明顯[45,2728]。廣西黏土易積水也是當(dāng)?shù)貪儾“l(fā)生重的重要原因[5]。貴州多為山地,且很多果園靠近河區(qū),果園濕度大,有利于當(dāng)?shù)貪儾”┌l(fā)[4]。由于病原菌主要侵染幼嫩莖和幼果,在幼齡火龍果園,幼嫩莖抗逆性差,如若再遇上冷害造成傷口,極易被病原菌侵染導(dǎo)致發(fā)?。郏担荨?/p>

        4病害防治措施

        4.1選用優(yōu)良抗病品種

        選用優(yōu)良抗病品種是防治火龍果潰瘍病的基礎(chǔ)。據(jù)報(bào)道,‘白玉龍’和‘湛江3號’對火龍果潰瘍病有抗病表現(xiàn),其莖部可溶性糖、過氧化物酶與多酚的含量均與抗病等級呈正相關(guān),而氣孔密度和丙二醛含量與抗病性呈負(fù)相關(guān)[29]。盧芳在對國內(nèi)21份材料進(jìn)行抗病性鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn),‘黑龍’表現(xiàn)抗病,‘紅水晶’‘華農(nóng)2號’‘黑珍珠1號’‘黑珍珠2號’表現(xiàn)中抗。這些抗病品種莖部的過氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶與抗病等級呈正相關(guān),氣孔密度與抗病性呈負(fù)相關(guān)[30]。

        4.2農(nóng)業(yè)防治

        定期對果園消毒。要定期使用殺菌劑噴淋土壤表面以殺死土壤中的病原菌。雨后容易滋生病害,更加要注意雨后及時(shí)對果園進(jìn)行殺菌消毒。

        合理修剪枝條。日常進(jìn)行修剪以改善通風(fēng)透光條件。病原菌主要侵染火龍果的幼嫩莖,因此需要定期修剪幼嫩莖和患病果莖。將剪下的帶病莖及時(shí)運(yùn)到園外集中深埋或焚毀,防止病原菌的廣泛傳播。

        合理施肥。及時(shí)滴灌水肥,增加磷鉀肥的比例,提高植株抗性,避免偏施氮肥。用宇花靈1 號進(jìn)行根淋,可促進(jìn)植株生長發(fā)育,提高植株抗病抗蟲能力。在6月-12月份的開花坐果期、成熟期用宇花靈1號進(jìn)行根淋,提高坐果率,促進(jìn)果實(shí)膨大,提高品質(zhì)及產(chǎn)量[31]。

        避雨栽培。在園區(qū)增加避雨栽培設(shè)施,可有效控制病原菌傳播。

        4.3化學(xué)防治

        火龍果潰瘍病目前以化學(xué)防治手段為主?;瘕埞o稈表面光滑且蠟質(zhì)層厚,一般防治藥劑難以被植株吸收。具有內(nèi)吸活性強(qiáng)、耐雨水沖刷的殺菌劑才能起到較好的防治效果。賢小勇等[32]利用250g/L吡唑醚菌酯乳油250.0mg/kg在田間施藥3次后,對莖潰瘍病和果實(shí)潰瘍病的防效分別超過80.0%和85.0%。林珊宇等[33]田間試驗(yàn)結(jié)果表明,42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑對莖潰瘍病和果實(shí)潰瘍病的田間最高防效分別達(dá)89.07%和92.72%。藍(lán)國兵等[34]報(bào)道,具有較強(qiáng)內(nèi)吸活性的戊唑醇、異菌脲、氟硅唑、丙硫菌唑、丙環(huán)唑等殺菌劑,大田試驗(yàn)的防效均達(dá)到70%以上。對這些藥劑進(jìn)行輪換用藥,可延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性。

        在火龍果潰瘍病高發(fā)區(qū)域,應(yīng)以預(yù)防為主。韋潔玲等[35]研究了25%吡唑醚菌酯·毒氟磷懸浮劑對火龍果潰瘍病的田間防控效果,其預(yù)防性和治療性防效分別為73%和52%,預(yù)防效果優(yōu)于治療效果。張耀良等[36]發(fā)現(xiàn),在火龍果栽培過程中,每15d噴施15mg/L臭氧水1次,對潰瘍病的抑制效果較好,甚至優(yōu)于常規(guī)化學(xué)防治。

        4.4生物防治

        張振華等[37]篩選到兩株對火龍果潰瘍病的室內(nèi)防效達(dá)到48%和50%的細(xì)菌菌株。皮氏類芽胞桿菌Paenibacillus peoriae及多黏類芽胞桿菌Paenibacillus Polymyxa對火龍果潰瘍病菌具有較好的拮抗效果,田間防效有待進(jìn)一步確定[3839]。從番木瓜葉片中分離的羅氏青霉Penicillium rolfsii?菌株Y17能有效抑制新暗色柱節(jié)孢的生長,25%的Y17發(fā)酵液對新暗色柱節(jié)孢的菌絲生長抑制率為70.87%[40]。Ratanaprom 等[41]發(fā)現(xiàn),枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis 液體培養(yǎng)物離心后獲得的上清液可直接抑制新暗色柱節(jié)孢的生長,當(dāng)將上清液稀釋1 倍時(shí),對新暗色柱節(jié)孢的菌絲生長抑制率仍達(dá)100%。

        4.5利用植物誘導(dǎo)抗性防治

        利用植物抗病誘導(dǎo)劑調(diào)節(jié)植物的代謝,誘導(dǎo)植物啟動免疫系統(tǒng),增強(qiáng)植物的廣譜抗病、抗逆能力。李界秋等[42]發(fā)現(xiàn)5%氨基寡糖素水劑83.33mg/L和2%香菇多糖水劑33.33mg/L對火龍果潰瘍病的誘導(dǎo)抗性效果分別達(dá)到89.81%和87.79%,抗病效果高于使用對照殺菌劑250g/L吡唑醚菌酯水乳劑。Ratanaprom 等[41]發(fā)現(xiàn)1%碳酸氫鈉對新暗色柱節(jié)孢的菌絲生長抑制率達(dá)100%,而將50%枯草芽胞桿菌培養(yǎng)上清液和1%碳酸氫鈉聯(lián)合使用,每周噴施1次,連續(xù)噴施4個(gè)月,對火龍果潰瘍病的室內(nèi)防效達(dá)100%。

        5展望

        目前,對火龍果潰瘍病的研究取得了一些成果,但仍有許多問題亟須解決。關(guān)于火龍果潰瘍病的抗病育種、病原菌致病機(jī)理和生物防治研究極少,尚無法應(yīng)對火龍果生產(chǎn)上的問題。建議今后加強(qiáng)以下研究:1)開發(fā)抗病相關(guān)分子標(biāo)記,用于抗?jié)儾》肿佑N。2019年,全國火龍果種質(zhì)資源保存數(shù)量已達(dá)600余份(中國熱帶作物種質(zhì)資源信息網(wǎng),http:∥ctcgris.catas.cn/content-142.html),但尚未全面開展火龍果潰瘍病抗性精準(zhǔn)評價(jià)??赏ㄟ^高通量、高精度的潰瘍病抗性鑒定,篩選出具有穩(wěn)定抗病性的優(yōu)異種質(zhì)資源,從而挖掘抗病基因資源和開發(fā)抗病相關(guān)分子標(biāo)記。2)開展新暗色柱節(jié)孢的遺傳多樣性和致病機(jī)理研究,挖掘重要致病相關(guān)基因和效應(yīng)蛋白,深入認(rèn)識病原菌的侵染特性,從而有針對性地、高效地解決病害防控的關(guān)鍵問題。3)開發(fā)針對性強(qiáng)、低成本、高藥效且對環(huán)境友好的火龍果潰瘍病防治藥劑或生防菌劑,以減少化學(xué)農(nóng)藥的施用。

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