閔 文，楊麗英，閔 潔，屠云嬌

（云南省紅河州第一人民醫(yī)院病理科，云南 紅河 661199）

胃癌是消化系統(tǒng)常見、高發(fā)的惡性腫瘤之一，起源于胃黏膜細(xì)胞。早期胃癌患者無典型臨床表現(xiàn)，隨著病情進(jìn)展可出現(xiàn)腹痛、厭食、嘔血、黑便等癥狀，且患者隨著出血量的增加可繼發(fā)失血性休克，威脅生命安全[1]。統(tǒng)計(jì)顯示，近年來隨著我國(guó)居民生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)的變化，胃癌的發(fā)病率持續(xù)升高并趨于年輕化[2]。手術(shù)是目前臨床治療胃癌的主要方案，但不同時(shí)期開展手術(shù)的治療效果不同，其中早期胃癌患者術(shù)后5 年生存率高達(dá)90% ～100%，而晚期胃癌缺乏有效的治療手段，經(jīng)綜合治療患者的5 年生存率不足30%。因此，臨床需采取有效措施及早對(duì)胃癌進(jìn)行診斷，確?；颊弑M早得到科學(xué)治療[3]。剪切修復(fù)交叉互補(bǔ)修復(fù)缺陷偶聯(lián)因子1（excision repair cross-complementation group 1，ERCC1）蛋 白 是 一種高度保守的DNA 核酸內(nèi)切酶，是核苷酸切除修復(fù)（Nucleotide excision repair，NER）過程中的關(guān)鍵部件，但臨床對(duì)其在胃癌病理診斷中的研究較少。為進(jìn)一步分析ERCC1 蛋白的表達(dá)在胃癌患者病理診斷中的意義，本文特進(jìn)行如下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

遵循隨機(jī)原則，選擇2020 年5 月至2022 年5 月在我院確診為胃癌的50 例患者為觀察組，并選擇同期的健康體檢人群50 例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）觀察組患者的病情經(jīng)病理學(xué)檢查確診為胃腺癌；（2）年齡≥20 歲；（3）精神及心理狀態(tài)正常；（4）病理及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在認(rèn)知、精神或語言障礙；（2）觀察組患者術(shù)前實(shí)施放療或靶向治療；（3）標(biāo)本中組織蛋白降解，導(dǎo)致免疫組織化學(xué)（免疫組化）染色結(jié)果不滿意；（4）臨床病理及隨訪資料缺失；（5）觀察組患者合并其他惡性腫瘤；（6）觀察組患者無法耐受手術(shù)治療；（7）觀察組患者的腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移；（8）存在嚴(yán)重的心、肝、腎等器官功能不全。觀察組中，男32 例，女18 例，中位年齡57（42，72）歲，中位病灶直徑5.0（1，9）cm ；腫瘤分化程度：16 例高分化、20 例中分化、14 例低分化；腫瘤分期：30例Ⅰ～Ⅱ期、20 例Ⅲ～Ⅳ期；病變部位：10 例胃體癌、40 例胃竇癌。對(duì)照組中，男33 例，女17 例，中位年齡57.5（41，74）歲。兩組的性別、年齡對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可對(duì)比。

1.2 方法

檢測(cè)方法：（1）取對(duì)照組正常胃部組織及觀察組病灶組織、癌旁組織（距離病灶邊緣＞5 mm），將石蠟切片脫蠟至水，加入濃度為3% 的H2O2，室溫下孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。蒸餾水沖洗，PBS 緩沖液浸泡3 min×3 次，將最終獲得的切片放置在0.01 mol/L 的枸櫞酸鹽緩沖液（pH 為6.0）中。高壓鍋加熱至煮沸后，將玻片放入高壓鍋中，加上加壓閥，高壓鍋達(dá)到最大壓力（噴氣）2 min 后關(guān)閉電源，常溫下自然冷卻處理。取出玻片，采用PBS緩沖液洗滌2 次，每次洗滌時(shí)間均控制為5 min。（2）洗滌結(jié)束后加入5%BSA 封閉液，甩干后加入一抗（人兔抗人ERCC1 蛋白抗體），置于濕盒中室溫孵育2 h。（3）PBS 緩沖液沖洗3 min×3 次。（4）甩干玻片，加入生物素標(biāo)記二抗工作液，室溫孵育30 min，PBS緩沖液沖洗3 min×3 次。（5）DAB 顯色3 ～10 min，以蘇木素復(fù)染后封片，光學(xué)顯微鏡下觀察，每份標(biāo)本測(cè)定3 次后取均值。陽性判斷方法[4]：參考奧爾雷德評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，分別從細(xì)胞的陽性數(shù)量、染色強(qiáng)度進(jìn)行免疫組化染色評(píng)分，總分16 分，4 ～12 分為陽性，得分越高則陽性表達(dá)越強(qiáng)。其中陽性細(xì)胞數(shù)≤25% 為0分、26% ～50% 為1 分、51% ～75% 為2 分、＞75%為3 分；染色后不著色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，黃褐色為3 分。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組ERCC1 蛋白的陽性率。分析ERCC1 蛋白在不同病理中的表達(dá)。分析ERCC1 蛋白與胃癌患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究涉及數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0 軟件分析，計(jì)數(shù)資料以±s或中位數(shù)（用四分位數(shù)間距）表示，行t或非參數(shù)檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以% 表示，行χ2 檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Pearson 相關(guān)性檢驗(yàn)對(duì)ERCC1 蛋白與胃癌患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度的相關(guān)性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組ERCC1 蛋白陽性率的對(duì)比

觀察組病灶組織中ERCC1 蛋白的陽性率（70.00%）相較于癌旁組織（4.00%）、對(duì)照組（2.00%）均更高（P＜0.05）；觀察組癌旁組織中ERCC1 蛋白的陽性率與對(duì)照組相比無明顯差異（P＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組ERCC1 蛋白陽性率的對(duì)比[例（%）]

2.2 ERCC1 蛋白在不同病理中的表達(dá)情況

觀察組胃癌組織中ERCC1 蛋白的陽性率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度密切相關(guān)，腫瘤大、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高的患者ERCC1 蛋白的陽性率更高，與腫瘤小、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、分化程度低或中等患者相比差異顯著（P＜0.05）。詳見表2。

表2 ERCC1 蛋白在不同病理中的表達(dá)情況

2.3 ERCC1 蛋白陽性率與胃癌患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度的相關(guān)性

Pearson 程序中輸入50 例胃癌患者的ERCC1 蛋白陽性率，分析ERCC1 蛋白陽性率與患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度的相關(guān)性，結(jié)果顯示，ERCC1 蛋白陽性率與患者的年齡、性別無關(guān)，與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度呈正相關(guān)。詳見表3。

表3 ERCC1 蛋白陽性率與胃癌患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度的相關(guān)性

3 討論

胃癌是起源于胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，統(tǒng)計(jì)顯示該病的發(fā)病率居惡性腫瘤首位[5]。胃癌可發(fā)生在胃的任何部位。本病的發(fā)生與幽門螺桿菌感染、遺傳、環(huán)境、飲食、慢性胃炎等因素密切相關(guān)。大部分胃癌患者在發(fā)病早期均無明顯癥狀，少數(shù)患者可出現(xiàn)輕微飽脹不適、消化不良等癥狀，因此患者的重視程度不高。在疾病進(jìn)展過程中患者可出現(xiàn)上腹部疼痛、體重下降等癥狀，疾病晚期可出現(xiàn)貧血、厭食等癥狀，導(dǎo)致患者體重持續(xù)下降，形成惡病質(zhì)[6]。近年來隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對(duì)自身健康的關(guān)注度越來越高，如何在胃癌早期實(shí)現(xiàn)診斷與治療成為當(dāng)前臨床亟待解決的問題[7]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，NER 途徑是修復(fù)DNA 損傷的途徑之一，而ERCC1 為NER 途徑中的重要分子[8]。從生理角度分析，ERCC1 蛋白位于染色體19q13-2 中，含有10 個(gè)外顯子，該蛋白單獨(dú)存在時(shí)并不十分穩(wěn)定，但可以有效識(shí)別并切除損傷的DNA鏈5 端[9-10]。其次，ERCC1 蛋白可參與雙鏈斷裂修復(fù)途徑，同時(shí)對(duì)鏈間交聯(lián)進(jìn)行修復(fù)。此外，有研究發(fā)現(xiàn)ERCC1 蛋白在機(jī)體中的表達(dá)可準(zhǔn)確反映惡性腫瘤患者瘤體內(nèi)DNA 損傷的修復(fù)能力。為進(jìn)一步了解RCC1蛋白的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，本文遴選50 例胃癌患者進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，觀察組病灶組織中ERCC1 蛋白的陽性率相較于癌旁組織、對(duì)照組均更高，但觀察組癌旁組織中ERCC1 蛋白的陽性率與對(duì)照組相比無明顯差異；Pearson 相關(guān)性分析顯示，ERCC1 蛋白陽性率與胃癌患者的年齡、性別無關(guān)，與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度呈正相關(guān)。可見，ERCC1蛋白在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)情況，可準(zhǔn)確反映本病的發(fā)生、進(jìn)展情況，為臨床評(píng)估患者的病情提供參考。研究發(fā)現(xiàn)，基因損傷程度主要取決于致癌物的劑量及細(xì)胞修復(fù)受損基因的能力，細(xì)胞受損多比細(xì)胞受損少的患者更容易出現(xiàn)免疫逃逸現(xiàn)象，可避開正常免疫監(jiān)管，因此腫瘤增殖速度越快其惡性程度越高[11]。ERCC1 轉(zhuǎn)錄、翻譯的蛋白質(zhì)可及時(shí)對(duì)受損的DNA 進(jìn)行修復(fù)，確保機(jī)體內(nèi)突變的基因得到修復(fù)，達(dá)到預(yù)防癌細(xì)胞持續(xù)進(jìn)展的目的，從而可降低腫瘤的發(fā)生率或延緩腫瘤的進(jìn)展[12-14]。查閱資料[15]發(fā)現(xiàn)，臨床關(guān)于ERCC1 蛋白在癌癥患者預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值存在分歧，但近年來隨著相關(guān)研究的深入，發(fā)現(xiàn)ERCC1 在輔助化療中的預(yù)測(cè)效果理想，且在非小細(xì)胞肺癌中獲得了良好的預(yù)測(cè)效果，因此后期可就ERCC1 蛋白預(yù)測(cè)胃癌患者預(yù)后的價(jià)值進(jìn)行系統(tǒng)分析。

綜上所述，ERCC1 蛋白在胃癌組織中呈高表達(dá)，可反映胃癌的嚴(yán)重程度、分期、分化程度等，為本病的臨床診治提供參考。但本研究設(shè)計(jì)方案較為簡(jiǎn)單，存在納入樣本數(shù)量有限、觀察指標(biāo)少等問題，通過對(duì)比雖可證實(shí)ERCC1 蛋白在胃癌病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值，但無法規(guī)避研究偏倚性，鑒于此，后期需優(yōu)化研究設(shè)計(jì)方案，為相關(guān)研究及臨床治療提供參考和指導(dǎo)。