趙瑩，王爽，潘志，汪少瓊，王穎航（.長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 307；.長春中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，吉林 長春 307）

類風濕關節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種病因不明的慢性全身性自身免疫性疾病。類風濕關節(jié)炎的主要病理特征為滑膜增生，并逐漸引起關節(jié)軟骨及骨侵蝕，最終可致關節(jié)畸形甚至殘疾[1]。類風濕關節(jié)炎的病理變化過程與類風濕成纖維樣滑膜細胞密切相關[2]。越來越多的證據[3]表明，類風濕成纖維樣滑膜細胞具有抗凋亡及腫瘤樣擴張?zhí)匦浴anus激酶/信號轉導與轉錄激活因子（JAK/STAT）信號通路參與細胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調節(jié)等許多重要生物學過程，同時也參與了類風濕關節(jié)炎的病理進展[4]。目前，JAK 抑制劑已被廣泛應用于類風濕關節(jié)炎的治療并取得良好療效[5]。

當歸補血湯源自李東垣的《內外傷辨惑論》，由黃芪、當歸按5∶1 比例組成，是補氣生血的代表方[6]。臨床上用當歸補血湯治療類風濕關節(jié)炎療效確切[7-9]。現代藥理學研究[10]表明，當歸補血湯具有促進造血功能、調節(jié)免疫、防治骨科疾病、抗纖維化、抗腫瘤等多種藥理作用。黃芪的主要成分黃芪雜多糖可誘導佐劑性關節(jié)炎大鼠膝關節(jié)滑膜細胞凋亡，抑制促炎因子分泌[11]。當歸的主要化學成分阿魏酸能顯著改善抗原誘導性關節(jié)炎大鼠的滑膜炎癥和軟骨破壞[12]。本課題組前期研究[13]證實，當歸補血湯含藥血清具有抑制腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導的人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞（HFLS-RA）增殖的作用，可能與其調控Th17/Treg 平衡、抑制炎癥反應相關。故本研究擬進一步觀察當歸補血湯含藥血清對HFLS-RA 細胞凋亡及凋亡相關通路JAK/STAT 信號通路的影響，以期闡明當歸補血湯抗類風濕關節(jié)炎的潛在機制。

1 材料與方法

1.1 細胞及動物人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞（HFLS-RA），購自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術研究院，取3～7 代細胞用于實驗。SPF 級健康雄性Wistar 大鼠42 只，體質量（200±20）g，購自吉林省長春市億斯實驗動物技術有限責任公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（吉）2020-0002。動物飼養(yǎng)于長春中醫(yī)藥大學動物實驗中心，溫度（23±2）℃，相對濕度（50±5）%，實驗動物使用許可證號：SYXK（吉）2018-0014。本實驗經長春中醫(yī)藥大學動物實驗倫理委員會審查，批文號：2021361。

1.2 藥物及試劑當歸、黃芪藥材，購自吉林大藥房，批號：200407，經長春中醫(yī)藥大學蔡廣知副教授鑒定為正品；雷公藤多苷片，上海復旦復華藥業(yè)有限公司，批號：20191204。Cell Counting Kit-8 細胞計數試劑盒（CCK-8），合肥蘭杰柯科技有限公司，批號：21 139519；腫瘤壞死因子α（TNF-α），美國Pepro Tech 公司，批號：300-01A-10；白細胞介素15（IL-15）ELISA 檢測試劑盒（批號：20210701-10341A）、白細胞介素6（IL-6）ELISA 檢測試劑盒（批號：202110701-10377A），上海酶聯(lián)生物科技有限公司；總RNA 提取試劑盒，北京天根生化科技有限公司，批號：U8907；Bioteke super RT Kit，北京泰克生物技術公司，批號：B020 009018；2×Hieff?Robust PCR Master Mix（With Dye），上海翊圣生物科技公司，批號：H0 001061；B 細胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2 相關X 蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）引物，由生工生物工程上海股份有限公司合成；GAPDH 抗體，美國Bioworld 公司，批號：AP0063；兔抗人磷酸化酪氨酸激酶2（p-JAK2）抗體（批號：AP0531）、兔抗人磷酸化信號傳導及轉錄活化因子1（p-STAT1）抗體（批號：AP0453）、兔抗人磷酸化信號傳導及轉錄活化因子3（p-STAT3）抗體（批號：AP0715）、Bax 抗體（批號：A19684）、Bcl-2 抗體（批號： A20777）、 caspase- 3 抗體（批號：A11040），武漢愛博泰克（ABclonal）生物科技有限公司；Goat anti-Rabbit IgG（H＆L）-HRP，北京博奧森生物技術有限公司，批號：AF12 114126；RIPA 細胞裂解液、 BCA 蛋白濃度測定試劑盒（批號：120219200821），上海碧云天生物技術公司。

1.3 主要儀器RT-6100 型酶標儀，深圳雷杜生命科學股份有限公司；ETC811 型基因擴增儀，蘇州東勝興業(yè)科學儀器有限公司；165-8000 型電泳儀、170-3930 型轉膜儀，美國Bio-Rad 公司；FL1000 型智能成像系統(tǒng)，美國Thermo Fisher Scientific 公司；A00-1-1102 型流式細胞儀，美國貝克曼庫爾特公司。

1.4 當歸補血湯含藥血清制備將42 只Wistar 大鼠隨機分為空白組（14 只）、雷公藤多苷組及當歸補血湯低、中、高劑量組，每組7 只。當歸補血湯按原方配伍比例（黃芪∶當歸=5∶1）稱取，常規(guī)煎煮濃縮至水煎液濃度為1.5 g·mL-1，4 ℃下儲藏備用。按人與動物體表面積換算，當歸補血湯低、中、高劑量組按照15、7.5、3.75 g·kg-1劑量灌胃給藥，雷公藤多苷組灌胃給藥劑量為9.45 mg·kg-1，空白組灌胃等體積生理鹽水，每天灌胃給藥2 次，連續(xù)7 d。末次給藥2 h 后，各組大鼠進行腹主動脈采血，收集血清，56 ℃滅活，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 細胞分組及干預將HFLS-RA 細胞隨機分為6 組，即空白組（10%空白組大鼠血清培養(yǎng)基）、模型組（20 ng·mL-1TNF-α+10%空白組大鼠血清培養(yǎng)基）、雷公藤多苷組（20 ng·mL-1TNF-α+10%雷公藤多苷組大鼠血清培養(yǎng)基），以及當歸補血湯含藥血清低、中、高劑量組（20 ng·mL-1TNF-α+10%當歸補血湯低、中、高劑量組大鼠血清培養(yǎng)基）；按照分組設置加入終質量濃度為20 ng·mL-1的TNF-α，1 h 后加入相應含藥（或空白）血清處理24 h。

1.6 CCK-8 法檢測HFLS-RA 細胞增殖活性待HFLS-RA 細胞密度達到85%左右時，用0.25%胰蛋白酶消化細胞，計數，以每孔5×104個·mL-1的密度接種于96 孔細胞培養(yǎng)板；細胞分組同“1.5”項下，每組設置6 個復孔，培養(yǎng)過夜；按照分組設置加入終質量濃度為20 ng·mL-1的TNF-α，1 h 后加入相應含藥（或空白）血清處理24、48 h；然后向每孔中加入10 μL CCK-8 溶液，繼續(xù)孵育1 h；采用酶標儀在450 nm 波長處檢測各孔細胞光密度（OD）值。

1.7 流式細胞術（Annexin V-FITC/PI 雙染法）檢測HFLS-RA細胞凋亡將HFLS-RA細胞以2×105個·mL-1的密度接種于6 孔板中，細胞分組及干預同“1.5”項下；干預24 h 后，按照試劑盒說明書步驟收集細胞，并重新懸浮在PBS 中；細胞計數、離心后重新懸浮在195 μL 結合緩沖液中；先后加入5 μL Annexin V-FITC 和10 μL PI，輕輕混勻，室溫下避光孵育15 min；采用流式細胞術檢測細胞凋亡率。

1.8 RT-PCR 法檢測細胞中Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA 表達細胞分組及干預同“1.5”項下。培養(yǎng)24 h 后棄細胞上清，加入1 mL RZ 裂解液，提取總RNA，檢測RNA 含量和純度（A260/A280=1.7～2.1）；反轉錄合成cDNA，反應條件為：42 ℃、50 min，70 ℃、10 min；進行PCR 擴增反應，反應體系：50 μL，反應條件：94 ℃、5 min，94 ℃、30 s，55 ℃、10 s（循環(huán)40 次），72 ℃、30 s，72 ℃、10 min；PCR 產物進行瓊脂糖凝膠電泳，測定目的基因、內參基因灰度值，以兩者比值作為目的基因相對表達量；每個樣品設置3 個復孔，平行實驗3 次。引物序列見表1。

表1 PCR 引物序列Table 1 Primer sequences for PCR

1.9 ELISA 法檢測細胞上清液中IL-6、IL-15 水平細胞分組及干預同“1.5”項下。培養(yǎng)24 h 后收集細胞上清液，離心，-20 ℃下保存；嚴格按照試劑盒說明書步驟檢測IL-6、IL-15 水平。

1.10 Western Blot 法檢測細胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、p-JAK2、p-STAT3、p-STAT1 蛋白表達水平細胞分組及干預同“1.5”項下。培養(yǎng)24 h 后收集各組細胞，加入RIPA 細胞裂解液30 min 后，以4 ℃、12 000 r·min-1（離心半徑4 cm）離心5 min，收集上清液；采用BCA 蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度。制膠（10%、12%分離膠，5%濃縮膠），上樣后以SDS-PAGE 電泳法分離蛋白質樣品（80 V、30 min跑上層膠，120 V、50 min 跑下層膠）；電泳結束后進行蛋白轉膜（250 A、100 min），用5%脫脂奶粉封閉1 h 后，TBST 洗膜3 次，每次10 min；4 ℃下孵育一抗［GAPDH（1∶2 500）、Bax（1∶500）、Bcl-2（1∶500）、caspase-3（1∶500）、p-JAK2（1∶800）、p-STAT3（1∶1 000）、p-STAT1（1∶1 000）］ 過夜，TBST 洗膜3 次，每次10 min；室溫下?lián)u床孵育二抗（1∶1 000）1 h，TBST 洗膜3 次，每次10 min；滴加化學發(fā)光液ECL 顯色，在凝膠成像系統(tǒng)中曝光；采用ImageJ 圖像分析軟件測定各蛋白條帶灰度值，以GAPDH 為內參，對目的蛋白進行半定量分析。

1.11 統(tǒng)計學處理方法采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行數據分析；計量資料以均數±標準差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 法，方差不齊則采用Dunnett’s T3法檢驗；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導HFLS-RA細胞增殖活性的影響結果見表2。與空白組比較，模型組HFLS-RA 細胞的增殖活性顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，雷公藤多苷組及當歸補血湯含藥血清各劑量組HFLS-RA 細胞的增殖活性均顯著降低（P＜0.01）。結果表明，不同濃度的當歸補血湯含藥血清均對TNF-α 誘導的HFLS-RA 細胞增殖活性有顯著抑制作用，并呈濃度依賴性。

表2 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖活性的影響（±s，n=6）Table 2 The effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the proliferation of human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF-α（±s，n=6）

表2 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖活性的影響（±s，n=6）Table 2 The effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the proliferation of human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF-α（±s，n=6）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01

OD 值0.394 9±0.007 3 0.506 7±0.008 7**0.350 0±0.002 8##0.400 9±0.009 9##0.393 5±0.006 0##0.371 3±0.006 3##組別空白組模型組雷公藤多苷組DBD 低劑量組DBD 中劑量組DBD 高劑量組

2.2 當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導HFLS-RA細胞凋亡率的影響結果見圖1。與空白組比較，模型組HFLS-RA 細胞的凋亡率明顯下降（P＜0.05）。與模型組比較，雷公藤多苷組及當歸補血湯含藥血清各劑量組HFLS-RA 細胞的凋亡率顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。結果表明，不同濃度的當歸補血湯含藥血清均可促進TNF-α 誘導的HFLS-RA 細胞凋亡。

圖1 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞凋亡率的影響（±s，n=3）Figure 1 Effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on apoptosis rate of human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF-α（±s，n=3）

2.3 當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導HFLS-RA細胞Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA 表達的影響結果見圖2。與空白組比較，模型組HFLS-RA 細胞的Bax、caspase-3 mRNA 表達水平顯著降低（P＜0.01），而Bcl-2 mRNA 表達水平顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，雷公藤多苷組及當歸補血湯含藥血清各劑量組HFLS-RA 細胞的Bax、caspase-3 mRNA 表達水平均顯著升高（P＜0.01），而Bcl-2 mRNA 表達水平顯著降低（P＜0.01）。結果表明，不同濃度的當歸補血湯含藥血清能顯著上調TNF-α 誘導的HFLS-RA 細胞促凋亡因子Bax、caspase-3 mRNA 的表達，下調抗凋亡因子Bcl-2 mRNA 的表達，從而發(fā)揮促HFLS-RA 細胞凋亡的作用。

圖2 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表達的影響（±s，n=3）Figure 2 Effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the mRNA expression levels of Bax，Bcl-2 and caspase-3 in human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF-α（±s，n=3）

2.4 當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導HFLS-RA細胞中IL-6、IL-15 水平的影響結果見表3。與空白組比較，模型組HFLS-RA 細胞的IL-6、IL-15水平顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，雷公藤多苷組及當歸補血湯含藥血清各劑量組HFLS-RA 細胞的IL-6、IL-15 水平均顯著降低（P＜0.01）。結果表明，當歸補血湯含藥血清能顯著降低TNF-α 誘導的HFLS-RA 細胞的炎性因子水平，減輕炎癥反應。

表3 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞中IL-6、IL-15 水平的影響（±s，n=6）Table 3 Effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the expression levels of IL-6 and IL-15 in human fibroblastlike synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF- α（x ± s，n=6）

表3 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞中IL-6、IL-15 水平的影響（±s，n=6）Table 3 Effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the expression levels of IL-6 and IL-15 in human fibroblastlike synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF- α（x ± s，n=6）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01

IL-15/（pg·mL-1）37.74±1.11 57.91±1.16**43.46±0.81##50.30±0.90##45.72±0.51##44.20±1.12##組別空白組模型組雷公藤多苷組DBD 低劑量組DBD 中劑量組DBD 高劑量組IL-6/（pg·mL-1）25.34±2.88 52.10±1.24**26.10±0.95##44.82±1.41##40.95±1.35##38.00±2.26##

2.5 當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導HFLS-RA細胞Bax、Bcl-2、caspase-3 蛋白表達的影響結果見圖3。與空白組比較，模型組HFLS-RA 細胞的抗凋亡因子Bcl-2 蛋白表達水平顯著升高（P＜0.01），而促凋亡因子Bax、caspase-3 蛋白表達水平及Bax/Bcl-2 比值顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，雷公藤多苷組及當歸補血湯含藥血清各劑量組HFLSRA 細胞的Bcl-2 蛋白表達水平均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），Bax、caspase-3 蛋白表達水平及Bax/Bcl-2 比值均顯著升高（P＜0.01）。結果表明，不同濃度的當歸補血湯含藥血清能顯著上調TNF-α 誘導的HFLS-RA 細胞促凋亡因子Bax、Caspase-3 蛋白表達，下調抗凋亡因子Bcl-2 蛋白表達，從而發(fā)揮促HFLS-RA 細胞凋亡的作用。

圖3 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞Bax、Bcl-2、caspase-3 蛋白表達的影響（±s，n=3）Figure 3 The effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the protein expression levels of Bax，Bcl-2，caspase-3 in human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF-α（±s，n=3）

2.6 當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導HFLS-RA細胞p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表達的影響結果見圖4。與空白組比較，模型組HFLS-RA 細胞的p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表達水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，當歸補血湯含藥血清中、高劑量組HFLS-RA 細胞的p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表達水平均顯著降低（P＜0.01）。結果表明，當歸補血湯含藥血清可能通過抑制JAK/STAT 信號通路的轉導來實現對HFLS-RA 細胞的促凋亡作用。

圖4 當歸補血湯含藥血清（DBD）對TNF-α 誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表達的影響（±s，n=3）Figure 4 The effect of Danggui Buxue Decoction-containing serum on the protein expression levels of p-JAK2，p-STAT1 and p-STAT3 in human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis induced by TNF-α（±s，n=3）

3 討論

類風濕關節(jié)炎（RA）是一種慢性、對稱性侵害關節(jié)和關節(jié)周圍組織，以關節(jié)滑膜病變?yōu)橹饕∽兊娜硇?、自身免疫性疾病，其臨床表現與中醫(yī)典籍中記載的“歷節(jié)”“鶴膝風”“尪痹”“骨痹”“頑痹”等相似，現多將其歸屬于“痹證”的范疇[14-15]。有研究[8]認為，類風濕關節(jié)炎的基本病機為本虛標實，臟腑因濕熱毒久蘊，耗氣傷血，“血氣凝澀，不得流通關節(jié)，諸筋無以滋養(yǎng)，真邪相搏，所歷之節(jié)，悉皆疼痛，故為歷節(jié)風也。痛甚則使人短氣汗出，肢節(jié)不可屈伸”，故選用當歸補血湯氣血雙補而不壅遏病邪。名老中醫(yī)李堪印教授臨證50 余載，運用中西結合思路，善用黃芪為君藥組方治療痹癥，屢有奇效[9]。臨床治療“痹證”組方用藥規(guī)律研究[16]發(fā)現，當歸使用頻次最高。當歸補血湯在類風濕關節(jié)炎的治療中，無論是單獨使用或是與西藥聯(lián)合運用均顯示出其優(yōu)勢。

類風濕關節(jié)炎的發(fā)病機制尚未明確，受多種因素包括遺傳、環(huán)境、免疫紊亂及細胞因子等影響。類風濕關節(jié)炎的主要病理特征是滑膜細胞的異常增殖，成纖維樣滑膜細胞（FLS）是滑膜炎的主要效應細胞，其具有腫瘤樣擴張?zhí)匦?，影響類風濕關節(jié)炎微環(huán)境穩(wěn)態(tài)，加速疾病進展。FLS 對細胞凋亡有抵抗力，導致其過度增殖與凋亡之間的不平衡，進而促使關節(jié)軟骨的破壞[17-18]。研究[19]表明，Bcl-2、Bax 在細胞凋亡發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，Bax/Bcl-2 比值變化可以觸發(fā)信號，啟動凋亡級聯(lián)反應；caspase-3被激活后，細胞底物會被降解或裂解，最終可促使細胞凋亡。研究[20]發(fā)現，在類風濕關節(jié)炎患者的FLS中，促凋亡蛋白Bax 表達水平降低，而抗凋亡蛋白Bcl-2 表達水平升高。TNF-α 誘導HFLS-RA 細胞異常增殖是藥物治療類風濕關節(jié)炎體外實驗研究的經典模型[21]。本研究結果顯示，當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導的HFLS-RA 細胞增殖活性有顯著抑制作用，其能顯著上調促凋亡因子Bax、Caspase-3 的蛋白表達，下調抗凋亡因子Bcl-2 的蛋白表達，從而發(fā)揮促HFLS-RA 細胞凋亡的作用。

研究[22]顯示，IL-6/STAT3 信號通路在炎癥及腫瘤疾病中發(fā)揮重要作用，IL-6 可通過細胞膜上相應的酪氨酸激酶相關受體來激活STAT3 表達，誘導腫瘤細胞的增殖。抑制IL-6/STAT3 信號通路的激活，可促進腫瘤細胞的凋亡。有研究[23-24]表明，IL-15 可促使細胞增殖，抑制細胞凋亡，促進T 細胞的存活、增殖以及下游效應，包括誘導JAK/STAT 途徑激活。許多細胞因子通過JAK/STAT 來轉導細胞內信號，在類風濕關節(jié)炎滑膜關節(jié)組織中持續(xù)激活，分泌大量炎癥介質，進而加重滑膜炎癥[25]。有研究[26]發(fā)現，類風濕關節(jié)炎滑膜組織中STAT1/STAT3 被激活，導致抗凋亡分子表達上調，從而抑制細胞凋亡過程。研究[27]表明，JAK2/STAT1/3 可能是FLS 增殖抑制作用的上游機制。JAKs 在細胞信號傳導途徑參與調節(jié)免疫和炎癥過程中發(fā)揮了至關重要的作用。針對JAK 家族成員的干預可造成免疫抑制或抗炎效果，JAK 激酶抑制劑對類風濕關節(jié)炎可能發(fā)揮有益的治療效果[28]，抑制其表達和激活被認為是治療類風濕關節(jié)炎的一種新策略[29]。本研究結果顯示，在TNF-α 作用下HFLS-RA 細胞內IL-6、IL-15 水平顯著升高，JAK2/STAT1/3 信號通路被激活，JAK2、STAT1 和STAT3 表現出高度磷酸化，進而導致細胞異常增殖與凋亡抵抗；而當歸補血湯含藥血清干預后，HFLS-RA 細胞的IL-6、IL-15 水平均顯著降低，并有效抑制JAK2、STAT1 和STAT3 的磷酸化，減輕炎癥反應，誘導細胞凋亡。結果提示，當歸補血湯含藥血清誘導HFLS-RA 細胞發(fā)生凋亡進而發(fā)揮抗類風濕關節(jié)炎的作用可能與其抑制JAK2/STAT1/3信號通路傳導有關。

綜上所述，當歸補血湯含藥血清對TNF-α 誘導的異常增殖的HFLS-RA 細胞有較好的抑制作用，同時能降低其凋亡抗性，調節(jié)其過度增殖與凋亡之間的不平衡，其機制可能與抑制細胞內JAK2、STAT1、STAT3 磷酸化蛋白的活化，阻斷JAK2/STAT1/3 信號通路轉導有關。本研究從細胞層面為當歸補血湯治療類風濕關節(jié)炎提供了初步證據，但有待通過進一步的動物藥效實驗進行驗證。